时间控制荧光检测装置的制作方法

专利名称：时间控制荧光检测装置的制作方法
技术领域：
本发明涉及DNA测序领域，特别是采用时间控制的荧光检测来识别DNA碱基的DNA 测序。特别地，本发明涉及一种用于DNA测序应用的时间控制的荧光检测装置，包括-容纳区域，用于容纳测序反应组分-第一光源，能够以第一波长发射第一光脉冲，以及第二光源，能够以第二波长发射第二光脉冲，第一波长不同于第二波长，且第一和第二光脉冲交替入射到容纳区域-检测器像素，与容纳区域配合设置，用于检测从容纳区域发出的光，包括-检测器-输出端，用于传递来自于检测器像素的电信号-选通工具，对检测器进行选通，所述检测器设置为不能检测到由第一和第二光源发出的第一和第二光脉冲。
背景技术：
DNA(脱氧核糖核酸)测序已开展很多年。核酸的构建单元含有所有已知生物体的生长和功能化中采用的遗传指令，识别核酸构建单元的基本概念已经从发现编码扩展到希望使用基因信息来治疗疾病。DNA分子的主要作用是长期存储信息。在其它的功能中，它包括构建细胞组分所需的指令，其片段称为基因。在化学上，DNA由两股长的、被称为核苷酸的简单单元的聚合物组成，这两条链的转动方向相反。两条链之间的骨架由通过酯键连接的糖和磷酸基组成。 连接在每个糖上的分子是称为碱基的四种分子之一，这四种分子为A，C，G或T。就是这四种碱基沿骨架排列的顺序编码着信息。通过识别这些碱基和它们的顺序，就能够获取很多的信息。作为标准的DNA测序技术，Sanger方法已经采用很多年了。这种方法费用十分昂贵，而且耗费时间长。为了使测序更高效和成本上可以接受，已经研发出了其他的技术。许多新技术都依赖荧光成像来识别碱基，被称为碱基判定。荧光部分连接在一种特定种类的碱基上。通过吸收已知波长的光，核苷酸受激发发出荧光。发射出的荧光的波长是已知的、而且略有不同。检测到荧光表明存在特定碱基。存在单色荧光系统，其中用含有测序试剂的不同流体依次冲洗样品，荧光表明在DNA样品中存在不同的DNA碱基。另一种已知的荧光成像技术称为四色荧光，即使用四种不同波长的光，由此允许在测序装置上同时存在四种类型的核苷酸(测序反应所需要的)。从而可以减少装置中的流体交换(其非常缓慢)或者将其保持在最小水平。美国专利申请US2006/0139634中描述了一种四色荧光成像技术。Lewis等人 (PNAS，2005，Vol 102, No 15，p5346)的其他著作中详述了一种时间色彩闪烁技术，其采用连续波激光器、闭塞滤波器和复杂的准直光学系统来完成对给定DNA碱基的检测。其他的工作集中于荧光衰变时间常数辨别，如Zhu等人(Anal. Chem.，2003，Vol 75，No 10，P2280)。基因测序的进一步改进在于整个基因组测序，或者在于产生巨大医疗效益如癌症等疾病的重测序方面。上述装置和方法的问题在于获取测序信息的缓慢的解题时间(throughput time)ο

发明内容
本发明的目的在于提高获取测序结果的速度。本发明的目的通过提供一种用于DNA测序应用的时间控制的荧光检测装置来实现，该装置包括检测器像素，还包括-第一累加器和第二累加器，所述第一累加器和第二累加器与检测器和输出端配合设置，-第一累加器专用于收集来自检测器的响应于第一光脉冲入射到测序反应组分的电信号-第二累加器专用于收集来自检测器的响应于第二光脉冲入射到测序反应组分的电信号。测序反应组分包括待测序的DNA样品，以及分别与DNA样品中特定的第一和第二碱基相关联的第一和第二荧光标记的核苷酸。来自于光源的第一光脉冲设置为响应于第一荧光标记的核苷酸的强吸收，从而分子吸收光能量，随后所述光能量以不同波长的荧光被释放。第二光脉冲以同样的方式与第二荧光标记的核苷酸配合，第二荧光的波长不同于第一荧光的波长。因此，检测到来自第一或第二光脉冲的荧光表明了存在第一或第二碱基。检测器将检测信息传递到累加器。在本发明的另一实施例中，输出端设置为提供第一和第二累加器的状态。