专利名称：一种藏药烈香杜鹃及其制剂的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种质量检测方法，具体涉及一种藏药烈香杜鹃及其制剂的质量检测方法。
背景技术：
烈香杜醇(Rhododendronanthopogoniodes Maxim, et Franch)为杜醇花科植物烈香杜鹃的干燥花和叶或带叶嫩枝，系常用藏药材，性味甘、涩，平；具有清热消肿，补肾的功效，主要用于气管炎，肺气肿，浮肿，身体虚弱及水土不适，消化不良，胃下垂，胃扩张，外用治疮疬。《月王药诊》记载“治龙、赤巴、培根病、脾胃虚寒、消化不良、水土不服。”《晶珠本草》记载“滋补益寿，治寒性培根病。”《味气铁鬟》记载味苦、性温、效轻。治培根病。《明释三十章》记载性温，治培根病、肺病疼痛、呃逆。《图鉴》记载本品生于高山阴面。树 干白色，叶褐色，花白色，味甘、苦、潘，治龙病、赤巴病、培根病、喑哑病、肺病。烈香杜鹃现已大量应用于藏成药制剂中，藏医常用于培根病、肺病、脾胃虚寒、消化不良、水土不服症等的治疗，该药材收载于《卫生部药品标准》藏药第一册中，原标准除有显微理化鉴别外，未制定任何含量测定方法。《RP-HPLC测定烈香杜鹃叶总黄酮含量的研究》一文提供了一种烈香杜鹃叶总黄酮含量测定的RP-HPLC方法。该方法以槲皮素、山奈素、异鼠李素3种黄酮甙元的总含量作为烈香杜鹃叶总黄酮含量，但未对供试品中杂质进行处理，干扰成分多，不能准确可靠的说明烈香杜鹃的质量，不适用于制剂中含量的控制。《藏药烈香杜鹃质量标准研究》一文提供了一种采用高效液相色谱法同时测定烈香杜鹃中金丝桃苷、槲皮素的含量的方法。该方法通过对金丝桃苷、槲皮素的含量测定来控制烈香杜鹃的质量，但是仍不能全面的反应烈香杜鹃的质量。综上所述亟需一种可以全面控制藏药烈香杜鹃的检测方法，以保证患者用药的安全有效。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种藏药烈香杜鹃及其制剂全面的质量检测方法。为实现上述目的，本发明采用下述技术方案一种藏药烈香杜鹃质量检测方法，所述方法包括烈香杜鹃中总黄酮含量测定的紫外分光光度方法，烈香杜鹃中总槲皮素含量测定的高效液相色谱方法，和烈香杜鹃中黄酮类成分HPLC指纹图谱的检测方法中的一种或几种。优选的，所述质量检测方法包括以下一种或几种所述总黄酮的含量测定方法是以金丝桃苷制成对照品溶液，经黄酮的亚硝酸钠和硝酸铝的显色反应(即硝酸铝显色法)，通过紫外-可见分光光度法测定不同对照品浓度的吸收度并绘制吸收曲线；将烈香杜鹃粉末经过石油醚除杂后配制供试品溶液，经过硝酸铝显色法显色后，通过紫外-可见分光光度法测定其吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的含量的方法；所述总槲皮素含量测定方法是以槲皮素对照品为对照，烈香杜鹃使用酸水解后，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积份数比45:55的甲醇-体积份数比O. 5%磷酸水溶液为流动相，检测波长为360nm的高效液相色谱法；所述黄酮类成分HPLC指纹图谱的检测方法，其是以槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁对照品为对照制成四种参照物溶液；色谱条件是十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以异丙醇为流动相B，以体积份数比O. 5%磷酸水溶液为流动相C，梯度洗脱，流速为lml/min，检测波长为360nm ;将参照物溶液与供试品所制备的供试品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，比较参照物溶液与供试品溶液的相对保留时间和相对峰面积。上面步骤中，作为进一步之优选，所述总黄酮的含量测定方法中，对照品溶液和供试品溶液均为乙醇为溶剂配制。所述黄酮的亚硝酸钠和硝酸铝的显色反应(即硝酸铝显色 法)的步骤是对照品溶液或供试品溶液均加水至5ml，加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液Iml，混匀，放置6分钟，加重量体积份数比10%硝酸铝溶液Iml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟。上面步骤中，作为进一步之优选，所述总槲皮素含量测定方法中，对照品溶液和供试品溶液均由体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液配制，供试品使用回流的方法制备，对供试品进行除杂，使脂类及叶绿素类进行消解，同时使含槲皮素的黄酮苷均水解转化为槲皮素(即总槲皮素包括游离槲皮素和转化之后槲皮素之和)，便于测定。而且在此条件下还可以采用山奈素对照品作对照，测量山奈素含量，且与槲皮素互不影响。上面步骤中，作为进一步之优选，所述黄酮类成分HPLC指纹图谱的检测方法中，四份参照物溶液和供试品溶液均由75%乙醇配制。另外，作为本发明另一优选，梯度洗脱优选下面技术方案
权利要求
1.一种藏药烈香杜鹃质量检测方法，其特征是，所述方法包括烈香杜鹃中总黄酮含量测定的紫外分光光度方法，烈香杜鹃中总槲皮素含量测定的高效液相色谱方法，和烈香杜鹃中黄酮类成分HPLC指纹图谱的检测方法中的一种或几种。
