一种孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒，属于检测试剂盒【技术领域】。其包括底板，底板的一面上设置有一硝酸纤维素膜；所述硝酸纤维素膜的前端设置有一结合垫，结合垫后端设置若干个箭头标签，第一不透明保护垫设置于箭头标签后方；第一不透明保护垫后方设置第一检测线，第一检测线后方设置质控线；所述硝酸纤维素膜的后端设置第二不透明保护垫。所述第一检测线和质控线之间还设置有第二检测线。本发明应用简便，并进一步提高早产诊断的准确性，联检结果为下一步准确治疗提供了有力依据，适于大规模推广应用。
【专利说明】一种孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒，属于检测试剂盒【技术领域】。
【背景技术】
[0002]妊娠满28周至不足37周分娩称为早产。早产分为自发性早产和治疗性早产两种，自发性早产包括未足月分娩和未足月胎膜早破，治疗性早产为妊娠并发症或合并症而需要提前终止妊娠者；其中自发性早产占绝大多数比例。
[0003]目前临床上对早产的诊断主要有以下几种方法:
1)宫颈评估:测量宫颈的长度与结构变化，一般宫颈长度短至一定程度后，可预测早产的发生；
2)各种生化指标:如胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1;这两种物质都在子宫发生收缩、胎盘和蜕膜发生剥离时释放至孕妇阴道的物质；当孕妇阴道中上述两种物质出现异常升高，可预测早产的发生。
[0004]如上所述，目前临床上已经存在对早产诊断较为准确的方法。宫颈分泌物fFN联合phIGFBP-Ι检测以预测早产较两种方法单独应用时的阳性预测值及阴性预测值均提高。这对于治疗时抑制宫缩以及促胎肺成熟等药物的应用时机及应用时间长短均有指导意义，既可及时、尽早对高危孕妇治疗，又避免了对低危孕妇不必要的产科干预。
[0005]目前上述早产的临床诊断，绝大多数是分开进行的；这样处理，即增加了操作的繁琐程度，同时因为需要频繁对孕妇进行取样，会刺激孕妇发生宫缩或者感染的机会，进而增加早产的风险。
[0006]为了解决存在的上述问题，需要提供一种试剂盒，其可以通过一次取样同时检测胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1，使用方便。
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于克服上述不足之处，提供一种孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒，该孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒可以通过一次取样同时检测胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1，应用简便，并进一步提高早产诊断的准确性，联检结果为下一步准确治疗提供了有力依据，适于大规模推广应用。
[0008]按照本发明提供的技术方案，一种孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒，包括底板，底板的一面上设置有一硝酸纤维素膜；
所述硝酸纤维素膜的前端设置有一结合垫，结合垫后端设置若干个箭头标签，第一不透明保护垫设置于箭头标签后方；第一不透明保护垫后方设置第一检测线，第一检测线后方设置质控线； 所述硝酸纤维素膜的后端设置第二不透明保护垫。
[0009]所述第一检测线和质控线之间还设置有第二检测线。
[0010]所述联检试剂盒由两个相同结构的联检试剂盒并排放置于同一个盒体内构成。
[0011]所述底板的另一面上同样设置有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上依次设置结合垫、箭头标签、第一不透明保护垫、第二检测线、质控线和第二不透明保护垫。
[0012]所述结合垫含抗人磷酸化IGFBP-1胶体金标记抗体和抗人fFN胶体金标记抗体；第一检测线包被抗人磷酸化IGFBP-1抗体；第二检测线包被抗人fFN抗体。
[0013]所述并列的一个结合垫含抗人磷酸化IGFBP-1胶体金标记抗体，所对应的第一检测线包被抗人磷酸化IGFBP-1抗体；并列的另一个结合垫含抗人fFN胶体金标记抗体,所对应的第二检测线包被抗人fFN抗体。
[0014]所述底板一侧的结合垫含抗人磷酸化IGFBP-1胶体金标记抗体，所对应的第一检测线包被抗人磷酸化IGFBP-1抗体；另一侧的结合垫含抗人fFN胶体金标记抗体,所对应的第二检测线包被抗人fFN抗体。
[0015]本发明的有益效果:本发明包括胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫层析检测试纸条，或者包括胎儿纤维连接蛋白免疫层析检测试纸条和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫层析检测试纸条，从而一次取样，即可对胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1两个早产指标进行检测；避免了反复取样会刺激孕妇产生宫缩反应以及增加感染的风险。
[0016]同时检测胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1两个指标非常必要，通过本发明的使用，可以显著提高早产的阳性预测值及阴性预测值。其临床指导意义在于既可及时、尽早对高危孕妇治疗，又避免了对低危孕妇不必要的产科干预。
[0017]其可以通过一次取样同时检测胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1，应用简便，并进一步提高早产诊断的准确性，联检结果为下一步准确治疗提供了有力依据，适于大规模推广应用。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1是实施例1结构俯视图。
[0019]图2是实施例2结构俯视图。
[0020]图3是实施例3结构侧视图。
【具体实施方式】
[0021]实施例1