在特定光脉冲到达测序反应组分后，通过将特定累加器与荧光发射联系起来，累加器成为直接判定被检测DNA碱基的装置。累加器中电信号的积累大于所预期的背景噪声或者大于设定的阈值，表明了对于特定碱基的荧光响应。因此，就碱基的存在而言，累加器提供了是/否或1/0的状态。之后该状态可以成为像素的输出，而不需要提供进一步的电子处理或缓慢的模拟信号信息的转换。在本发明的另一实施例中，第一和第二累加器的内容设置为通过输出端周期性传递至处理装置。累加器中的信息可以被读出，作为部分信息传递到外部电路或装置。由于采用了累加器已经有利于碱基的判定，因此信息获取的速度比现有的测序方法极大提高。在本发明的另一实施例中，该装置还包括能够以第三波长发射第三光脉冲的第三光源，以及能够以第四波长发射第四光脉冲的第四光源，第三波长不同于第四波长，且第三和第四光脉冲依次并且与第一和第二光脉冲顺序地入射到容纳区域。在本发明的另一实施例中，检测器像素还包括-第三累加器，专用于收集来自检测器的响应于第三光脉冲入射到测序反应组分的电信号和-第四累加器，专用于收集来自检测器的响应于第四光脉冲入射到测序反应组分的电信号。这些实施例描述了所有四种DNA碱基将被同时研究并且对于每个碱基专用光源和累加器的最佳情形。在本发明的另一实施例中，第一、第二、第三、或第四光源包括脉冲激光器。脉冲激光器，或者脉冲激光器二极管是一个与其它光源相比具有窄光谱线宽的光源。这种窄线宽避免了辐射光谱的交叉污染问题。当采用其他光源，由于不同光脉冲的光谱重叠而产生上述交叉污染。在本发明的另一实施例中，脉冲激光器以IOns至Iys范围为周期进行发射，最优选以IOOns至400ns范围为周期进行发射。在本发明的另一实施例中，第一和第二脉冲激光器依次发射的时间差为IOns到 1 μ s，最优选为100ns。单个激光器或两个激光器顺序发射的周期是在所期望的测序处理速度和检测器提供清晰信号的能力之间的一种折衷，以获得好的信噪比特性，该好的信噪比特性能够被转换成可靠的碱基判定。激光器的重复频率应尽可能短，以尽可能多地激发荧光光子，但是在SPAD装置中，噪音由已知的寄生脉冲(after-pulsing)效应引起，此效应随时间而减弱 (即暂停时间越长，影响信号的噪音越弱)。噪音水平是由检测器的硅质量确定的，但是通常IOOns的脉冲间隔是有效的。将差分重复频率(differential repetition rate)乘以激光器数量，能够确定激
光的重复频率。在本发明的另一实施例中，检测器包括SPAD阵列。SPAD阵列对单个光子发射敏感，具有低噪音特点并且可以和CMOS晶体管电路一起用来处理来自于SPAD的信号，从而将单个光子转换成数字位。这使得SPAD检测器相对于例如CCD或(独立的)CMOS等更慢以及更多噪音的检测器来讲具有优势。在本发明的另一实施例中，检测器像素还包括至少一种查找表格，该至少一个查找表格设置为检测器像素上的存储器。查找表格可用于改正偏差的累加器值，所述偏差可以由例如检测器中所检测光的色彩或波长之间的量子效率差异所引起。优选在进行碱基判定之前完成查找表格信息，以确保碱基判定结果的精确性。在本发明的另一实施例中，本发明所述的装置包含在具有许多该装置的阵列中。在这个方式中，与用于容纳测序反应组分的容纳区域配对使用的检测器像素设置在阵列中。例如，阵列可以是一维或二维的。由此，所述阵列可以对测序反应和碱基进行单独检测，从而可以与高密度或中等密度测序相比较。高密度测序的实例是SOLID测序，其中采用了具有数百万个样品的随机阵列。中等密度测序以Roche/4M生命科学方法为代表， 其使用了大约160万个样品井。在本发明的另一实施例中，本发明所述的装置包含在具有许多该装置的阵列中， 阵列中提供至少一个查找表格。查找表格可用于改正偏差的累加器值，所述偏差可以由例如检测器中所检测光的色彩或波长之间的量子效率差异所引起。优选在进行碱基判定之前完成查找表格中的信息，以确保碱基判定结果的精确性。


