专利名称：一种高效毛细管电泳拆分检测茶氨酸对映体的方法
技术领域：
一种高效毛细管电泳拆分检测茶氨酸对映体的方法，属于对映体的拆分和检测技术领域。
背景技术：
对映体的拆分和检测在分离学科上曾被认为是最困难的工作之一。传统的拆分方 法有分步结晶、微生物和酶消化法等，但这些方法都难以进行微量的分离和测定。近年来高 效毛细管电泳技术应用于对映体拆分检测发展极为迅速，这种技术有如下优势①基本不 存在柱污染问题；②实验成本低，消耗少；③分析速度快，分离效率高；④操作模式多。基于 以上优势，毛细管电泳的手性分离己经成为一个极其活跃的热门领域。高效毛细管电泳用 于手性拆分时需在缓冲溶液中加入手性选择剂，构建手性选择环境，利用其与对映体间的 作用差异进行分离。目前国内外文献还没有采用毛细管电泳技术分离检测茶氨酸对映体的 报道，本发明利用该技术建立了一种分离效果好、灵敏度高的分析方法应用于茶氨酸对映 体的分析检测。
发明内容
本发明的目的提供一种高效毛细管电泳拆分检测茶氨酸对映体的方法，以 β -环糊精及其衍生物为手性选择剂，构建手性选择环境，分离和分析茶氨酸对映体，为茶 氨酸的研究开发提供技术保障。本发明的技术方案一种高效毛细管电泳拆分检测茶氨酸对映体的方法，步骤如 下
(1)选用PH值为1(Γ12硼酸盐缓冲液体系，在该硼酸盐缓冲液体系中加入浓度为 2(T30mmOl/L手性选择试剂，超声脱气30-40min，用0. 45Mm微孔滤膜过滤，过滤完毕继续超 声脱气2(T30min ；
(2)用去离子水配置茶氨酸样品，浓度为0.Γ2. Omg/mL ；
(3)调节毛细管电泳参数为分离电压为15 30KV，毛细管温度2(T30°C，压力进样 3kPaXk，紫外检测波长220180 nm ；正极进茶氨酸样品，负极检测；
(4)在所述毛细管电泳参数下使茶氨酸对映体达到基线分离；
所述手性选择试剂为β-环糊精，羟乙基-β-环糊精，羟丙基-β-环糊精，磺酰 化-β -环糊精或葡萄糖基-β -环糊精。本发明的有益效果本发明与传统手性分离相比具有分离效果好，无污染，低成 本，分析时间短等优点。
图1实施例1茶氨酸对映体的电泳图。图2实施例2茶氨酸对映体的电泳图。
图3实施例3茶氨酸对映体的电泳图。
具体实施例方式以下给出实施例，对本发明作进一步说明。实施例1
采用PH值为11硼酸盐溶液为缓冲液，加入20 mmol/L β _环糊精作为手性选择试剂， 缓冲液先超声脱气40min后过0. 45Mm微孔滤膜，再超声脱气20min。用去离子水配置茶氨 酸样品，浓度为0. lmg/mL，实验使用的仪器为Beckman公司P/ACE MDQ毛细管电泳系统，毛 细管电泳条件参数为分离电压为20KV ；毛细管温度20°C;压力进样3kPaXk ；紫外检测波 长观0 nm;正极进茶氨酸样品，负极检测。茶氨酸对映体的电泳图见图1。实施例2
采用PH值为12硼酸盐溶液为缓冲液，加入30 mmol/L羟乙基-β-环糊精作为手性选 择试剂，缓冲液先超声脱气30min后过0. 45Mm微孔滤膜，再超声脱气20min。用去离子水配 置茶氨酸样品，浓度为1. Omg/mL,实验使用的仪器为Beckman公司P/ACE MDQ毛细管电泳系 统，毛细管电泳条件参数为分离电压为30KV ；毛细管温度25°C ；压力进样3kPaXk ；紫外 检测波长观0 nm;正极进茶氨酸样品，负极检测。茶氨酸对映体的电泳图见图2。实施例3
采用PH值为12硼酸盐溶液为缓冲液，加入25 mmol/L葡萄糖基-β -环糊精作为手性 选择试剂，缓冲液先超声脱气30min后过0. 45Mm微孔滤膜，再超声脱气20min。用去离子水 配置茶氨酸样品，浓度为2. Omg/mL,实验使用的仪器为Beckman公司P/ACE MDQ毛细管电泳 系统，毛细管电泳条件参数同实施例1。茶氨酸对映体的电泳图见图3。
权利要求
1. 一种高效毛细管电泳拆分检测茶氨酸对映体的方法，其特征在于步骤如下(1)选用PH值为1(Γ12硼酸盐缓冲液体系，在该硼酸盐缓冲液体系中加入浓度为 20^30mmol/L手性选择试剂，超声脱气30-40min，用0. 45Mm微孔滤膜过滤，过滤完毕继续超 声脱气2(T30min ；(2)用去离子水配置茶氨酸样品，浓度为0.Γ2. Omg/mL ；(3)调节毛细管电泳参数为分离电压为15 30KV，毛细管温度2(T30°C，压力进样 3kPaXk，紫外检测波长220180 nm ；正极进茶氨酸样品，负极检测；(4)在所述毛细管电泳参数下使茶氨酸对映体达到基线分离；所述手性选择试剂为β-环糊精，羟乙基-β-环糊精，羟丙基-β-环糊精，磺酰 化-β -环糊精或葡萄糖基-β -环糊精。
全文摘要
一种高效毛细管电泳拆分检测茶氨酸对映体的方法，属于对映体的拆分和检测技术领域。本发明确定了茶氨酸分离所需的手性拆分环境选用pH值为10~12硼酸盐缓冲液体系，在该缓冲液中加入手性选择试剂。配置茶氨酸样品，浓度为0.1~2.0mg/mL，在毛细管电泳分离电压为15~30kV的条件下茶氨酸对映体达到基线分离。该方法分离效果好，无污染，低成本，适合于茶氨酸对映体的分析检测。
文档编号G01N27/447GK102095775SQ20101056801
公开日2011年6月15日 申请日期2010年12月1日 优先权日2010年12月1日
发明者丁绍东, 戴军, 朱松, 李玥, 王洪新, 陈培培, 陈尚卫 申请人:江南大学