2.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述质量检测方法包括以下一种或几种所述总黄酮的含量测定方法是以金丝桃苷制成对照品溶液，经黄酮的亚硝酸钠和硝酸铝的显色反应，通过紫外-可见分光光度法测定不同对照品浓度的吸收度并绘制吸收曲线；将烈香杜鹃粉末经石油醚除杂后配制供试品溶液，经过硝酸铝显色法显色后，通过紫外-可见分光光度法测定其吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的含量的方法; 所述总槲皮素含量测定方法是以槲皮素对照品为对照，烈香杜鹃使用酸水解后，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积份数比45:55的甲醇-体积份数比O. 5%磷酸水溶液为流动相，检测波长为360nm的高效液相色谱法； 所述黄酮类成分HPLC指纹图谱的检测方法，其是以槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁对照品为对照制成四种参照物溶液；色谱条件是十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以异丙醇为流动相B，以体积份数比O. 5%磷酸水溶液为流动相C，梯度洗脱，流速为lml/min，检测波长为360nm ;将参照物溶液与供试品所制备的供试品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，比较参照物溶液与供试品溶液的相对保留时间和相对峰面积。
3.如权利要求2所述的质量检测方法，其特征是，所述总黄酮的含量测定方法如下 对照品溶液的制备取金丝桃苷对照品15mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得； 标准曲线的制备精密量取对照品液lml、2ml、3ml、4ml与5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液1ml，混匀，放置6分钟，加重量体积份数比10%硝酸铝溶液Iml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液IOml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2010年版一部附录VA)，在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线. 测定法取本品细粉约lg，精密称定，置圆底烧瓶中，加石油醚50ml，加热回流I小时，过滤，滤渣洗涤3次，每次10ml，弃去石油醚液，滤渣挥干溶剂后，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液1ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中金丝桃苷的含量(μ g/ml)，计算，即得。
4.如权利要求2所述的质量检测方法，其特征是，所述总槲皮素含量测定方法如下 照高效液相色谱法； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比45:55的甲醇-体积份数比O. 5%磷酸水溶液为流动相；检测波长为360nm ;理论板数按槲皮素峰计算应不低于2000 ； 对照品溶液的制备取槲皮素对照品适量，精密称定，加体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液制成每Iml含槲皮素150 μ g的溶液，即得； 供试品溶液的制备取本品细粉约lg，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流lh，放冷，再称定重量，用体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
5.如权利要求2所述的质量检测方法，其特征是，所述黄酮类成分的指纹图谱建立方法如下 照高效液相色谱法； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相Α，以异丙醇为流动相B，以体积份数比O. 5%磷酸水溶液为流动相C，梯度洗脱；流速为Iml/min,检测波长为360nm ;理论板数按参照物金丝桃苷峰计算应不低于2000 ；时_| (分钟) 流动相A(%) 流动棚B(%) 流动_C(%)0 30 15 I 8430 60 15—35 I 84—6460 70_35_I_M_ 参照物溶液的制备取槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁对照品适量，精密称定，加体积份数比75%乙醇制成每Iml含槲皮素16 μ g、山奈素3 μ g、金丝桃苷74 μ g、芦丁 13 μ g的溶液，即得； 供试品溶液的制备取本品细粉约lg，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比75%乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流lh，放冷，再称定重量，用体积份数比75%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各IOul，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得； 供试品特征谱图中应呈现12个特征峰，其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相一致；与金丝桃苷参照峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积，面积在5%以下的色谱峰不做峰面积要求，其相对保留时间和相对峰面积应在规定值的±10%之内。
6.如权利要求5所述的质量检测方法，其特征是，所述12个特征峰的相对保留时间规定值为0. 33 (峰 1)、0. 89 (峰 2)、1.00 (峰 3)、1.08 (峰 4)、1· 19 (峰 5)、1.50 (峰 6)、1.74(峰 7)、L92 (峰 8)、2. 13 (峰 9)、2. 30 (峰 10)、2· 75 (峰 11)、3·21 (峰 12);相对峰面积规定值为0. 19 (峰 1),0. 16 (峰 2)、1.00 (峰 3)、0. 30 (峰 4)、0.09 (峰 5)、0. 13 (峰 6)、0· 29(峰 7)、0. 86 (峰 8)、0. 59 (峰 9)、0. 31 (峰 10)、0· 40 (峰 11)、0.07 (峰 12)。
