专利名称：一步检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种一步检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条。
背景技术：
鸡新城疫(Newcastle Disease，ND) —直是给养鸡业带来重大危害的疫病，被国 际兽医局(OIE)列为A类传染病，该病对世界贸易有较大的商业影响。传染性支气管炎 (InfectiousBrochitis, IB)是由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的危害呼吸和泌尿生殖 道的急性传染病，鸡群一经感染，引起巨大经济损失。两种病鸡的临床症状有很大的差异， 不同宿主对感染后的反应也不一样，这使诊断更为复杂和困难，单一临床和病变不能作为 诊断的依据，因此，建立可诊断新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条有现实意义。胶体金免疫层析技术是20世纪80年代发展起来的一项新技术，具有简便、快速、 准确、费用低的特点，且由于为干试条形式，无需低温保存，储运也方便，但是目前尚未见有 可同时检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条。发明内容本实用新型的目的是提供一种一步检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸 条，它能满足现有技术的上述需求。—步检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条，有一底衬、该底衬上面的中 部粘帖一包被膜，其特征在于该包被膜中部有一条包被鸡新城疫病毒的抗体的检测线、一 条包被鸡传染性支气管炎病毒的抗体的检测线和一条包被抗鼠IgG抗体的控制线，包被膜 的上面左右分别粘帖一涂覆金标抗体的玻璃纤维膜和吸水纸；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜 上面粘贴一样品垫。本实用新型利用现代国际最先进的胶体金免疫层析技术，提供一种现地农户、基 层自测等用的可以同时检测鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的胶体金试纸条，该试 纸条具有特异性强、灵敏度高、检测速度快等优点，且不需使用仪器设备，成本低廉，操作简 便。
附图为本实用新型的纵剖结构示意图。
具体实施方式
本实用新型一步检测新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条，如图所示，有一底 衬1、该底衬1上面的中部粘帖一包被膜4，该包被膜4中部有一条包被新城疫抗体的检测 线6，检测线6中包被的鸡新城疫病毒的抗体为单克隆抗体和/或多克隆抗体；一条包被传 染性支气管炎抗体的检测线7，检测线7中包被的鸡传染性支气管炎病毒的抗体为单克隆 抗体和/或多克隆抗体；和一条包被抗鼠IgG抗体的控制线8，包被膜4的上面左右分别粘 帖一涂覆金标抗体的玻璃纤维膜3和吸水纸5 ；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜3上面粘贴一 样品垫2。制造本实用新型的步骤如下用BALB/C小鼠分别免疫新城疫病毒和传染性支气管炎病毒，取其脾细胞与SP2/0 细胞融合建立瘤细胞株，进行筛选，取瘤细胞注射于BALB/C小鼠腹腔，使其产生腹水。提取小鼠腹水进行纯化筛选，分别获得能与新城疫病毒和传染性支气管炎病毒产生中和反应的 单克隆抗体用于胶体金标记。制备包被膜4时，将0. 05M、pH9. 6的碳酸盐缓冲液(PBS)用0. 22u膜过滤，制成 包被缓冲液。另将20g牛血清白蛋白(BSA)和20g脱脂奶溶于IOOOmlO. 01Μ、ρΗ7· 0的PBS 用0. 22u膜过滤，制成封闭工作液。调试喷膜机，用上述包被缓冲液稀释新城疫病毒的单克 隆抗体、传染性支气管炎病毒的单克隆抗体和抗鼠IgG多克隆抗体，分别在硝酸纤维膜中 部上划线，间隔5mm，应细致均勻，室温晾干20分钟，该三线用的液体分别渗入硝酸纤维膜 中，即分别为新城疫病毒的检测线6、传染性支气管炎病毒的检测线7和控制线8。用上述 封闭工作液将硝酸纤维膜于37°C封闭60分钟，取出后置于37°C烘干处理两小时，制成包被 膜4。制造涂覆金标抗体的玻璃纤维膜3时，将IOg氯金酸用IOOOml双蒸水溶解，配成 水溶液；将IOg柠檬酸三钠用IOOOml双蒸水溶解，配成水溶液；将13. 8g碳酸钾溶于IOOOml 双蒸水，用0. 