Cd30+癌症的检测和治疗的制作方法
【专利摘要】本发明提供了诊断、预测、预防和治疗CD30+癌症的方法。
【专利说明】CD30+癌症的检测和治疗
【背景技术】
[0001] CD30 为 120 千道尔顿（KD)的跨膜糖蛋白（可SM:Froeseetal.，1987，J. Immunol. 139:2081-87)，是肿瘤坏死因子受体（TNFR)超家族的成员。⑶30是霍奇金淋巴瘤 (HL)和间变性大细胞淋巴瘤（ALCL)内的恶性细胞成熟的标志。CD30最初是使用单克隆抗 体Ki_l在培养的H-R(Hodgkin's-Reed Steinberg)细胞中被鉴定的。
[0002] ⑶30在人体正常组织中表达有限。这使得⑶30成为有吸引力的癌症治疗目标。 但是，仅在少数癌症中确定⑶30表达。此外，对于一些癌症，⑶30表达的报告伴随着具有非 CD30相关的交叉反应性的抗体，例如，Novocastra(-家英国公司）的NCL-L-CD30抗体，并 且是不可靠的。确定表达CD30的癌症和能够利用针对CD30的制剂进行治疗的癌症将是有 益的。本发明解决了这个需求和其他需求。
【发明内容】
[0003] 本发明尤其提供了卵巢癌（例如卵巢浆液性癌）、皮肤癌（例如黑色素瘤和皮肤鳞 状细胞癌）、乳癌（例如三阴性乳腺癌）、甲状腺癌（例如甲状腺未分化癌）、胰腺癌（例如 未分化胰癌）、肺癌（例如小细胞和鳞状上皮细胞肺癌）、肛门癌（例如肛门鳞状细胞癌）、 胸腺癌、子宫内膜癌和原发不明癌的诊断、预后、预防、治疗以及监测治疗的方法。本发明还 提供了泌尿生殖鳞状细胞癌、妇科癌肉瘤、尿道鳞状细胞癌、子宫癌肉瘤、间质细胞瘤、支持 细胞瘤和胰腺癌的诊断、预后、预防、治疗以及监测治疗的方法。
[0004] 一方面，本发明提供了一种在患者的样品中检测⑶30表达的方法。该样品可以来 自，例如，卵巢、皮肤、子宫内膜、肺、乳腺、甲状腺、胰腺、肛门、胸腺或其他肿瘤部位（例如， 患者的妇科癌症肿瘤部位或泌尿生殖道癌肿瘤部位）。在一些实施方案中，所述样品是组织 样品。一方面，所述组织被固定。一方面，所述固定的组织样品与特异性结合CD30的抗体 接触，并且该抗体与固定的组织样品的结合被检测，以确定CD30是否在样本中被表达。固 定的组织样品中⑶30的表达表明该患者具有表达0)30的癌症（O)30expressing cancer)。 在一些实施方案中，所述样品用福尔马林固定并且用石蜡包埋。
[0005] 另一方面，本发明提供了一种对癌症患者进行诊断、预后、确定治疗方案或监测治 疗的方法。一方面，患者具有原发性或转移性卵巢癌（例如，原发性或转移性卵巢浆液性 癌）。另一方面，患者具有原发性或转移性皮肤癌（例如原发或转移性黑色素瘤和/或皮肤 鳞状细胞癌）。另一方面，患者具有原发性或转移性乳腺癌（例如原发性或转移性三阴性乳 腺癌）。另一方面，患者具有原发性或转移性甲状腺癌（例如原发性或转移性甲状腺未分化 癌）。另一方面，患者具有原发性或转移性胰腺癌（例如原发性或转移性的未分化胰癌或 腺癌）。另一方面，患者具有原发性或转移性肺癌（例如原发性或转移性小细胞或鳞状细 胞肺癌）。另一方面，患者具有原发性或转移性肛门癌（例如原发性或转移性肛管鳞状细 胞癌）。另一方面，患者具有原发性或转移性胸腺肿瘤（例如原发性或转移性胸腺癌）。另 一方面，患者具有原发性或转移性子宫内膜癌。另一方面，患者具有未知原发性癌。另一方 面，患者具有原发性或转移性尿道癌（例如尿道鳞状细胞癌）。另一方面，患者具有原发性 或转移性子宫癌肉瘤。所述方法包括在取自患者的肿瘤样品细胞中检测CD30的表达，其中 可检测的CD30表达的存在被用于患者的诊断、预后、确定治疗方案或监测治疗。样品可以 是福尔马林固定并且石蜡包埋的样品。如果测定步骤表明有可检测水平的CD30,所述方法 还进一步包括给患者施用有效剂量方案的针对⑶30的制剂（例如，抗-⑶30抗体或抗⑶30 抗体药物缀合物）。在一些方面，⑶30表达以一定水平存在将被作为一个临界值，以确定患 者是否有可能受益于针对CD30的制剂。例如，一方面，10%的临界值被将患者归类到有可 能从针对⑶30的制剂中获益的一员。因此，在这种实施方案中，如果取自患者的肿瘤样品 具有至少10%的⑶30阳性的肿瘤细胞（例如，样品中恶性和/或异型细胞的至少10%是 CD30阳性）时，患者被归类为可能受益于针对CD30的制剂治疗的病人。在一些实施方案 中，取自患者的肿瘤样品将具有至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、 60%、70%、75%、80%或85%的^30阳性的肿瘤细胞（8卩，样品中恶性和/或异型细胞的 至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、75%、80%或85%是 CD30阳性）。在优选的实施方案中，当使用特异性结合于CD30的胞外结构域的抗体（例如 BerH2 抗体）作为检测抗体时，至少 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、 60 %、70 %、75 %、80 %或85 %的样品中的肿瘤细胞表达⑶30。