一种孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒，包括底板9，底板9的一面上设置有一硝酸纤维素膜7 ；
所述硝酸纤维素膜7的前端设置有一结合垫1，结合垫I后端设置若干个箭头标签2，第一不透明保护垫3设置于箭头标签2后方；第一不透明保护垫3后方设置第一检测线4，第一检测线4后方设置质控线6 ；
所述硝酸纤维素膜7的后端设置第二不透明保护垫8。
[0022]所述第一检测线4和质控线6之间还设置有第二检测线5。[0023]所述结合垫I含抗人磷酸化IGFBP-1胶体金标记抗体和抗人fFN胶体金标记抗体；第一检测线4包被抗人磷酸化IGFBP-1抗体；第二检测线5包被抗人fFN抗体。
[0024]所述孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒包括胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫层析检测试纸条，即只包括一条检测试纸条，可以同时检测胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1。
[0025]实施例2
一种孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒，包括底板9，底板9的一面上设置有一硝酸纤维素膜7 ；
所述硝酸纤维素膜7的前端设置有一结合垫1，结合垫I后端设置若干个箭头标签2，第一不透明保护垫3设置于箭头标签2后方；第一不透明保护垫3后方设置第一检测线4，第一检测线4后方设置质控线6 ；
所述硝酸纤维素膜7的后端设置第二不透明保护垫8。
[0026]所述联检试剂盒由两个相同结构的联检试剂盒并排放置于同一个盒体内构成。
[0027]所述并列的一个结合垫I含抗人磷酸化IGFBP-1胶体金标记抗体，所对应的第一检测线4包被抗人磷酸化IGFBP-1抗体；并列的另一个结合垫I含抗人fFN胶体金标记抗体，所对应的第二检测线5包被抗人fFN抗体。
[0028]实施例3
一种孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒，包括底板9，底板9的一面上设置有一硝酸纤维素膜7 ；
所述硝酸纤维素膜7的前端设置有一结合垫1，结合垫I后端设置若干个箭头标签2，第一不透明保护垫3设置于箭头标签2后方；第一不透明保护垫3后方设置第一检测线4，第一检测线4后方设置质控线6 ；
所述硝酸纤维素膜7的后端设置第二不透明保护垫8。
[0029]所述底板9 一侧的结合垫I含抗人磷酸化IGFBP-1胶体金标记抗体，所对应的第一检测线4包被抗人磷酸化IGFBP-1抗体；另一侧的结合垫I含抗人fFN胶体金标记抗体，所对应的第二检测线5包被抗人fFN抗体。
[0030]实施例4
一种孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒的制备:
(I)胶体金标记:用于早产诊断的磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体(抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1)胶体金标记方法如下:用碳酸钾溶液调节50mL胶体金溶液pH值至7.7 ;在搅拌的条件下,逐滴缓慢将0.65mL lmg/mL待标记抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体加入上述胶体金溶液中，混匀，室温静置30min ;将12.5mL封闭液缓慢加入上述胶体金溶液中，混匀，室温静置30min ；8000g 4°C离心lh，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用25mL洗涤液溶解，6000g 4°C离心lh，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用
1.2mL洗涤液溶解，转入1.5mL离心管中，4500g 4°C离心lh，去上清；所有沉淀用ImL胶体金抗体重悬液重悬，4°C保存。
[0031]用于早产诊断的胎儿纤维连接蛋白抗体(抗人胎儿纤维连接蛋白)胶体金标记方法同上。
[0032](2)胶体金垫的喷点:用于早产诊断的磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体(抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1)胶体金垫的喷点方法如下:胶体金抗体溶液稀释:用胶体金抗体重悬液将上述制备的胶体金抗体结合物稀释4倍；设定点膜仪，开启点膜仪的电源，设定喷点程序，喷点量为8uL/cm ;1号管道为喷点通道；点膜仪初始化:将I号管道置于胶体金抗体重悬溶液中，选择初始化程序，初始化6个循环；喷点:将金标垫按固定位置平放在点膜仪上，按控制面板上“G0”键开始喷点，点完后取下，检查喷点好的金标垫，喷点的胶体金抗体条带均匀、连续和贯通整个金标垫的直线为合格喷点品，两条直线中出现断点为不合格喷点品；每放一片金标垫，按一次控制面板上的“G0”键为喷点一次(一片)；喷点结束，将喷点的金标垫置于室温中自然干燥I小时，膜上应看不到喷点痕迹。
[0033]用于早产诊断的胎儿纤维连接蛋白抗体(抗人胎儿纤维连接蛋白)胶体金垫喷点方法同上。
[0034](3)硝酸纤维素膜的制备:用于早产诊断的磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体(抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1)硝酸纤维素膜制备方法如下:取羊抗人IGFBP-1多克隆抗体500ug，加到5mL刻度离心管中，抗体稀释液至lmL，容器标记T标志。取羊抗鼠IgG抗体25uL，加到5mL刻度离心管中,抗体稀释液至ImL,容器标记C标志。设定点膜仪，开启点膜仪的电源，设定喷点程序，喷点量为luL/cm ； I号管道为检测带喷点通道，2号管道为对照带喷点通道；点膜仪初始化:将I号管道置于检测带溶液中，将2号管道置于对照带溶液中，选择初始化程序，初始化6个循环；喷点:将硝酸纤维素膜按固定位置平放在点膜仪上，按控制面板上“G0”键开始喷点，点完后取下，检查喷点好的硝酸纤维素膜，检测带和对照带为两条均匀、连续和贯通整个硝酸纤维素膜的直线为合格喷点品，两条直线中出现断点为不合格喷点品；每放一片硝酸纤维素膜，按一次控制面板上的“G0”键为喷点一次(一片)；喷点结束，将喷点的硝酸纤维素膜置于室温中自然干燥I小时，膜上应看不到喷点痕迹。
