专利名称：川麦冬药材中黄酮类成分的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种中药测定方法，特别涉及一种川麦冬药材中黄酮类成分的含量测定方法。
背景技术：
川麦冬主产于四川绵阳地区，以涪江冲积平原所产麦冬为佳品，又称涪江麦冬，含多种留体皂甙麦冬皂甙A、B、C、D，甙元均为假叶树皂甙元，另含麦冬皂甙B’、C’、D’，甙兀均为薯菌阜式兀；尚含多种黄酮类化合物如麦冬甲基黄烧酮A、B,麦冬黄烧酮A、麦冬黄酮A、B,甲基麦冬黄酮A，B ;另分得5个高异黄酮类化合物.麦冬具有养阴生津，润肺清心的功能。用于肺燥干咳，虚痨咳嗽，津伤口渴，心烦失 目民，内热消渴，肠燥便秘；咽白喉。目前已有一些文献报道麦冬的指纹图谱分析方法，但尚缺少对麦冬药材中黄酮类成分指纹图谱的研究，因此本实验对麦冬药材中黄酮类成分进行了指纹图谱的研究，以期为全面控制麦冬药材的质量提供参考依据。川麦冬药材中黄酮类成分的含量测定目前主要使用滴定法，该法操作复杂，精密度差，目前尚无更精确的测定方法，本发明采用HPLC法，获得了川麦冬药材中黄酮类成分指纹图谱，同时使用该法测定川麦冬药材中黄酮类成分的含量，取得了良好的效果。
发明内容
本发明提供一种川麦冬药材中黄酮类成分的含量测定，该方法包括以下步骤步骤I、对照品溶液的制备，分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、B、6_醛基异麦冬黄烷酮A适量，加甲醇溶解，分别制成甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B，6-醛基异麦冬黄烷酮A三种对照品溶液；步骤2、供试品溶液的制备，取川麦冬药材粉末用甲醇溶解，过C18柱，甲醇洗脱得供试品溶液；步骤3、将步骤I和步骤2注入HPLC仪器中，得到色谱图；步骤4、对图谱的相似性进行比较相似为含量合格。本发明中所述指纹图谱是HPLC的色谱图。另一种方法为(A)取合格的川麦冬药材粉末，按照上述方法建立川麦冬药材粉末标准指纹图谱；(B)取待检川麦冬药材粉末，按照上述方法得到指纹图谱；(C)将步骤⑶得到的指纹图谱和步骤㈧得到的标准指纹图谱进行比对，符合即为合格产品，不符合即为不合格产品。优选的本发明的测定方法，步骤如下步骤I、对照品溶液的制备，分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、B、6_醛基异麦冬黄烷酮A适量，加甲醇溶解，分别制成甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B，6-醛基异麦冬黄烷酮A三种对照品溶液。步骤2、供试品溶液的制备，取川麦冬药材粉末约6. Og,精密称定，用甲醇超声提取3次，每次30min，每次加甲醇50mL，合并提取液，过滤，蒸干，加水50mL使溶解，上自制C18小柱富集(80 100目，内径Icm,柱高为2cm,单个柱体积约为6ml,上样前用O. 5mol .L-1NaOH溶液处理，再加水平衡)，首先上样(流速O. 5ml · mirT1)，用4倍柱体积50%甲醇除去杂质(流速O. 5ml -mirT1),再用5倍柱体积甲醇洗脱目标物质(流速O. 3ml · mirT1)，将所得甲醇液蒸干，加甲醇溶解至5mL容量瓶，即得供试品溶液。步骤3、将步骤I和步骤2的溶液分别注入HPLC仪器中，得到色谱图，对图谱的相似性进行比较。步骤4、相似为含量合格。
本发明的色谱条件如下色谱柱WaterssymeteryC18 色谱柱(4. 6_X 150mm, 5 μ m);流动相A (O. 05%憐酸)-B (乙腈)，梯度洗脱(见表I)，柱温30°C，流速I. OmL · mirT1，检测波长296nm，进样量10 μ L0表I液相梯度洗脱条件
时间(min)_A 0.05%磷酸(％)_B 乙腈(％)
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54O100
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_60_80_20_本发明的方法是经过筛选获得的，研究过程如下I.仪器与试药Waters Alliance2695高效液相色谱仪,Waters2998检测器,Empower色谱工作站(美国Waters公司)，AL204电子天平，XS105梅特勒精密电子分析天平(梅特勒_托利多仪器(上海)有限公司)，KQ-500DE数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A对照品(自制，经光谱与色谱鉴定，纯度均达到98%以上)。10批川麦冬药材为市售药材，均来自四川雅安，经天津天士力之骄药业有限公司叶正良研究员鉴定为川麦冬。2.方法与结果2. I色谱条件色谱柱WaterssymeteryC18 色谱柱(4. 6_X 150mm, 5 μ m);流动相A (O. 05%憐酸)-B (乙腈)，梯度洗脱(见表I)，柱温30°C，流速I. OmL · mirT1，检测波长296nm，进样量IOyL0色谱图见图I。表I液相梯度洗脱条件时间(min)_A 0.05%磷酸(％)_B 乙腈(％)