现在，将参考以下附图进一步说明本发明附图1为根据本发明装置的概略图，附图2显示了包括SPAD检测器和四个累加器的本发明实施例部分，附图3显示了包括查找表格的本发明实施例部分，附图4显示了根据本发明的脉冲激光器光源的连续发射，附图5显示了根据本发明在激光发射过程中检测器的选通，附图6显示了根据本发明的装置的阵列，附图7显示了用于装置的阵列的本发明另一实施例。
具体实施例方式本发明内容及其实施例中的测序并不局限于DNA，而且还涉及到以检测核酸的碱基对为最终目标的测序，如RNA，PNA, LNA。附图1描述了本发明所述的用于DNA测序用途的时间控制的荧光检测装置10。 容纳区域11用于放置将被测序的DNA样品、荧光标记的核苷酸、和其他测序反应所需的组分(未显示)。容纳区域11可以例如包括平坦的表面或在衬底上有穴凹(hollow)或井 (well)。该容纳区域11和检测器像素12配对使用。这里的术语“像素”被定义为装置区域，其专用于检测和处理从容纳区域11发出的光。该装置配置有第一光源13和第二光源 14，它们分别以第一波长发射第一光脉冲15，和以第二波长发射第二光脉冲16。第一波长不同于第二波长，且二者都是经过选择，从而使其能够和与待测序DNA样品中的特定DNA碱基A，C，G或T相关联的特定荧光之间产生最佳反应。第一光脉冲15入射到测序反应组分(未显示)。荧光标记的核苷酸(未显示)吸收来自第一光脉冲15的光，导致发射荧光，荧光17能够被安装在检测器像素12内或上的检测器18检测到。荧光17表明了特定DNA碱基的存在。第二光脉冲16与第一光脉冲依次或交替地入射到测序反应组分，以类似的方式与不同的荧光核苷酸反应以表明另一特定 DNA碱基的存在。该装置配置有选通工具19，选通工具19阻止检测器18直接检测到第一 15和第二 16光脉冲，因此只有荧光17被检测到。实际上这意味着在发射出第一光脉冲15 后存在检测周期，随后在第二光脉冲16发射并到达测序反应组分的过程中，通过选通工具 19使检测器处于待用状态(inactive)，在第二光脉冲16发射后，检测器被激活处于检测周期，之后在由第一光源13产生另一光脉冲之前通过选通工具19的动作再次使检测器处于待用状态。这种循环持续进行，伴随着第一 13和第二 14光源的交替发射。检测器像素12还包括第一累加器20和第二累加器21。第一累加器20专用于在第一光脉冲15到达测序反应组分后的检测间隔期间收集来自检测器18的检测信息。这样， 第一累加器20有效地专用于检测特定的DNA碱基。第二累加器21专用于在第二光脉冲16 到达测序反应组分后的检测间隔期间收集来自检测器18的检测信息。这样，类似地，第二累加器21专用于检测(不同的)特定DNA碱基。来自于累加器的关于碱基检测的信息通过检测器像素的输出端22来获取。附图2概略地描述了本发明实施例的一部分，检测器18是SPAD (单光子雪崩光电二极管)检测器23，设置为检测测序反应组分(未显示)发出的荧光17。该实施例包括四个脉冲光源(未显示)，该装置设置为检测四个DNA碱基A，C，G和T，并根据上述描述工作。 该实施例还包括四个累加器25，26，27和观，分别指示碱基A，C，G和T，根据四个光脉冲发射的信息，向该四个累加器提供与来自SPAD检测器23的检测荧光相关的信号信息M。开关四将SPAD检测器信息传递给正确的累加器25，26，27或观，来自于SPAD检测器23的信号信息一次只能供一个累加器使用。可以添加阈值处理装置(未显示)来评估累加器的容量，或者同期望的信号水平相比较，以提高DNA碱基判定的数据可靠性。该实施例中是针对于累加器进行了描述，但是为了简化像素设计，也可以使用1 位存储器作为累加器的替代。该实施例中是针对于SPAD检测器进行了描述，但也可使用其它检测器，特别是单光子检测器。然而，SPAD有显著优势。在附图2建议的示意图中，当脉冲光源如脉冲激光器打开时检测器是禁用的，当其关闭时检测器是可用的。