专利名称：贝西沙星对映异构体的分离检测方法
技术领域：
本发明涉及手性药物对映异构体的分离检测方法，具体涉及贝西沙星对映异构体的分离检测方法，属于分析化学领域。
背景技术：
贝西沙星(besifloxacin)是一种新的用于治疗结膜炎的第四代喹诺酮类抗菌齐Li，其化学名为(+) -7-[ (3R) -3-aminohexahydro-lH-azepin-l-yl] -8-chloro-l-cyclopropyl-6-fluoro-4-oxo-l,4-dihydroquinoline-3-carboxylic acid,其结构式如下所不:
权利要求
1.一种分离检测贝西沙星对映异构体的方法，其特征在于:在有机溶剂中，在一定的温度下，使用2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖异硫氰酸酯(GITC)和贝西沙星进行衍生化反应，制备得到衍生化产品，衍生化反应可保证贝西沙星及其异构体均得到完全的衍生化，衍生化后的贝西沙星及其异构体可使用常规的反相高效液相色谱法得到分离和检测。
2.根据权利要求1所述的分离检测贝西沙星对映异构体的方法，所述衍生化反应的有机溶剂可选择二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，2-二氯乙烷、1，1，2，2-四氯乙烷、四氢呋喃，优选氯仿。
3.根据权利要求1所述的分离检测贝西沙星对映异构体的方法，所述衍生化反应温度可选择从-15°C到所使用溶剂的常压沸点温度，优选室温。
4.根据权利要求1所述的分离检测贝西沙星对映异构体的方法，所述衍生化反应使用的贝西沙星可以是贝西沙星游离碱，也可以是由贝西沙星的无机酸盐或有机酸盐，通过无机碱或有机碱游离后得到的贝西沙星。
5.根据权利要求1所述的分离检测贝西沙星对映异构体的方法，所述衍生化反应中，贝西沙星与衍生化试剂GITC用量的摩尔比为1:1 1: 10，优选1: 2 1: 5。
6.根据权利要求1所述的分离检测贝西沙星对映异构体的方法，所述衍生化反应可按照以下步骤实现: (1)室温下，在反 应器中加入一定量稀氨水和一定量的贝西沙星无机酸盐或有机酸盐的水溶液(氨与贝西沙星盐的摩尔比为5:1 7:1)，搅拌或放置到振荡器上振荡数分钟； (2)混匀后，加入一定量的氯仿(控制贝西沙星在氯仿中的浓度约0.1 0.2mg/mL)，再放置到振荡器上振荡数分钟，静置； (3)吸取氯仿层，放入衍生化反应器中，加入一定量的GITC溶液(浓度为2mg/mL)，再搅拌或放置振荡器上振荡，反应完全后，室温下挥发除去溶剂，即得到贝西沙星的衍生化产品O
7.根据权利要求1所述的分离检测贝西沙星对映异构体的方法，所述衍生化反应也可按照以下步骤实现: (1)室温下，在衍生化反应器中加入氯仿和贝西沙星游离碱，搅拌或放置到振荡器上振荡使之完全溶解后得到贝西沙星溶液，浓度约0.1 0.2mg/mL, (2)控制反应体系在一定的温度或室温下，加入一定量的GITC溶液(浓度为2mg/mL)，搅拌或放置振荡器上振荡，反应完全后，室温下挥发除去溶剂，即得到贝西沙星的衍生化产品O
8.根据权利要求1所述的分离检测贝西沙星对映异构体的方法，所述分离检测方法为高效液相色谱法或高效液相色谱与质谱法联合使用，高效液相色谱的色谱条件为以反相色谱柱为分离柱，以有机改性剂-缓冲液(pH为2 5)组成反相流动相系统，流速为1.0mL/min,检测波长为293nm。
9.根据权利要求1和8所述的分离检测贝西沙星对映异构体的方法，所述反相色谱柱可选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱、辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱或者苯基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，优选十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。
10.根据权利要求1和8所述的分离检测贝西沙星对映异构体的方法，所述反相流动相系统中有机改性剂可选择乙腈、甲醇、乙醇，优选甲醇。
11.根据权利要求1和8所述的分离检测贝西沙星对映异构体的方法，所述反相流动相系统中缓冲盐可选择磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、醋酸钠、醋酸钾、柠檬酸钠、柠檬酸钾，优选磷酸二氢钠或磷酸二氢钾。
12.根据权利要求1和8所述的分离检测贝西沙星对映异构体的方法，所述反相流动相系统中缓冲盐的浓度为10 50mM，优选20 30mM。
13.根据权利要求1和8所述的分离检测贝西沙星对映异构体的方法，所述反相流动相系统中缓冲盐溶液的PH值为2 5，优选2.5 3.5，最优选3.0。
14.根据权利要求1和8所述的分离检测贝西沙星对映异构体的方法，所述反相流动相系统中有机改性剂所占混合流动相溶液的体积百分比为55 % 85 %，优选65 % 75 %。
15.根据权利要求1和8所述的分离检测贝西沙星对映异构体的方法，所述分离检测方法，可按照以下步骤实现: (1)取贝西沙星衍生化产品适量，用流动相溶解，配制成每ImL含贝西沙星0.1 ·0.2mg的样品溶液； (2)设置流动相流速为1.0mL/min，检测波长为293nm，色谱柱柱温为30°C ； (3)取⑴的样品溶液100μ L注入色谱仪，记录色谱图。
全文摘要
本发明提供了一种实用方便、稳定可靠的手性衍生化高效液相色谱法来分离和检测贝西沙星及其对映异构体，属于分析化学领域。本发明使用2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖异硫氰酸酯(GITC)和贝西沙星在一定条件下进行衍生化反应，制备得到衍生化产品，衍生化反应可保证贝西沙星及其异构体均得到完全的衍生化，衍生化后的贝西沙星及其异构体可使用常规的反相高效液相色谱法得到分离和检测。本发明可用于贝西沙星原料药及其药物制剂产品中对映异构体的分离检测和质量控制。
文档编号G01N30/89GK103076423SQ20111032675
公开日2013年5月1日 申请日期2011年10月25日 优先权日2011年10月25日
发明者陈再新, 朱峰, 夏正君, 王勇军, 林送, 王明林, 蒋龙, 张明光 申请人:常州亚邦制药有限公司, 江苏亚邦爱普森药业有限公司, 江苏亚邦强生药业有限公司