7.如权利要求2、5或6所述的质量检测方法，其特征是，它还包括通过分别以槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁对照品为对照，对烈香杜鹃中的槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁进行含量测定的方法。
8.—种药物制剂中烈香杜鹃的质量检测方法，其特征是，采用权利要求1-7任一项所述的方法对制剂中烈香杜鹃进行质量检测。
9.如权利要求8所述的质量检测方法，其特征是，所述质量检测方法如下 总黄酮的含量测定 对照品溶液的制备取金丝桃苷对照品15mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得； 标准曲线的制备精密量取对照品液lml、2ml、3ml、4ml与5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液1ml，混匀，放置6分钟，加重量体积份数比10%硝酸铝溶液Iml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液IOml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2010年版一部附录VA)，在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线. 测定法取本品细粉约lg，精密称定，置圆底烧瓶中，加石油醚50ml，加热回流I小时，过滤，滤渣洗涤3次，每次10ml，弃去石油醚液，滤渣挥干溶剂后，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液1ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中金丝桃苷的含量(μ g/ml )，计算，即得； 总槲皮素含量测定 照高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比45:55的甲醇-体积份数比O. 5%磷酸水溶液为流动相；检测波长为360nm ;理论板数按槲皮素峰计算应不低于2000 ； 对照品溶液的制备取槲皮素对照品适量，精密称定，加体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液制成每Iml含槲皮素150 μ g的溶液，即得； 供试品溶液的制备取本品细粉约lg，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流lh，放冷，再称定重量，用体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得; 黄酮类成分的指纹图谱建立 照高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相Α，以异丙醇为流动相B，以体积份数比O. 5%磷酸水溶液为流动相C，梯度洗脱；流速为Iml/min,检测波长为360nm ;理论板数按参照物金丝桃苷峰计算应不低于2000 ；参照物溶液的制备取槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁对照品适量，精密称定，加体积份数比75%乙醇制成每Iml含槲皮素16 μ g、山奈素3 μ g、金丝桃苷74 μ g、芦丁 13 μ g的溶液，即得； 供试品溶液的制备取待检测制剂细粉约6-10g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比75%乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流lh，放冷，再称定重量，用体积份数比75%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各IOul，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得； 供试品特征谱图中应呈现12个特征峰，其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相一致；与金丝桃苷参照峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积，面积在5%以下的色谱峰不做峰面积要求，其相对保留时间和相对峰面积应在规定值的±10%之内；相对保留时间规定值为:0.33 (峰1)、0. 89 (峰2)、1.00 (峰3)、1.08 (峰4),1. 19 (峰 5),1. 50 (峰 6),1. 74 (峰 7),1. 92 (峰 8),2. 13 (峰 9),2. 30 (峰 10),2. 75 (峰11)、3.21 (峰 12);相对峰面积规定值为:0.19 (峰 1)、0· 16 (峰 2)、1.00 (峰 3)、0. 30 (峰4),0. 09 (峰 5),0. 13 (峰 6),0. 29 (峰 7),0. 86 (峰 8),0. 59 (峰 9),0. 31 (峰 10),0. 40 (峰11),0. 07 (峰 12)。
10.如权利要求8或9所述的质量检测方法，其特征是，所述制剂为雪山胃宝丸、手参肾宝胶囊。
全文摘要
本发明提供了一种藏药烈香杜鹃及其制剂的质量检测方法，该方法包括采用紫外-分光光度法测定烈香杜鹃及其制剂中总黄酮的含量，采用高效液相色谱法同一色谱条件下同时测定烈香杜鹃及其制剂中总槲皮素含量，采用高效液相色谱法建立烈香杜鹃及其制剂中黄酮类成分的指纹图谱，通过指纹图谱中共有峰的有无，可有效保证烈香杜鹃及其制剂的质量，进而保证了患者用药的安全。本发明质量检测方法供试品溶液稳定，精密度高，重现性良好，具有一定的专属性，所得指纹图谱中各特征成分分离效果良好，可用于烈香杜鹃药材的质量检测，有利于保证藏药烈香杜鹃及其制剂的安全有效、质量可控和临床疗效。
文档编号G01N21/33GK102809545SQ20121029504
公开日2012年12月5日 申请日期2012年8月20日 优先权日2012年8月20日
发明者张义智, 江玉娟, 孙绪丁, 刘玉芹, 任松鹏 申请人:山东阿如拉药物研究开发有限公司