专利名称：一种甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种抗体检测试剂盒及其制备方法，具体涉及一种甲型肝炎病毒IgM 抗体胶体金法检测试剂盒及其制备方法。
背景技术：
甲型肝炎(h印atitis A，简称HA)的病原体是甲型肝炎病毒(HAV)，为直径27nm 的小RNA病毒(picornavirus)。病毒存在于病人的粪便、血清、胆汁与肝细胞浆中，在体外抵抗力强，60°C加热4小时不死；能耐受pH 3. 0的环境；在低温下能长期存活。常用的甲型肝炎血清抗体的检查方法主要有血球凝集试验、酶联免疫试验、放免试验等，但由于血球凝集试验操作复杂、放免具有放射污染等固有的缺陷，酶联免疫现已成为临床应用最广的实验室检查方法之一。抗-HAV-IgM是甲肝早期诊断的主要指标。血清IgM的出现与临床症状及生化指标异常的时间一致，1-2个月后抗体滴度和阳性率下降， 3-4个月基本消失。但ELISA法操作复杂、检测时间长，需要对待测样品进行稀释、温育、分离、洗涤和显色等操作，大概需要用两个小时以上。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种可以快速定性检测血清样本中的甲型肝炎病毒IgM抗体的甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒。为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为一种甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒，包括硝酸纤维素膜检测线包被的重组抗原HAV-Ag、质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体和金标垫上包被的由胶体金标记的鼠抗人IgM单抗，所述重组甲型肝炎病毒抗原浓度大于ang/ml，用SDS-PAGE测定；所述羊抗鼠IgG抗体浓度大于％ig/ml ；所述鼠抗人IgM单抗浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定，上样量在10 μ 1条件下为两条带。本发明的另一个目的是提供一种根据所述的甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤(1)反应膜的制备用磷酸盐缓冲液将重组HAV-Ag稀释到包被浓度为1. Omg/ml, 将羊抗鼠IgG抗体稀释成包被浓度为2. Omg/ml，将两种包被液分别划到硝酸纤维素膜上， 将已包被的硝酸纤维素膜干燥后保存；(2)鼠抗人IgM单抗金结合物垫的制备将标记浓度为10-23μ g/ml的鼠抗人IgM 单抗与胶体金进行偶联制得胶体金标记鼠抗人IgM单抗溶液，以转速为12000r/min离心 40min，弃上清，加入胶体金结合物稀释液至原体积的1/2，然后用混合液浸泡金标垫，制备成HAV-IgM金结合物垫，将HAV-IgM金结合物垫干燥保存；(3)切割装配在反应膜所在胶板的上部揭去1. 5cm宽的不干胶纸，粘贴上粗纤维滤纸，使纸的下部压住反应膜，揭去反应膜下部的0. 9cm的不干胶纸，贴上HAV-IgM金结合物垫，并且金结合物垫的上部压住反应膜1mm，再揭去金结合物垫下部的的不干胶纸，贴上样品垫，样品垫的上部压住金结合物垫的下部1mm，制成反应板，再用切条机切成4mm试纸条，进行装卡后，装入铝箔袋内制成产品。上述制备方法中，所述步骤⑴和O)的干燥条件为37°C干燥3小时。上述制备方法中，所述步骤O)的鼠抗人IgM单抗的标记浓度为15μ g/ml。。本发明的有益效果为甲型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒具有快速、简便、准确和灵敏度高的特点，整个操作时间仅需20分钟就可以判读结果。胶体金快速检测试纸条，以多表位的重组抗原为原料，具有操作更加简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高的特点，可单份检测，易于普及，对于甲型肝炎病毒IgM的检测和控制效果明显。
具体实施例方式一、生产工艺条件的确定1、反应膜包被条件的优化1. 1检测线包被浓度和胶体金标记鼠抗人IgM稀释比例的选择按照确定好的标记条件进行标记，将其体积浓缩至原体积(原体积以胶体金体积计算)的1/10，再以不同的稀释比例稀释浓缩液，用稀释液浸泡金标垫，1.5ml/条，干燥后与以不同检测线包被浓度，0. 1 μ 1/mm的包被量包被好的HAV-IgM反应膜进行配对，检测内控血清。实验方案如表1，实验结果如表2、3 表 权利要求
1.一种甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒，包括硝酸纤维素膜检测线包被的重组抗原HAV-Ag、质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体和金标垫上包被的由胶体金标记的鼠抗人IgM单抗，其特征在于所述重组甲型肝炎病毒抗原浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定；所述羊抗鼠IgG抗体浓度大于％ig/ml ；所述鼠抗人IgM单抗浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定，上样量在10 μ 1条件下为两条带。
2.根据权利要求1所述的甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)反应膜的制备用磷酸盐缓冲液将重组HAV-Ag稀释到包被浓度为1.Omg/ml，将羊抗鼠IgG抗体稀释成包被浓度为2. Omg/ml，将两种包被液分别划到硝酸纤维素膜上，将已包被的硝酸纤维素膜干燥后保存；(2)鼠抗人IgM单抗金结合物垫的制备将标记浓度为10-23μ g/ml的鼠抗人IgM 单抗与胶体金进行偶联制得胶体金标记鼠抗人IgM单抗溶液，以转速为12000r/min离心 40min，弃上清，加入胶体金结合物稀释液至原体积的1/2，然后用混合液浸泡金标垫，制备成HAV-IgM金结合物垫，将HAV-IgM金结合物垫干燥保存；(3)切割装配在反应膜所在胶板的上部揭去1.5cm宽的不干胶纸，粘贴上粗纤维滤纸，使纸的下部压住反应膜，揭去反应膜下部的0. 9cm的不干胶纸，贴上HAV-IgM金结合物垫，并且金结合物垫的上部压住反应膜1mm，再揭去金结合物垫下部的的不干胶纸，贴上样品垫，样品垫的上部压住金结合物垫的下部1mm，制成反应板，再用切条机切成4mm试纸条， 进行装卡后，装入铝箔袋内制成产品。
3.根据权利要求2所述的甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述步骤(1)和(2)的干燥条件为37°C干燥3小时。
4.根据权利要求2所述的甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述步骤(2)的鼠抗人IgM单抗的标记浓度为15 μ g/ml。
全文摘要
本发明公开了一种甲型肝炎病毒IgM抗体胶体金法检测试剂盒，包括硝酸纤维素膜检测线包被的重组抗原HAV-Ag、质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体和金标垫上包被的由胶体金标记的鼠抗人IgM单抗，所述重组甲型肝炎病毒抗原浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定；所述羊抗鼠IgG抗体浓度大于4mg/ml；所述鼠抗人IgM单抗浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定，上样量在10μl条件下为两条带。本发明的有益效果为甲型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒具有快速、简便、准确和灵敏度高的特点，整个操作时间仅需20分钟就可以判读结果。胶体金快速检测试纸条，以多表位的重组抗原为原料，具有操作更加简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高的特点，可单份检测，易于普及，对于甲型肝炎病毒IgM的检测和控制效果明显。
文档编号G01N33/531GK102288758SQ20111021723
公开日2011年12月21日 申请日期2011年7月29日 优先权日2011年7月29日
发明者李习荣 申请人:北京中检安泰诊断科技有限公司