一种用乙醇变性快速测定乳制品中蛋白质掺假的方法
【专利摘要】本发明将牛奶用考马斯亮兰法测定，其吸光度为A前。同时，将其用1：2的乙醇变性沉淀，过滤后，滤液用相同的考马斯亮兰法测定，吸光度为A后。计算A后/A前作为判断牛奶是否掺假的根据。根据大量测量数据，正常比值应该在9％～12％，高于此数值，即为加入其它含氮物质，可判为掺假。所需时间仅20分钟，大大缩短了判断掺假的时间。有色样品进行脱色后采用上述方法测定。奶粉可稀释后后采用上述方法测定。
【专利说明】—种用乙醇变性快速测定乳制品中蛋白质掺假的方法
【技术领域】
[0001]乳制品中总蛋白质含量可用比色法测定，将发明将乳制品用考马斯亮兰法测定，其吸光度为Aw。同时，将其用1:2的乙醇变性沉淀，过滤后，滤液用相同的考马斯亮兰法测定，吸光度为ΑΒ。计算Ajs/Ati作为判断牛奶是否掺假的根据。并和凯氏定氮法的数据进行校正，两者扣除后，可得到乳制品中非蛋白质的含氮物质含量，使其得到更好的利用于食品、医药和保健品等领域。
【背景技术】
[0002]牛奶、奶粉等乳制品由于营养价值高，随着人民生活水平的提高，得到快速发展。
[0003]到2010年，中国将有5700万户城市家庭步入中产阶层，其中多数中国城市家庭处于4-6个成年人抚养一个孩子的阶段。届时，中国将可能成为高端婴幼儿奶粉市场的第一大市场。相信，中国的乳制品市场有着巨大的发展空间。
[0004]乳制品作为新生婴幼儿的重要的营养来源，甚至在很大程度上替代了母乳的分量，越来越直接地影响着千万新生儿的身体健康和生命安全，并直接影响着千千万万个普通家庭。自“三聚氰胺”事件发生后，我国的乳制品市场格局发生了剧烈的变革，但乳制品安全依然成为行业企业乃至全社会最关心的问题。同时，也对牛奶、奶粉等乳制品的质量安全提出了更高的要求。
[0005]蛋白质是乳制品最重要的营养成分，是乳制品作为营养补充剂的根本指标，对蛋白质含量的检测是控制乳产品质量的重要手段。但是，由于现行的测定乳制品的方法是凯氏定氮法，测定的是总的含氮量，这给不法分子以可乘之机，可以在产品中加入尿素、三聚氰胺等高含氮的物质，以冒充蛋白质。最近，发生的三聚氰胺奶粉事件，给少年儿童的健康造成了极大的损害，因此，建立一种能快速甄别掺假乳制品的测定方法是十分必要的。
[0006]众所周知，现行的标准蛋白质测定方法是凯氏定氮法，其基本原理是:食品(以及所有含氮化合物)经加入硫酸消化使蛋白质和各种含氮化合物分解，其中氮素与硫酸化合成硫酸铵。然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸液吸收后，再用盐酸或硫酸滴定根据盐酸消耗量，再乘以换算系数即为蛋白含量。该方法准确度较高，并且由于历史的原因，是一种公认的标准方法，各种数据容易比较、对照，所以，至今仍是标准的蛋白质测定方法。
[0007]但该方法繁琐、费时、费力，生产过程中，要即时测定、控制很难；由于难以同时测定多个样品，要检测大量样品时，十分困难。
[0008]另一个严重的困扰是，在已知含有其他含氮化合物的时候必须测定非蛋白质类含氮化合物的量加以扣除，但是，当一个非自然物质含有的非蛋白质类含氮化合物不明确的情况下，就无法扣除，测定方法就产生误差。特别是当产品中非法地加入尿素、三聚氰胺等含氮的物质时，均可被消化、测定，并无法扣除，即使现在已经研究了测定尿素、三聚氰胺的方法，但是，不能排除不法分子用其他非蛋白质类含氮化合物冒充作假。
[0009]总之，凯氏定氮法费时、费力，也难易判断出掺假，不能快速测定是否掺假。
[0010]其它蛋白质分析方法有很多，有电泳法、质谱法、光谱法等。综合考虑，光谱法快速、方便、成本低，是一种切实可行的方法。
[0011]常用的分析蛋白质的光谱法包括:紫外光谱法、双缩脲法、Folin酚法、BCA法、考
马斯売兰法等。