[0035]用于早产诊断的胎儿纤维连接蛋白抗体(抗人胎儿纤维连接蛋白)硝酸纤维素膜制备方法同上。
[0036](4)贴膜和切膜:将底板上较宽部分的保护纸除去，沿上面保护纸的下边缘，将划好线的硝酸纤维素膜，以C线在上方的方式贴到底板板上；将胶体金垫贴在T线下方，与NC膜少许接触；将样品垫贴在胶体金垫下方，与胶体金垫少许接触；接着除去上方保护纸，将吸水纸贴在NC膜的上方，与NC膜少许接触；将保护纸及指示带纸逐一贴在组装好的试纸条外面，组装成大卡。
[0037]接通切割机电源，设定切膜程序，设定切割宽度为4mm ;将大卡合格品平放入切割机平台轨道中，正面朝上，按操作面板上“G0”键，开始切割；每放一片大卡合格品，按操作面板上“G0”键一次，直至切割完所有大卡合格品；切割完成后，分别将用于检测胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1的试纸条并列黏贴于底板上，组成并列式的胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试纸条。
[0038](5)试剂盒组装:取铝箔袋和干燥剂；打开热封机，预热；将待装袋的试纸条、I袋干燥剂装入铝箔袋中；按照规定的长度切断装有试纸条和干燥剂的铝箔袋；用热封机封好招猜袋；贴上标签。[0039]本发明的孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒包括胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫层析检测试纸条，或者包括胎儿纤维连接蛋白免疫层析检测试纸条和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫层析检测试纸条。
[0040]如图1所示，所述孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒包括胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫层析检测试纸条，即只包括一条检测试纸条，可以同时检测胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1。
[0041]如图2和3所示，所述孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒包括胎儿纤维连接蛋白免疫层析检测试纸条和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫层析检测试纸条，即包括两条检测试纸条，分别同时检测胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1。
[0042]总所周知，免疫层析检测试纸条一般自上而下依次由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组成；所述结合垫上包被有免疫标记抗体，硝酸纤维素膜上包被有抗体。检测时，免疫标记抗体和抗体将分别与被检测物质结合从而形成夹心结构。
[0043]较佳地，所述胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫层析检测试纸条的结合垫上具有胎儿纤维连接蛋白检测免疫标记抗体和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测免疫标记抗体，所述胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫层析检测试纸条的硝酸纤维素膜上包被有胎儿纤维连接蛋白检测抗体和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测抗体。
[0044]较佳地，所述胎儿纤维连接蛋白免疫层析检测试纸条的结合垫上具有胎儿纤维连接蛋白检测免疫标记抗体，所述胎儿纤维连接蛋白免疫层析检测试纸条的硝酸纤维素膜上包被有胎儿纤维连接蛋白检测抗体，所述磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫层析检测试纸条的结合垫上具有磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测免疫标记抗体，所述磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫层析检测试纸条的硝酸纤维素膜上包被有磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测抗体。
[0045]更佳地，所述胎儿纤维连接蛋白检测免疫标记抗体是抗胎儿纤维连接蛋白免疫标记抗体，所述胎儿纤维连接蛋白检测抗体是抗胎儿纤维连接蛋白抗体，所述磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测免疫标记抗体是抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫标记抗体，所述磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测抗体是抗人磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体。
[0046]如图1-3所示，所述胎儿纤维连接蛋白检测免疫标记抗体是抗人胎儿纤维连接蛋白免疫标记抗体，所述胎儿纤维连接蛋白检测抗体是抗人胎儿纤维连接蛋白抗体。显然，其中的胎儿纤维连接蛋白免疫标记抗体和抗人胎儿纤维连接蛋白抗体结合胎儿纤维连接蛋白的不同部位。
