专利名称：一种全量程超敏c反应蛋白胶体金检测试纸条的制作方法
技术领域：
一种全量程超敏C反应蛋白胶体金检测试纸条技术领域[0001]本实用新型属于临床医学诊断领域，具体涉及一种全量程超敏C反应蛋白胶体金检测试纸条。
背景技术：
[0002]C反应蛋白(CRP)，1930年Tillet和Fancis在急性大叶性肺炎患者血清中发现能在钙离子存在时与肺炎球菌C多糖起沉淀反应而得名。C反应蛋白主要作用细菌感染和疾病活动性的指标。[0003]目前，C反应蛋白在医院已经成为常规检测项目，可以用于临床疾病早期诊断及鉴别诊断。超敏C反应蛋白(Hs-CRP)与C反应蛋白并不是两种蛋白，只是从灵敏度上加以区分的。大量研究表明，Hs-CRP是由慢性炎症引发心血管疾病的独立危险因素，检测其浓度对心血管疾病的干预和预后至关重要，甚至被认为是心血管疾病危险评估的“金指标”。[0004]血液中的C反应蛋白检测方法很多，主要有放射免疫分析(RIA)、生化免疫分析、 酶联免疫分析(ELISA)、胶体金免疫层析等方法。目前，免疫层析C反应蛋白因高浓度待测样品会导致HOOK效应，在临床诊断中造成C反应蛋白低水平现象，检测结果易出现不真实的问题。中国专利CN101887063提供了一种人C反应蛋白胶体金免疫层析法定量检测试纸条，能够进行定量检测，但是为了避免高浓度C反应蛋白样品中出现HOOK效应，只能通过提供的样品稀释液对高浓度C反应蛋白进行检测，操作繁琐。中国专利CN101769932通过采用不同粒径的苯乙烯胶乳提供了全量程C反应蛋白检测试剂盒，既可以测低浓度的C反应蛋白又可以测高浓度的C反应蛋白，该方法不会因HOOK效应影响检测的准确性，但是操作复杂，检测时间长。发明内容[0005]本实用新型的目的是针对现有技术中存在的不足，提供了一种两条检测线的全量程超敏C反应蛋白胶体金检测试纸条，可以解决现有技术不能避免HOOK效应的问题，同时既可以测定低浓度C反应蛋白含量，又可以测定高浓度C反应蛋白含量，具灵敏度高，稳定性强的特点。[0006]为解决该问题，本实用新型采用以下技术方案予以实现[0007]—种全量程超敏C反应蛋白胶体金检测试纸条，在其底衬上依次相互搭接的是第一样品垫、第二样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述的硝酸纤维素膜上设有质控线、第一检测线、第二检测线。[0008]所述的第一检测线上包被C反应蛋白单克隆抗体。[0009]所述的第二检测线上包被重组C反应蛋白。[0010]所述的质控线为兔抗鼠IgG抗体。[0011]所述金标垫上包被的C反应蛋白抗体为胶体金标记的鼠抗人C反应蛋白单克隆抗体。[0012]所述硝酸纤维素膜上第二检测线上包被重组C反应蛋白能够与样品中的抗原通过竞争作用与胶体金的鼠抗人C反应蛋白单克隆抗体结合。[0013]所述金标垫的材质为玻璃纤维素膜或硝酸纤维素膜。[0014]所述的样品垫的材质可以是聚酯膜、玻璃纤维素膜、全血滤膜。[0015]检测时，待测样品滴加在样品垫上，待测样品由于毛细管作用向吸水纸方向移动， 待测样品中的CRP抗原与金标垫上的鼠抗人C反应蛋白单克隆抗体相结合，然后移动到第一检测线处与C反应蛋白单克隆抗体相互反应，呈现紫红色的条带。当待测样品中的CRP 抗原含量过高时，部分与金标垫抗体结合的CRP抗原因不能结合在第一检测线处，向吸水纸方向继续移动，第二检测线上包被重组C反应蛋白通过竞争法与样本中的C反应蛋白竞争结合金标垫抗体呈现紫红色条带。通过紫红色显色条带可判断定性检测结果，此外，通过南京基蛋生物科技有限公司的FIA8000免疫定量分析仪可进行C反应蛋白全程定量检测， 最高检测范围达400mg/L。[0016]本实用新型提供的全量程超敏C反应蛋白胶体金检测试纸条，具有以下有益效果[0017]I、本实用新型既可以定性检测，又可以定量检测血液中的C反应蛋白含量；[0018]2、本实用新型无需对待测样品稀释，克服了 HOOK效应，既可以测定低浓度C反应蛋白含量，又可以测定高浓度C反应蛋白含量；[0019]3、操作简单，反应快速，结合仪器检测时间仅需为5 10分钟，适合床边快速诊断。
[0020]图I是本实用新型的全量程超敏C反应蛋白胶体金检测试纸条结构示意图。[0021]其中1、底衬；2、第一样品垫；3、第二样品垫；4、金标垫；5、包被膜；6、吸水纸；7、 第一检测线；8、第二检测线；9、质控线。
具体实施方式
[0022]
以下结合附图和具体实施方式