[0012]紫外光谱法是直接利用蛋白质在280nm的吸收进行测定，该法简便，使用的仪器比较普及，设备价格不高。
[0013]双缩脲法是利用蛋白质中的肽键和碱性硫酸铜中的铜离子形成紫色络合物，从而进行定量。该法选择性和准确度好，精密度好；呈色稳定性好，试剂单一，方法简便。
[0014]Folin酹法是双缩脲反应的发展,它结合了双缩脲反应法中铜盐反应与Folin试剂反应的特点，首先在碱性溶液中形成铜与蛋白质复合物，然后该复合物通过芳香族氨基酸残基、酪氨酸和色氨酸残基的迅速反应及肽链或极性侧链或两者的铜络合物较慢的反应，而把磷钥酸、磷鹤酸色团还原成深蓝色，在750nm处测定光吸收值。此颜色反应和蛋白质含量在一定范围内成线性关系。该法灵敏度较高。
[0015]BCA法的原理是在碱性溶液中，蛋白质将二价铜还原成一价铜，后者与测定试剂中BCA[bicin-choninic acid](金鸡宁)生成一个在562nm处具有最大光吸收的紫色复合物。复合物的光吸收强度与蛋白质浓度正比。BCA法操作简单，灵敏度与Folin —酚法相似，试剂十分稳定，因此对时间控制不需那么严格。显色后，Ih内吸光度值无变化。抗试剂干扰的能力强。
[0016]考马斯亮兰是利用G_250(—种染料)和蛋白质结合，兰色加深，测定595nm处吸光度进行定量。该法灵敏度高，快速简便，干扰少。
[0017]其它各种各种方法则更加繁琐。
[0018]以上各种方法，均需要制作标准曲线，所需时间较长；判断掺假也较困难。
[0019]现在，一般通过色谱法等方法检测掺假的成分，但色谱法是针对各个物质分别测定，从定性到定量，时间很长，几天都算短的。
[0020]总之，现有方法要判断乳制品中掺假，时间较长。鉴于以上原因，必须寻找快速测定蛋白质掺假的方法。
【发明内容】
[0021]本发明将牛奶用考马斯亮兰法测定，其吸光度为Aw。同时，将其用1:2的乙醇变性沉淀，过滤后，滤液用相同的考马斯亮兰法测定，吸光度为ΑΒ。计算Ajs/Ati作为判断牛奶是否掺假的根据。根据大量测量数据，正常比值应该在9%?12%，高于此数值，即为加入其它含氮物质，可判为掺假。
[0022]所需时间仅20分钟，大大缩短了判断掺假的时间。
[0023]有色样品进行脱色后采用上述方法测定。
[0024]奶粉可稀释后后采用上述方法测定。
【具体实施方式】
[0025]实施例一
[0026]1.取市售5种牛奶各lmL，分别放入I?5号的IOOmL容量瓶中，定容至刻度线。从各容量瓶中取Iml稀释过的牛奶放入相应的25mL比色管中，再加入5mlL配制好的考马斯亮蓝，定容到IOmL刻度线，摇匀。用紫外分光光度计在595nm处测定吸光度，计为Aw。
[0027]2.将上述牛奶各取10mL，加入I:2乙醇(即20mL)，振摇，静置，过滤，取滤液，用上述完全相同的考马斯亮蓝法测定，并考虑稀释效应，吸光度为ΑΒ。
[0028]3.计算A后/Ati的比值，结果如下:
[0029]
【权利要求】
1.选择合适的比色法-考马斯亮蓝法，测定蛋白质含量，其吸光度为Aw。
2.选择合适的试剂乙醇，选择合适的比例1:2，进行变性沉淀，并过滤。
3.滤液用相同的考马斯亮兰法测定，吸光度为ΑΒ。
4.计算Ajs/Ati作为判断牛奶是否掺假的根据。根据大量测量数据，正常比值应该在9 %?12 %，高于此数值，即为加入其它含氮物质，可判为掺假。
5.有色样品进行脱色后采用上述权利要求1-4方法测定。
6.奶粉可稀释后后采用上述权利要求1-4方法测定。
【文档编号】G01N21/33GK103575678SQ201310582126
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2013年11月15日 优先权日:2013年11月15日
【发明者】宋健, 赵泳 申请人:江南大学