专利名称：去除干扰的干化学定量测试试条、谷丙或谷草转氨酶定量测试试条及检测方法
技术领域：
本发明涉及一种干化学测试试条及测试方法，尤其涉及一种转氨酶的干化学测试试条及检测方法。
背景技术：
干化学测试中的干扰物很多，比如氧化还原反应测定中的尿酸、抗坏血酸等的干扰，转氨酶检测中的丙酮酸干扰，尤其以转氨酶中的丙酮酸干扰较为严重。转氨酶的种类很多，其中以谷丙转氨酶(GPT/ALT)和谷草转氨酶(GOT/AST)最为重要。谷丙转氨酶又称丙氨酸氨基转移酶，是催化谷氨酸与丙酮酸之间的转氨作用；谷草转氨酶又称门冬氨酸氨基转移酶，是催化谷氨酸与草酰乙酸之间的转氨作用。临床上，全血、 血清、血浆、组织液中这两种转氨酶的测定，是心脏病、肌肉疾病、尤其是肝病诊断中非常重要的指标。临床上测定上述两种转氨酶的方法，主要是使用生化分析仪的液体试剂的方法， 此方法是利用乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶分别催化谷丙转氨酶产物丙酮酸和谷草转氨酶产物草酰乙酸脱氢，消耗烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)，引起吸光值在340nm的变化。此变化率与谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性有比例关系，从而得出酶活性。上文提到的反应如下谷丙转氨酶
权利要求
1.一种去除干扰的干化学定量测试试条，所述测试试条包括底衬，所述底衬上设置一固定有去干扰试剂和信号提供试剂的加样区，所述底衬上还设置一固定有测试反应启动试剂的启动区，其特征在于所述加样区和启动区是以在通常状态下保持非接触、在测试状态下可互相接触的方式布设在所述测试试条上。
2.根据权利要求1所述的去除干扰的干化学定量测试试条，其特征在于所述加样区直接固定在所述底衬上，所述启动区通过一粘结件连接在所述底衬上，该粘结件具有足够的高度使所述启动区的大部分区域悬置于所述加样区上方，且该启动区可通过下压与所述加样区保持接触。
3.根据权利要求1所述的去除干扰的干化学定量测试试条，其特征在于所述加样区和启动区被一分隔层隔开，该分隔层为可抽离式连接方式，以使得该分隔层被抽离出测试试条后所述加样区和启动区能保持接触。
4.根据权利要求1所述的去除干扰的干化学定量测试试条，其特征在于所述加样区直接固定在所述底衬上，所述启动区通过一铰接件铰接于所述底衬的一端，所述铰接件的转轴轴向与水平面平行或垂直，以使得启动区通过旋转后能与所述的加样区保持接触。
5.根据权利要求1所述的去除干扰的干化学定量测试试条，其特征在于所述加样区和启动区分别固定在所述底衬同一面的不同区域，所述加样区和启动区中间的底衬上设有一折痕线，以使得所述底衬沿折痕线弯折后能使启动区与加样区保持接触。
6.根据权利要求1 5中任一项所述的去除干扰的干化学定量测试试条，其特征在于 所述启动区上方覆盖有一保护层，所述保护层选用透明的聚碳酸酯或聚氯乙烯材料制作。
7.根据权利要求1 5中任一项所述的去除干扰的干化学定量测试试条，其特征在于 所述加样区包括固定于底衬上的流动垫、酶结合垫、滤血膜、样品垫、扩散层中的一种或叠加设置其中的多种。
8.根据权利要求6所述的去除干扰的干化学定量测试试条，其特征在于所述底衬选用聚氯乙烯、聚碳酸酯、聚酰胺高分子聚合材料制作，所述流动垫选用玻璃纤维、硝酸纤维素膜、聚酯纤维膜或滤纸制作，所述酶结合垫选用玻璃纤维、纤维素滤纸、聚酯纤维或滤纸制作，所述滤血膜选用不对称聚砜膜或玻璃纤维制作，所述样品垫选用玻璃纤维或聚酯纤维制作，所述扩散层选用聚酯纤维或尼龙纤维制成的网布形式。
9.一种用权利要求1 8中任一项所述的去除干扰的干化学定量测试试条检测生物酶的方法，包括以下步骤首先将待测样品液添加到所述测试试条的加样区，所述加样区上固定的去干扰试剂和信号提供试剂均复溶到待测样品液中，所述待测样品液中含有的内源性干扰物质与待测样品液中的去干扰试剂和信号提供试剂开始进行信号反应，经过一段孵化过程后，获取该信号反应的特征值，并以该特征值设定为内源性干扰物质的背景信号值；再使所述测试试条的启动区与加样区相接触，启动区上固定的测试反应启动试剂复溶到待测样品液中，并开始启动分析物的测试反应，测试反应启动后生成的产物再与所述信号提供试剂进行二次信号反应，根据二次信号反应测得的二次特征值和前述测得的背景信号值， 测算出待测生物酶的含量。
