一种简便测定乳制品中非蛋白质的含氮物质含量的方法
【专利摘要】本发明用酪蛋白作为标准物质，用凯氏定氮法和比色法同时测定，以此计算出校正系数，可将比色法计算结果转化成凯氏定氮法的总氮量。样品测定时，两种方法同时测定，将比色法结果转化成凯氏定氮法的结果，并从凯氏定氮法的总氮量中扣除，即可得到乳制品中非蛋白质的含氮物质的含量。有色样品进行脱色后采用上述方法测定。奶粉可稀释后后采用上述方法测定。
【专利说明】一种简便测定乳制品中非蛋白质的含氮物质含量的方法
【技术领域】
[0001]乳制品中中总氮物质可用凯氏定氮法测定，总蛋白质含量可用比色法测定，并和凯氏定氮法的数据进行校正，两者扣除后，可得到乳制品中非蛋白质的含氮物质含量，使其得到更好的利用于食品、医药和保健品等领域。
【背景技术】
[0002]中国乳制品行业起步晚，起点低，但发展迅速。特别是改革开放以来，奶类生产量以每年两位数的增长幅度迅速增加，远远高于I %的同期世界平均水平。中国乳制品产量和总产值在最近的10年内增长了 10倍以上，已逐渐吸引了世界的眼光。但同时，中国人均奶消费量与发达国家相比，甚至与世界平均水平相比，差距都还十分悬殊。改革开放以来，中国奶业走上了发展的快车道，进入快速增长期。奶类生产始终保持着高速增长势头。
[0003]牛乳含有几乎人体所需的全部营养素及具有保健功能的生物活性物质，营养价值非常丰富，特别是对青少年的健康成长起了重要作用。同时，也对牛奶、奶粉等乳制品的质量安全提出了更高的要求。
[0004]蛋白质是乳制品最重要的营养成分，是乳制品作为营养补充剂的根本指标，对蛋白质含量的检测是控制乳产品质量的重要手段。但是，由于现行的测定乳制品的方法是凯氏定氮法，测定的是总的含氮量，这给不法分子以可乘之机，可以在产品中加入尿素、三聚氰胺等高含氮的物质，以冒充蛋白质。最近，发生的三聚氰胺奶粉事件，给少年儿童的健康造成了极大的损害，因此，建立一种能甄别掺假的非蛋白质的含氮物质含量的测定方法是十分必要的。
[0005]众所周知，现行的蛋白质测定方法是凯氏定氮法，其基本原理是:食品(以及所有含氮化合物)经加入硫酸消化使蛋白质和各种含氮化合物分解，其中氮素与硫酸化合成硫酸铵。然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸液吸收后，再用盐酸或硫酸滴定根据盐酸消耗量，再乘以换算系数即为蛋白含量。该方法准确度较高，并且由于历史的原因，是一种公认的标准方法，各种数据容易比较、对照，所以，至今仍是标准的蛋白质测定方法。
[0006]一个严重的困扰是，凯氏定氮法测定的是所有含氮物质的总量。在已知含有其他含氮化合物的时候必须测定非蛋白质类含氮化合物的量加以扣除，所以，测定乳制品中非蛋白质的含氮物质含量是十分必要的。但是，当一个非自然物质含有的非蛋白质类含氮化合物不明确的情况下，就无法扣除，测定方法就产生误差。特别是当产品中非法地加入尿素、三聚氰胺等含氮的物质时，均可被消化、测定，并无法扣除，即使现在已经研究了测定尿素、三聚氰胺的方法，但是，不能排除不法分子用其他非蛋白质类含氮化合物冒充作假。现在，一般通过色谱法等方法检测掺假的成分，但如果加入其它的高含氮的物质，则需要另外加以研究，检测方法将始终处于落后被动的局面。并且色谱法测定各种掺假物质，必须已知，且要分别测定，十分复杂。鉴于以上原因，必须寻找一种简便测定乳制品中非蛋白质的含氮物质含量的方法。
【发明内容】