在四种颜色的光以间隔IOns发射的情况下，一个IOns的检测时间不能保证准确性，但是1000次这样的事件就可以非常高精确度地判定一个碱基。总体来说，对这个例子而言，需要40 μ S。这比任一现有的测序方案的速度高出几个数量级。SPAD具有亚纳秒的响应速度，并且采用CMOS电路能够在一纳秒内被主动重置，其中CMOS电路和SPAD检测器位于同一硅衬底上。SPAD检测器中单光子的性质意味着数量可观的检测窗口不会检测到光子，其原因在于例如远离检测器的光子发射方向、检测器的不良量子效率、或者是引起检测器发射的噪音。可能只有10%的光子被检测到。然而，即使在(下限)40ns的周期内，大约能检测到100个光子。在室温下，2μπιΧ2μπι SPAD装置的热噪音大约为5计数/秒，由此在40 μ s内几乎可以忽略。假定对于特定碱基，80%的光子源自于正确的荧光。(尽管这可能有所不同——由于光谱叠加产生的干扰，一些现有设备只能达到40%至60% )。假定碱基结合至用于测序的DNA链的最大频率为IkHz左右。检测窗口可以增加几个数量级例如x250，对于25000个光子，可将计数误差从大约10 %降低到 0.6%，由此即使存在明显干扰的情况下，也允许高可信度。附图3显示了包括查找表格的本发明实施例的部分30。在碱基判定之前，累加器值传递到查找表格，如箭头36所示。如实施例中显示，提供了四个查找表格31，32，33和 34，但并不是总需要提供四个。在某些情况下只需要一个查找表格，例如要么每个查找表格单独供一个累加器使用，要么是一个查找表格供所有累加器25，26，27和观使用。提供查找表格31，32，33和34的必要性取决于装置检测所发出荧光的性能。检测器的效率根据色彩或波长而变化，这可能导致计数值产生偏差。查找表格31，32，33和34的作用是在任何碱基被判定前消除偏差，因而提高结果的质量和可靠性。数据的精确度是一个十分重要的问题，特别是当测序信息用于临床应用时尤其重要。最大计数可被传递(如箭头37所示) 至另一处理装置35并供其使用，以通过与其他累加器进行比较或与输出端22的已知阈值进行比较来判定碱基。例如，进行最大光子计数以实施碱基判定的检测器像素可包括硅衬底，该硅衬底能够提供带有深亚微米CMOS晶体管设备的SPAD装置(优选对从蓝色到深红和近红外波长敏感)。SPAD可使用反相器来缓冲，采用已知的方式使任何输出被反馈到SPAD中以产生主动的重新设置。如上所述，在像素水平上转换累加器使其能够进行碱基判定要求相关检测窗口同步化。累加器可以例如采用计数器和读出锁的数码方式，或者采用例如电荷泵的模拟方式，所述电荷泵将所存储的来自SPAD —次发射的少部分电荷循环到较大的存储电容器，当 SPAD的多次发射产生于多个检测窗口时，逐渐地增加电压。相关联的像素应该尽可能小，以便使得测序位点的密度最高。在检测硬件中使用深亚微米CMOS，可预见的有50 μ mX 50 μ m像素。附图4进一步说明了本发明所述的脉冲激光器光源的连续发射。该实施例描述了时间选择，该时间选择被认为是可能最佳的时间选择设置，但不能认为是对本发明的限制。脉冲光源，此处称为脉冲激光器，专用于检测四个DNA碱基A，C，G和T中的每一个。每个激光器的发射时间表38，39，40和41与相关联的DNA碱基一起显示在该图中。每个激光器(未显示)在用箭头42表示的周期内发射。用于该时间周期的最优周期大约是 400ns，特别是在IOOns至400ns之间，但是也可在IOns至1 μ s范围之间。不同激光器依次发射之间的延迟周期由箭头43指示，也可在IOns至Iys范围之间，但是优选在IOOns 至400ns范围之间。这里所有的延迟周期都示意为是一致的，但这不能理解为对本发明的限制。如此处所示，依次发射之间的延迟周期43为100ns，脉冲周期42为400ns。从附图可以看出，第一激光器发射38，并且第二激光器在时间周期43内发射。在这两次发射之间，检测器(未显示)可被设置为记录来自于测序反应组分(未显示)的任何荧光，荧光随后被分配用于指示DNA碱基A的存在。