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_60_80_20_2.2对照品溶液的制备分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、B、6_醛基异麦冬黄烷酮A适量，加甲醇溶解，分别制成甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B，6-醛基异麦冬黄烷酮A三种对照品溶液。2. 3供试品溶液的制备取川麦冬药材粉末约6. Og,精密称定，用甲醇超声提取3次，每次30min，每次加甲醇50mL，合并提取液，过滤，蒸干，加水50mL使溶解，上自制C18小柱富集(80 100目，内径Icm,柱高为2cm，单个柱体积约为6ml，上样前用O. 5mol · T1NaOH溶液处理，再加水平衡)，首先上样(流速O. 5ml · mirT1),用4倍柱体积50%甲醇除去杂质(流速O. 5ml · mirT1),再用5倍柱体积甲醇洗脱目标物质(流速O. 3ml mirT1)，将所得甲醇液蒸干，加甲醇溶解至5mL容量瓶，即得供试品溶液。2. 4精密度试验取同一供试品溶液，按“2. I”项下色谱条件连续进样6次，记录色谱图，结果各共有峰相对峰面积比值的RSD小于2. 82%，相对保留时间的RSD小于O. 20%，说明仪器的精
密度较好。2. 5重复性试验取同一批样品，按“2. 2”项下制备6份供试品溶液，按“2. I”项下色谱条件分别进样，记录色谱图，结果见表2和表3。结果各共有峰相对峰面积比值的RSD小于3. 01%，相对保留时间的RSD小于O. 31%，说明实验方法的重现性较好。表2重复性试验相对峰面积(η = 6)
权利要求
1.一种川麦冬药材中黄酮类成分的测定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤 步骤I、对照品溶液的制备，分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A适量，加甲醇溶解，分别制成甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B，6-醛基异麦冬黄烷酮A三种对照品溶液； 步骤2、供试品溶液的制备，取川麦冬药材粉末用甲醇溶解，过C18柱，甲醇洗脱得供试品溶液； 步骤3、将步骤I和步骤2注入HPLC仪器中，得到色谱图； 步骤4、对图谱的相似性进行比较相似为含量合格。
本发明中所述指纹图谱是HPLC的色谱图。
2.根据权利要求I的测定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤 步骤I、对照品溶液的制备，分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A适量，加甲醇溶解，分别制成甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B，6-醛基异麦冬黄烷酮A三种对照品溶液。
步骤2、供试品溶液的制备，取川麦冬药材粉末约6. Og，精密称定，用甲醇超声提取3次，每次30min,每次加甲醇50mL,合并提取液,过滤,蒸干，加水50mL使溶解,上自制C18小柱富集(80 100目，内径1cm，柱高为2cm，单个柱体积约为6ml，上样前用O. 5mol -L^1NaOH溶液处理，再加水平衡)，首先上样(流速O. 5ml · mirT1)，用4倍柱体积50%甲醇除去杂质(流速O. 5ml · mirT1)，再用5倍柱体积甲醇洗脱目标物质(流速O. 3ml · mirT1)，将所得甲醇液蒸干，加甲醇溶解至5mL容量瓶，即得供试品溶液。
步骤3、将步骤I和步骤2的溶液分别注入HPLC仪器中，得到色谱图，对图谱的相似性进行比较。
步骤4、相似为含量合格。
3.一种川麦冬药材中黄酮类成分的测定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤 (A)取合格的川麦冬药材粉末，按照上述方法建立川麦冬药材粉末标准指纹图谱； (B)取待检川麦冬药材粉末，按照上述方法得到指纹图谱； (C)将步骤(B)得到的指纹图谱和步骤(A)得到的标准指纹图谱进行比对，符合即为合格产品，不符合即为不合格产品。
4.根据权利要求I的测定方法，其特征在于，色谱条件如下 色谱柱Waters symeteryC18 色谱柱(4. 6mm X 150mm, 5 μ m);流动相A (O. 05 % 憐酸)-B (乙腈)，梯度洗脱(见表I)，柱温30°C，流速I. OmL · mirT1，检测波长296nm，进样量10 μ L0 液相梯度洗脱条件
5.根据权利要求I的测定方法，其特征在于，该方法精密度较好。
6.根据权利要求I的测定方法，其特征在于，该方法重现性较好。
7.根据权利要求I的测定方法，其特征在于，该方法在24小时内稳定。
全文摘要
本发明涉及一种川麦冬药材中黄酮类成分的测定方法，该方法包括以下步骤步骤1、对照品溶液的制备，分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A适量，加甲醇溶解，分别制成甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B，6-醛基异麦冬黄烷酮A三种对照品溶液；步骤2、供试品溶液的制备，取川麦冬药材粉末用甲醇溶解，过C18柱，甲醇洗脱得供试品溶液；步骤3、将步骤1和步骤2注入HPLC仪器中，得到色谱图；步骤4、对图谱的相似性进行比较相似为含量合格。
文档编号G01N30/06GK102759582SQ20111010904
公开日2012年10月31日 申请日期2011年4月28日 优先权日2011年4月28日
发明者叶正良, 周大铮, 李德坤, 贾诚 申请人:天津天士力之骄药业有限公司