22u膜过滤，配制成碳酸钾水溶液；将20g BSA溶于IOOOml 0. 01M、pH7. 0的 PBS中，用0. 22u膜过滤配成标记洗涤液；将IOg BSA、5g脱脂奶粉、0. 5g叠氮钠(NaN3)和 Iml 吐温-20 (Tween-20)在 IOOOml 0. 01M、pH 7. OPBS 中溶解，用 0. 22u 膜滤过，配成金标 抗体保存液。用双蒸水将1 %氯金酸稀释成0. 01 %，置电炉煮沸，按每100毫升0. 01 %氯 金酸加入4毫升柠檬酸三纳，继续煮沸，直到液体呈亮红色即停止加热，冷却至室温后 补足失水。外观应纯净，透亮，无沉淀和漂浮物，即为烧制成的胶体金。用0. IM碳酸钾水溶 液调胶体金的PH值至7. 6，按20微克抗体/毫升的胶体金同时加入抗鸡新城疫病毒的单 克隆抗体和抗鸡传染性支气管炎病毒的单克隆抗体，混勻，静置30分钟，以12000rpm离心 30分钟，弃去上清液，将所得沉淀用标记洗涤液洗涤两次，最后一次弃去上清液，将所得沉 淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，配制成金标抗体。将上述标记好的 标抗体均勻地涂敷在玻璃纤维膜上，每毫升溶液涂敷铺10平方厘米，干燥，制得涂覆金标 抗体的玻璃纤维膜3。所述底衬1、样品垫2和吸水纸5是本领域通用的部件。将上述包被膜4、涂覆金 标抗体的玻璃纤维膜3、底衬1、样品垫2和吸水纸5按照本实用新型的结构粘贴起来，得到 试纸板，最后将该试纸板切割成不同宽度的试纸条即可。使用实用新型时，在试纸条的检测线6、检测线7和控制线8位置上各出现一条紫 红色条带，鸡新城疫和传染性支气管炎病毒均为阳性结果；在试纸条的检测线6和控制线8 位置上各出现一条紫红色条带，鸡新城疫病毒为阳性结果；在试纸条的检测线7和控制线 8位置上各出现一条紫红色条带，鸡传染性支气管炎病毒为阳性结果；仅试纸条的控制线8 位置上出现一条紫红色条带，为阴性结果；在试纸条的控制线8位置上未出现紫红色条带 为无效结果。
权利要求1.一步检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条，有一底衬(1)、该底衬(1)上面 的中部粘帖一包被膜G)，其特征在于该包被膜中部有一条包被鸡新城疫病毒的抗体 的检测线(6)、一条包被鸡传染性支气管炎病毒的抗体的检测线(7)和一条包被抗鼠IgG抗 体的控制线(8)，包被膜(4)的上面左右分别粘帖一涂覆金标抗体的玻璃纤维膜C3)和吸水 纸(5)；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜C3)上面粘贴一样品垫O)。
2.根据权利要求1所述的一步检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条，其特征 在于所述的检测线(6)中包被的鸡新城疫病毒的抗体为单克隆抗体和/或多克隆抗体。
3.根据权利要求1所述的一步检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条，其特征 在于所述的检测线(7)中包被的鸡传染性支气管炎病毒的抗体为单克隆抗体和/或多克隆 抗体。
4.根据权利要求1所述的一步检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条，其特征 在于所述的涂覆金标抗体的玻璃纤维膜(3)中有由胶体金颗粒标记的抗鸡新城疫病毒和 抗鸡传染性支气管炎病毒的单克隆抗体。
专利摘要一步检测鸡新城疫和传染性支气管炎病毒的试纸条，有一底衬、该底衬上面的中部粘帖一包被膜，其特征在于该包被膜中部有一条包被新城疫抗体的检测线、一条包被传染性支气管炎抗体的检测线和一条包被抗鼠IgG抗体的控制线，包被膜的上面左右分别粘帖一涂覆金标抗体的玻璃纤维膜和吸水纸；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜上面粘贴一样品垫。本实用新型利用现代国际最先进的胶体金免疫层析技术，提供一种现地农户、基层自测等用的可以同时检测鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的胶体金试纸条，该试纸条具有特异性强、灵敏度高、检测速度快等优点，且不需使用仪器设备，成本低廉，操作简便。
文档编号G01N33/569GK201845015SQ20102019148
公开日2011年5月25日 申请日期2010年5月5日 优先权日2010年5月5日
发明者凌红丽, 宋新宇, 蒋贻海, 马凤燕, 高亚东, 魏笑笑 申请人:青岛宝依特生物制药有限公司, 青岛康地恩药业有限公司