Stains-All在聚丙烯酰胺凝胶上磷酸化蛋白质染色检测中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及磷酸化蛋白质检测技术，具体地说就是Stains-All染料在聚丙烯酰胺凝胶上磷酸化蛋白质染色检测中的应用。本发明还提供了应用Stains-All在聚丙烯酰胺凝胶上磷酸化蛋白质染色检测的方法，包括步骤：将蛋白质样品电泳后的凝胶在固定液中固定；漂洗；染色；显影。本发明具有灵敏度高、选择性强、操作简单迅速、重现性好、线性范围广、使用安全、成本低廉等优点。
【专利说明】Stains-AI I在聚丙烯酰胺凝胶上磷酸化蛋白质染色检测 中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及磷酸化蛋白质检测技术，具体地说就是涉及磷酸化蛋白质染色检测的 一种新方法。
【背景技术】
[0002] 蛋白质磷酸化和去磷酸化的可逆反应，是机体内最常见、最重要的翻译后修饰之 一。它参与了包括细胞信号传导，细胞分化和生长，细胞代谢凋亡等重要过程。此外，与很 多疾病的发生机制，比如癌症，也密切相关。但由于存在反应瞬时进行以及磷酸化蛋白在细 胞内含量较低等困难，使磷酸化蛋白的检测受到了一定的限制。因此，对磷酸化蛋白的新型 检测研究具有重要的意义。目前，聚丙烯酰胺凝胶电泳是高效分离和分析蛋白质分子的一 种常用方法，使得凝胶上磷酸化蛋白质的检测技术对磷酸化蛋白质的相关研究起着至关重 要的作用。
[0003] 测定磷酸化蛋白质含量的方法有多种，目前用于聚丙烯酰胺上磷酸化蛋白质研究 和测定的方法有荧光染色法、染料染色法、染料染色结合银染法等。磷酸化蛋白质染料染色 检测法因具有快速便捷、价格低廉、低毒等优点而成为磷酸化蛋白质检测研究领域的热点 之一。
[0004] Stains-All为紫色粉末状结晶，属于阳离子碳青花染料。此前曾有报道将 Stains-All用于磷酸化蛋白质检测，但灵敏度很低，大约只有考马斯亮蓝的十分之一。本发 明对Stains-All原方法进行改进，磷酸化蛋白检测的选择性和灵敏度与Pro-Q Diamond相 当。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供Stains-All在聚丙烯酰胺凝胶上磷酸化蛋白质染色检测 中的应用。
[0006] 本发明所涉及的Stains-All的结构式为
[0007]
【权利要求】
1. Stains-All在聚丙烯酰胺凝胶上磷酸化蛋白质染色检测中的应用。
2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的Stains-All为Stains-All甲酰胺溶 液。
3. -种磷酸化蛋白质染色检测方法，其包括步骤： 1) 将经聚丙烯酰胺凝胶电泳后的蛋白质样品凝胶置于漂洗液中漂洗2次，每次20min， 其中所述漂洗液为含按体积比为20-50%甲酰胺的水溶液，弃漂洗液； 2) 加入染色液染色10_60min，其中所述染色液为含按重量体积比0.005-0. 02 %的 Stains-All、按体积比为20-40%甲酰胺及按摩尔浓度45mM Tris-HCl (pH9. 2)的水溶液， 弃染色液； 3) 加入显影液显影30s-15min，其中所述显影液为含按重量体积比为0. 5-2%的依地 酸二钠、按体积比为20-40%乙醇的水溶液，弃显影液。 4) 检测。
4. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述漂洗液为含按体积比为30% 甲酰胺的水溶液。
5. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)染色液中Stains-All的浓度按重量 体积比为0.01%。
6. 如权利要求3-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤2)中甲酰胺浓度按体积比为 30%。
7. 如权利要求3-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤2)中染色的时间为20min。
8. 如权利要求3-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤3)中依地酸二钠浓度按重量 体积比为1%。
9. 如权利要求3-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤3)中乙醇浓度按体积比为 30%。
10. 如权利要求3-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤3)中显影的时间为lmin。
【文档编号】G01N21/29GK104122131SQ201310170887
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2013年4月24日 优先权日:2013年4月24日
【发明者】金利泰, 丛维涛, 朱忠欣, 洪国赢 申请人:温州安得森生物科技有限公司