[0007]常用的分析蛋白质的光谱法包括:紫外光谱法、双缩脲法、Folin酚法、BCA法、考
马斯売兰法等。
[0008]紫外光谱法是直接利用蛋白质在280nm的吸收进行测定，该法简便，使用的仪器比较普及，设备价格不高。
[0009]双缩脲法是利用蛋白质中的肽键和碱性硫酸铜中的铜离子形成紫色络合物，从而进行定量。该法选择性和准确度好，精密度好；呈色稳定性好，试剂单一，方法简便。
[0010]Folin酹法是双缩脲反应的发展,它结合了双缩脲反应法中铜盐反应与Folin试剂反应的特点，首先在碱性溶液中形成铜与蛋白质复合物，然后该复合物通过芳香族氨基酸残基、酪氨酸和色氨酸残基的迅速反应及肽链或极性侧链或两者的铜络合物较慢的反应，而把磷钥酸、磷鹤酸色团还原成深蓝色，在750nm处测定光吸收值。此颜色反应和蛋白质含量在一定范围内成线性关系。该法灵敏度较高。
[0011]BCA法的原理是在碱性溶液中，蛋白质将二价铜还原成一价铜，后者与测定试剂中BCA[bicin—choninic acid](金鸡宁)生成一个在562nm处具有最大光吸收的紫色复合物。复合物的光吸收强度与蛋白质浓度正比。BCA法操作简单，灵敏度与Folin —酚法相似，试剂十分稳定，因此对时间控制不需那么严格。显色后，Ih内吸光度值无变化。抗试剂干扰的能力强。
[0012]考马斯亮兰是利用G_250(—种染料)和蛋白质结合，兰色加深，测定595nm处吸光度进行定量。该法灵敏度高，快速简便，干扰少。
[0013]本发明用酪蛋白作为标准物质，用凯氏定氮法和比色法同时测定，以此计算出校正系数，可将比色法计算结果转化成凯氏定氮法的总氮量。样品测定时，两种方法同时测定，将比色法结果转化成凯氏定氮法的结果，并从凯氏定氮法的总氮量中扣除，即可得到乳制品中非蛋白质的含氮物质的含量。乳制品中非蛋白质的含氮物质含量。
[0014]有色样品进行脱色后采用上述方法测定。
[0015]奶粉可稀释后后采用上述方法测定。
【具体实施方式】
[0016]实施例一
[0017]1.取酪蛋白为标准物质，用凯氏定氮法和考马斯亮兰法同时进行测定，将结果进行比较。考马斯亮兰数值/凯氏定氮法数值=1.11，所以，将考马斯亮兰法转化成凯氏定氮法的校正系数为0.901.[0018]2.市售牛奶样品5份，用凯氏定氮法测定总氮量(以蛋白质含量计算)，作为A，结果如下:
【权利要求】
1.选择合适的方法-凯氏定氮法，测定所有含氮物质总量(包括蛋白质和非蛋白质含量)O
2.选择合适的比色法-考马斯亮蓝法，测定蛋白质含量。
3.用酪蛋白作为标准物质，用凯氏定氮法和比色法同时测定，以此计算出校正系数K，可将比色法计算结果转化成凯氏定氮法的总氮量。
4.用如权利要求1所述的方法和如权利要求2所述的比色法同时测定样品。凯氏定氮法测定总氮量(以蛋白质含量计算)，作为A。考马斯亮蓝法计算的总氮量(以蛋白质含量计算)，并XK，计算出转化值，作为B。非蛋白质的含氮物质的含量(以蛋白质含量计算)则为A-B。
5.有色样品进行脱色后采用上述权利要求1-4方法测定。
6.奶粉可稀释后后采用上述权利要求1-4方法测定。
【文档编号】G01N31/16GK103575686SQ201310582127
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2013年11月15日 优先权日:2013年11月15日
【发明者】宋健, 赵泳 申请人:江南大学