对本实用新型做详细的说明。[0023]结合图1，一种全量程超敏C反应蛋白胶体金检测试纸条，在其底衬上依次相互搭接的是第一样品垫2、第二样品垫3、金标垫4、硝酸纤维素膜5和吸水纸6，所述的硝酸纤维素膜5上设有第一检测线7、第二检测线8、质控线9。[0024]所述的第一检测线7上包被C反应蛋白单克隆抗体。[0025]所述的第二检测线8上包被重组C反应蛋白。[0026]所述的质控线为兔抗鼠IgG抗体。[0027]所述金标垫上包被的C反应蛋白抗体为胶体金标记的鼠抗人C反应蛋白单克隆抗体。[0028]所述硝酸纤维素膜上第二检测线上包被重组C反应蛋白能够与样品中的抗原通过竞争作用与胶体金的鼠抗人C反应蛋白单克隆抗体结合。[0029]所述的第一样品垫2与第二样品垫3的材质可以是聚酯膜、玻璃纤维素膜、全血滤膜。第二样品垫3比第一样品垫2短，有利于与底衬的粘贴。两层样品垫可以更有效地阻挡红细胞，使样品展层更充分。[0030]一种全量程超敏C反应蛋白胶体金检测试纸条具体制备方法如下[0031](1)样品垫的制备[0032]将第一样品垫2与第二样品垫3用IOOmM PBS缓冲液浸泡2 4小时，取出后25°C 干燥8小时。[0033](2)金标垫4的制备[0034]金标垫的预处理将制作金标垫的材料玻璃纤维素膜或聚酯膜放入金标缓冲液 (20mM PBS+1%酪蛋白+1%PVP+1%蔗糖+0. 2%Triton)中浸泡2 4小时，取出后，25°C干燥 8小时。[0035]将采用不同于检测线所用的C反应蛋白单克隆抗体的胶体金一抗体复合物用喷金仪均匀的铺在处理好的金标垫4上，喷量I. Oul/cm, 25°C干燥4 8小时，密封干燥保存。[0036](3)硝酸纤维素膜5的处理[0037]检测线(第一检测线7与第二检测线8)的制备将鼠抗人C反应蛋白单克隆抗体用20mmol/L ρΗ7· 2的PB缓冲液稀释到2. Omg/ml的浓度，O. 8 μ 1/cm在硝酸纤维素膜5上划线得到第一检测线7 ;将重组C反应蛋白用20mmol/L pH7. 2的PB缓冲液稀释到2. Omg/ ml的浓度，O. 8 μ 1/cm在硝酸纤维素膜5上划线得到第二检测线8。[0038]质控线9的制备将兔抗鼠IgG抗体按4mg/ml的浓度，O. 8 μ 1/cm在硝酸纤维素膜5上划质控线9，该线与两条检测线平行，与第二检测线8间隔4mm，然后在干燥箱内20°C 鼓风干燥12小时，密封干燥保存。[0039](4)吸水垫6的制备[0040]吸水纸裁剪成30*2. 7cm每条。[0041](5)组装[0042]塑料底衬1和吸水垫6为本领域通用的部件。将上述第一样品垫2与第二样品垫3、金标垫4、硝酸纤维素膜5粘贴在塑料底衬I上。将贴好的中间物用斩切机切成5. 6cm宽一条的试纸条。[0043]本试纸条在操作时，将采集全血、血清或血浆样品点在试纸条样品垫处，在层析过程中，由于毛细管的作用向吸水纸方向移动，5 10分钟内观察结果。检测结果描述(以一定浓度为临界浓度，区分低浓度与高浓度)[0044](1)当样本低于一定浓度时(低浓度)第一检测线7随着样本浓度的升高显色程度加深，呈正相关，第二检测线8基本无变化，此时通过第一检测线7进行定性检测，或者结合 FIA8000系列免疫定量分析仪测定第一检测线7处信号，实现定量检测；[0045](2)当样本高于一定浓度时(高浓度)第二检测线8随着样本浓度的升高显色程度降低，呈负相关，第一检测线7显色程度不再变化或者显色程度降低，此时结合第一检测线 7和第二检测线8的显色程度综合进行定性或定量检测。[0046]上述两条检测线分别控制不同的线性范围，而不会因为HOOK效应导致检测线7显色程度低，而导致检测结果低于实际样本浓度的现象，从而达到全量程的目的。[0047]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所5作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
权利要求1.一种全量程超敏C反应蛋白胶体金检测试纸条，在其底衬上依次相互搭接的是第一样品垫(2)、第二样品垫(3)、金标垫(4)、硝酸纤维素膜(5)和吸水纸(6)，其特征在于所述的硝酸纤维素膜(5)上设有第一检测线(7)、第二检测线(8)、质控线(9)。
2.根据权利要求I所述的一种全量程超敏C反应蛋白胶体金检测试纸条，其特征在于所述的第一检测线(7)上包被C反应蛋白单克隆抗体。
3.根据权利要求I所述的一种全量程超敏C反应蛋白胶体金检测试纸条，其特征在于所述的第二检测线(8)上包被重组C反应蛋白。
专利摘要本实用新型公开了一种全量程超敏C反应蛋白胶体金检测试纸条，在其底衬上依次相互搭接的是第一样品垫、第二样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，其特征在于所述的硝酸纤维素膜上设有第一检测线、第二检测线和质控线。本实用新型灵敏度高，稳定性强，既可以测定低浓度C反应蛋白的含量，又可以测定高浓度C反应蛋白的含量。
文档编号G01N33/68GK202814988SQ201220420358
公开日2013年3月20日 申请日期2012年8月23日 优先权日2012年8月23日
发明者苏恩本, 王勇, 陈伟, 沈小娟 申请人:南京基蛋生物科技有限公司