在第二和第三激光器顺序发射39，40 之间，检测到的荧光归因于DNA碱基C，等等。附图5显示了本发明所述的激光发射过程中检测器的选通。该图中显示了激光器的发射顺序44。为了清楚起见，此处仅考虑一个激光器(未示出)，但是检测器的选通适用于任何激光器或其它脉冲光源的发射。该检测器选通信号45也在附图中说明。检测器(未显示)在激光发射过程中被选通，以便激光没有被检测到。因此检测器专用于接收来自于测序反应试剂(未显示)的荧光，所述荧光是由初始激光入射到样品而激发的。两次延迟也在附图上说明，用箭头46和47指示。第一次延迟46由来自于激光器(同步地)的第一脉冲引起，之后就在激光器的下一次发射时间到来之前产生选通信号。接着，产生第二次延迟47以便保持选通信号处于可操作状态直到激光脉冲通过。这意味着没有选通第一激光脉冲，检测到的任何信号可被忽略。附图6显示了本发明所述装置的阵列48。可以想象一系列待测序的DNA样品或片段可以放置在如本发明所述的多个容纳区域内，每个容纳区域如前面所述与检测器、累加器等(未显示)配对使用，以便在每个检测器像素12中对每个DNA样品或片段进行碱基判定。在单个的装置10中，每一个脉冲光源可以向所有容纳区域提供光。因此，容纳区域 11、检测器像素12和输出端22可有多个，但是采用多个光源13或14或选通工具19不是优选的。随后，可以获取所述信息作为结果，而不是作为电子检测器输出而等待处理。这样减少了信息传递的负荷，并且加快了测序处理的速度。可以进一步设想，可以周期性地例如逐排的方式收集检测器像素12的输出，以便进一步加快处理速度。同样可以设想，采用一个或一组查找表格供一个以上或一组累加器使用。查找表格可以从检测器像素移出，放置到阵列结构的其他地方或阵列的外部。通过将多个检测器像素的输出传递到单个或数量减少的查找表格，处理测序信息的速度得到了提高。例如，与检测DNA碱基A相关的查找表格可以通过阵列上的单排检测器像素来获取，以此类推。如上所述，所述装置阵列有利于进行测序。激光器和检测器之间可以有一定的距离，然而由于电信号的延迟，两者之间的同步化存在困难。激光器必须同时照射更大的区域。这需要进一步改进。由于激光脉冲是亚纳秒级的，在整个检测器上的时间延迟变得太长而不能精确地选通所有像素。因此本发明中的进一步实施例包括同步效应，即检测每个检测器像素12或定义为组的少量检测器像素中的激光脉冲。可以产生相对于激光器对荧光检测器进行选通的局部信号。局部信号应当在装置中或装置附近产生，以便延迟保持最小，并且在阵列的不同区域，延迟保持相对恒定。也就是说，在整个阵列48中，激光检测和荧光检测之间的距离应该尽可能标准化。附图7进一步显示了根据本发明的装置阵列的另一实施例，优选选项显示在附图中。激光器和荧光检测亚像素(subpixel)被限定在阵列48上，这里的术语亚像素是指现有每一个配对的容纳区域11和检测器像素12构成较大组中的一部分，每对中的检测器具有与激光或荧光相关的特定作用。在附图7中，中间的亚像素49用于检测激光脉冲，由此对于附近荧光像素50触发产生选通时钟。激光和荧光亚像素也可以采用其它形状和设置， 并且或多或少的荧光检测亚像素50可与激光检测像素49相连。为了便于所述设置，测序阵列必须和检测器匹配。如附图7中所示的实施例，其意味着在每一个3X3测序位点或容纳区域11中，中间位点或容纳区域11应该是不起作用并优选地散射的。散射位点优选使得激光光子能够强烈地冲向检测器，以便激光检测亚像素能尽早地检测到激光脉冲的起始，从而减少进行荧光检测的机会。优选地是中间位点或容纳区域11应该不起作用，即不能产生荧光。如上所述，可以对单个装置进行荧光亚像素的选通。上文已经对本发明的来自单个DNA碱基的单个荧光发射进行了描述。然而，这不能理解为对本发明的限制，其原因是可以设计测序方法从而所述荧光发射指示序列中的两个或更多邻近DNA碱基。例如，荧光基团可以与序列上的两个耦合在一起的DNA碱基相连， 测序反应可设计为同时确定两个耦合DNA碱基的存在。例如连接法测序(sequencing of ligation)。根据荧光是如何定义和利用的，本发明可以采用同样的方式应用到单个碱基。附图标记列表