10.根据权利要求9所述的去除干扰的干化学定量测试试条检测生物酶的方法，其特征在于所述信号反应所产生的可识别信号为显色信号、荧光信号、化学发光信号中的一种。
11.一种谷丙或谷草转氨酶定量测试试条，其特征在于所述定量测试试条是由权利要求1 6中任一项所述的干化学定量测试试条制成，所述启动区上固定的测试反应启动试剂主要是指能够启动转氨酶反应的底物，所述加样区上固定的去干扰试剂包括丙酮酸氧化酶和过氧化物酶，所述加样区上固定的信号提供试剂包括适用于所述过氧化物酶的显色底物、荧光底物或化学发光底物。
12.一种谷丙或谷草转氨酶定量测试试条，其特征在于所述定量测试试条是由权利要求7或8所述的干化学定量测试试条制成，所述启动区上固定的测试反应启动试剂主要是指能够启动转氨酶反应的底物，所述加样区上固定的去干扰试剂包括丙酮酸氧化酶和过氧化物酶，所述加样区上固定的信号提供试剂包括适用于所述过氧化物酶的显色底物、荧光底物或化学发光底物；所述酶结合垫上设有滤血膜，所述滤血膜上设有样品垫，所述样品垫上设有扩散层。
13.根据权利要求11或12所述的谷丙或谷草转氨酶定量测试试条，其特征在于所述丙酮酸氧化酶的浓度为30KU/L 600KU/L，所述过氧化物酶的浓度为30KU/L 600KU/L， 所述显色底物、荧光底物或化学发光底物的浓度为ImM 50mM。
14.根据权利要求11或12所述的谷丙或谷草转氨酶定量测试试条，其特征在于所述启动转氨酶反应的底物包括α -酮戊二酸，所述α -酮戊二酸的浓度为5mM 300mM ；所述启动转氨酶反应的底物还包括用于检测谷丙转氨酶的L-丙氨酸或者用于检测谷草转氨酶的L-门冬氨酸，所述L-丙氨酸的浓度为0. OlM 1M，所述L-门冬氨酸的浓度为0. OlM 1M。
15.一种用权利要求11所述的谷丙或谷草转氨酶定量测试试条检测谷丙或谷草转氨酶的方法，包括以下步骤首先将待测样品液添加到所述测试试条的加样区，所述加样区上固定的丙酮酸氧化酶、过氧化物酶及显色底物均复溶到待测样品液中，所述待测样品液中含有的内源性干扰物质丙酮酸与待测样品液中的酶及显色底物开始进行显色反应，经过一段孵化过程后，获取该显色底物显色的反射率值，该反射率值即设定为内源性干扰物质的背景显色值；再使所述测试试条的启动区与加样区相接触，启动区上固定的底物复溶到待测样品液中，并开始启动转氨酶反应，转氨酶反应启动后生成的丙酮酸参与偶联反应，偶联反应后生成的双氧水与所述显色底物进行二次显色反应，根据显色底物显色的二次反射率值的终点或者变化率和所述背景显色值，通过终点法或速率法测定出谷丙或谷草转氨酶的含量。
16.一种用权利要求12所述的谷丙或谷草转氨酶定量测试试条检测谷丙或谷草转氨酶的方法，包括以下步骤首先将待测样品液滴加到所述测试试条加样区的扩散层上，使待测样品液依次流经样品垫和滤血膜并逐渐浸润到所述酶结合垫上，所述加样区上固定的丙酮酸氧化酶、过氧化物酶及显色底物均复溶到待测样品液中，所述待测样品液中含有的内源性干扰物质丙酮酸与待测样品液中的酶及显色底物开始进行显色反应，经过一段孵化过程后，获取显色剂显色的反射率值，该反射率值即设定为内源性干扰物质的背景显色值；再使所述测试试条的启动区与加样区相接触，启动区上固定的底物复溶到待测样品液中，并开始启动转氨酶反应，转氨酶反应启动后生成的丙酮酸参与偶联反应，偶联反应后生成的双氧水与所述显色底物进行二次显色反应，根据显色底物显色的二次反射率值的终点或者变化率和所述背景显色值，通过终点法或速率法测定出谷丙或谷草转氨酶的含量。
全文摘要
本发明公开了一种去除干扰的干化学定量测试试条，包括底衬，其上设置一固定有去干扰试剂和信号提供试剂的加样区，还设置一固定有测试反应启动试剂的启动区，加样区和启动区是以在通常状态下保持非接触、在测试状态下可互相接触的方式布设在测试试条上。测试方法是将待测样品液添加到加样区，加样区上固定的物质复溶到待测样品液中，开始进行信号反应获取背景信号值；再使启动区与加样区接触，启动区上固定的物质复溶，开始测试反应，产物再进行二次信号反应，根据测得的二次特征值和前述背景信号值测算出待测生物酶的含量。本发明的检测方法操作简便、测试成本较低、检测结果准确、检测精度高，能够具体用于谷丙或谷草转氨酶的定量测试。
文档编号G01N33/52GK102288747SQ20111023992
公开日2011年12月21日 申请日期2011年8月19日 优先权日2011年8月19日
发明者吉翔, 李宗祥, 谢光, 车宏莉 申请人:长沙三诺生物传感技术股份有限公司