[0047]免疫标记抗体采用常规的免疫标记手段标记。更佳地，所述胎儿纤维连接蛋白检测免疫标记抗体是胎儿纤维连接蛋白检测胶体金标记抗体或胎儿纤维连接蛋白检测乳胶标记抗体，所述磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测免疫标记抗体是磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测胶体金标记抗体或磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测乳胶标记抗体。
[0048]如图1-3所示，所述胎儿纤维连接蛋白检测免疫标记抗体是胎儿纤维连接蛋白检测胶体金标记抗体，所述磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测免疫标记抗体是磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测胶体金标记抗体。
[0049]所述胎儿纤维连接蛋白免疫层析检测试纸条和所述磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫层析检测试纸条可以采用任何合适的形式放置。
[0050]如图2所示，所述胎儿纤维连接蛋白免疫层析检测试纸条和所述磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫层析检测试纸条并列设置。
[0051]如图3所示，所述孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒还包括底板，所述胎儿纤维连接蛋白免疫层析检测试纸条和所述磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1免疫层析检测试纸条分别贴合在所述底板的上下表面上。
[0052]本发明孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒还可以包括免疫层析检测试剂盒的其它常见试剂，例如样品缓释液等等。 [0053]本发明孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒的检测试纸条的制备过程简述如下，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如 Sambrook 等人，分子克隆:实验室手册(New York: Cold Spring Harbor LaboratoryPress, 1989)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。
[0054]应用实施例1
取实施例1-3制备的检测盒做具体测试。
[0055]试纸条检测端(图1-3中试纸条的左端)带有吸水纸，反应时插入样品中。
[0056]检测时如果C区出现条带即质控线6，则T区出现条带(第一检测线4和第二检测线5)即表示样品为阳性；未出现条带则表示阴性。
[0057]检测时如果C区未出现条带，则表示试纸条失效。
[0058]检测结果如下:
【权利要求】
1.一种孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒，其特征是:包括底板(9)，底板(9)的一面上设置有一硝酸纤维素膜(7)； 所述硝酸纤维素膜(7 )的前端设置有一结合垫(I)，结合垫(I)后端设置若干个箭头标签(2)，第一不透明保护垫(3)设置于箭头标签(2)后方；第一不透明保护垫(3)后方设置第一检测线(4)，第一检测线(4)后方设置质控线(6)； 所述硝酸纤维素膜(7)的后端设置第二不透明保护垫(8)。
2.如权利要求1所述孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒，其特征是:所述第一检测线(4)和质控线(6)之间还设置有第二检测线(5)。
3.如权利要求1所述孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒，其特征是:所述联检试剂盒由两个相同结构的联检试剂盒并排放置于同一个盒体内构成。
4.如权利要求1所述孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒，其特征是:所述底板(9)的另一面上同样设置有硝酸纤维素膜(7)，硝酸纤维素膜(7)上依次设置结合垫(I)、箭头标签(2)、第一不透明保护垫(3)、第二检测线(5)、质控线(6)和第二不透明保护垫(8)。
5.如权利要求2所述孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒，其特征是:所述结合垫(I)含抗人磷酸化IGFBP-1胶体金标记抗体和抗人fFN胶体金标记抗体；第一检测线(4)包被抗人磷酸化IGFBP-1抗体；第二检测线(5)包被抗人fFN抗体。
6.如权利要求3所述孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒，其特征是:所述并列的一个结合垫(I)含抗人磷酸化IGFBP-1胶体金标记抗体，所对应的第一检测线(4)包被抗人磷酸化IGFBP-1抗体；并列的另一个结合垫(I)含抗人fFN胶体金标记抗体,所对应的第二检测线(5)包被抗人fFN抗体。
7.如权利要求4所述孕妇早产胎儿纤维连接蛋白和磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1联检试剂盒，其特征是:所述底板(9) 一侧的结合垫(I)含抗人磷酸化IGFBP-1胶体金标记抗体，所对应的第一检测线(4)包被抗人磷酸化IGFBP-1抗体；另一侧的结合垫(I)含抗人fFN胶体金标记抗体,所对应的第二检测线(5)包被抗人fFN抗体。
【文档编号】G01N33/531GK103543273SQ201310539639
【公开日】2014年1月29日 申请日期:2013年11月4日 优先权日:2013年11月4日
【发明者】时振华, 刘岩, 韦彦余 申请人:无锡博慧斯生物医药科技有限公司