10装置
11容纳区域
12检测器像素
13第— 光源
14第二.光源
15第— 光脉冲
16第二.光脉冲
17荧光
18检测器
19选通工具
20第— 累加器
21第二.累加器
22输出端
23SPAD检测器
24信号信息指示
25累加器
26累加器
27累加器
28累加器
29开关
30包括查找表格的本发明实施例
31查找表格
32查找表格
33查找表格
34查找表格
35处理装置
36指示信息从累加器传递至查找表格的箭头
37指示信息从查找表格传递至处理装置的箭头
38用于DNA碱基A的激光发射时间表
39用于DNA碱基C的激光发射时间表
40用于DNA碱基G的激光发射时间表
41用于DNA碱基T的激光发射时间表
42指示单激光器发射周期的箭头
43指示依次发射的激光器之间发射周期的箭头
44激光发射顺序
45检测器选通信号
46延迟1
47延迟2
48阵列
49激光检测亚像素
50荧光检测亚像素。
权利要求
1.用于DNA测序应用的时间控制的荧光检测装置，包括 -容纳区域，用于容纳测序反应组分-第一光源，能够以第一波长发射第一光脉冲，以及第二光源，能够以第二波长发射第二光脉冲，第一波长不同于第二波长，且第一和第二光脉冲交替入射到容纳区域 -检测器像素，与容纳区域配合设置，用于检测从容纳区域发出的光，包括 -检测器-输出端，用于传递来自于检测器像素的电信号-选通工具，对检测器进行选通，所述检测器设置为不能检测到由第一和第二光源发出的第一和第二光脉冲其特征在于检测器像素进一步包括第一累加器和第二累加器，所述第一累加器和第二累加器与检测器和输出端配合设置，-第一累加器专用于收集来自检测器的响应于第一光脉冲入射到测序反应组分的电信号-第二累加器专用于收集来自检测器的响应于第二光脉冲入射到测序反应组分的电信号。
2.如权利要求1所述的装置，其中输出端设置为提供第一和第二累加器的状态。
3.如权利要求1或2所述的装置，其中第一和第二累加器的内容通过输出端周期性传递至处理装置。
4.如权利要求1或2或3所述的装置，其中该装置进一步包括能够以第三波长发射第三光脉冲的第三光源，以及能够以第四波长发射第四光脉冲的第四光源，第三波长不同于第四波长，且第三和第四光脉冲依次并且与第一和第二光脉冲顺序地入射到容纳区域。
5.如权利要求4中所述的装置，其中检测器像素进一步包括第三累加器，专用于收集来自检测器的响应于第三光脉冲入射到测序反应组分的电信号禾口第四累加器，专用于收集来自检测器的响应于第四光脉冲入射到测序反应组分的电信号。
6.根据上述任一权利要求所述的装置，其中第一、第二、第三或第四光源包括脉冲激光ο
7.根据权利要求6所述的装置，其中脉冲激光器以IOns至1μ s范围为周期进行脉动， 最优选以IOOns至400ns范围为周期进行脉动。
8.根据权利要求6所述的装置，其中脉冲激光器的两次依次发射之间的时间差在IOns 至1μ s之间，最优选为100ns。
9.根据上述任一权利要求所述的装置，其中检测器包括SPAD阵列。
10.根据权利要求1至4所述的装置，其中检测器像素进一步包括至少一个查找表格， 该至少一个查找表格设置为检测器像素上的存储器。
11.包括多个根据上述任一权利要求所述的装置的阵列。
12.包括多个根据权利要求1至9任一项所述装置的阵列，其中在阵列中提供至少一个查找表格。
全文摘要
本发明提供一种DNA测序的装置，包括在检测早期阶段的DNA碱基判定以及为DNA测序应用进行时间控制的荧光检测的处理。
文档编号G01N21/64GK102395874SQ201080016902
公开日2012年3月28日 申请日期2010年4月6日 优先权日2009年4月15日
发明者D·A·菲什 申请人:皇家飞利浦电子股份有限公司