[0006] 另一方面，本发明提供了一种识别能够响应针对CD30的制剂治疗的患者的方法； 提供了一种识别可能从针对CD30的制剂治疗中受益的患者的方法；和/或提供了一种预测 患者对针对CD30的制剂的反应性的方法，其中，所述患者具有卵巢癌、皮肤癌、乳腺癌、甲 状腺癌、胰腺癌、肺癌、肛门癌、胸腺癌、子宫内膜癌或未知原发性癌症。所述癌症可以是原 发性癌症或转移性癌症。所有的这些方法包括：在取自患者的肿瘤样品细胞中测定CD30表 达，其中可检测的⑶30表达的存在被用于确定病人可能响应针对⑶30的制剂。在一些方面 中，具有较高CD30表达水平的患者被确定为具有更大可能性响应针对CD30的制剂的患者。 例如，如果取自患者的肿瘤样品具有至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、 50%、60%、70%、75%、80%或85%的0)30+阳性的肿瘤细胞（8卩，样品中恶性和/或异型 细胞的至少 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、75%、80% 或 85%是CD30阳性）时，表明患者有更大的可能性响应针对CD30的制剂。在优选的实施方 案中，当使用BerH2抗体或另一种特异性结合于CD30胞外结构域的抗体作为检测抗体时， 样品中至少 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、75%、80% 或 85%的肿瘤细胞表达⑶30。一方面，本发明提供了一种检测患者组织样品中⑶30表达的方 法。根据癌症的类型，组织样品可以来自，例如，病人的卵巢、皮肤、肺、乳腺、甲状腺、胰腺、 子宫内膜、肛门、胸腺或其他肿瘤部位。在一些实施方案中，组织被固定。被固定的组织样 品与特异性结合CD30的抗体接触，检测抗体与固定的组织样品的结合，以确定样品中CD30 是否被表达。固定的组织样品内⑶30的表达表明该患者有表达⑶30的癌症。在一些实施 方案中，所述样品是用福尔马林固定并且用石蜡包埋的。
[0007] 另一方面，本发明提供了一种识别适合针对⑶30的制剂的患者的方法。所述方法 包括：在取自患者的肿瘤样品中测定⑶30的表达水平。一方面，肿瘤样品中⑶30的存在足 以表明该患者适合针对CD30的制剂。另一方面，当样品中恶性或异型细胞的至少10%表达 ⑶30时，表明患者适合针对⑶30的制剂。另一方面，当样品中恶性或异型细胞的至少15% 表达CD30时，表明患者适合针对CD30的制剂。另一方面，当样品中恶性或异型细胞的至少 20%表达⑶30时，表明患者适合针对⑶30的制剂。另一方面，当样品中恶性或异型细胞的 至少25%表达⑶30时，表明患者适合适合针对⑶30的制剂。另一方面，当样品中恶性或异 型细胞的至少30 %表达⑶30时，表明患者适合针对⑶30的制剂。另一方面，当样品中恶性 或异型细胞的至少35%表达CD30时，表明患者适合针对CD30的制剂。另一方面，当样品中 恶性或异型细胞的至少45%表达⑶30时，表明患者适合针对⑶30的制剂。另一方面，当样 品中恶性或异型细胞的至少40%表达⑶30时，表明患者适合针对⑶30的制剂。另一方面， 当样品中恶性或异型细胞的至少50%表达⑶30时，表明患者适合针对⑶30的制剂。另一 方面，当样品中恶性或异型细胞的至少60%表达⑶30时，表明患者适合针对⑶30的制剂。 另一方面，当样品中恶性或异型细胞的至少70%表达⑶30时，表明患者适合针对⑶30的制 齐U。另一方面，当样品中恶性或异型细胞的至少75%表达CD30时，表明患者适合针对CD30 的制剂。另一方面，当样品中恶性或异型细胞的至少80%表达CD30时，表明患者适合针对 ⑶30的制剂。另一方面，当样品中恶性或异型细胞的至少85%表达⑶30时，表明患者适合 针对CD30的制剂。患者可以具有原发性或转移性的卵巢癌、皮肤癌、乳腺癌、甲状腺癌、胰 腺癌、肺癌、肛门癌、胸腺癌、子宫内膜癌以及未知原发性癌中的任意一种。在一些方面，患 者可具有原发性或转移性泌尿生殖鳞状细胞癌或妇科癌肉瘤中的任意一种。一方面，患者 具有尿道鳞状细胞癌、子宫癌肉瘤、支持细胞瘤、间质细胞瘤或胰腺癌。例如，一方面，患者 具有卵巢原发或转移性卵巢癌（例如，原发性或转移性卵巢浆液性癌）。另一方面，患者具 有原发性或转移性皮肤癌（例如，原发或转移性黑色素瘤和皮肤鳞状细胞癌）。另一方面， 患者具有原发性或转移性乳腺癌（例如，原发性或转移性三阴性乳腺癌）。另一方面，患者 具有原发性或转移性甲状腺癌（例如，原发性或转移性甲状腺未分化癌）。另一方面，患者 具有原发性或转移性胰腺癌（例如，原发性或转移性的未分化胰癌或腺癌）。另一方面，患 者具有原发性或转移性肺癌（例如，原发性或转移性小细胞肺癌或原发性或转移性鳞状细 胞癌）。另一方面，患者具有原发性或转移性肛门癌（例如，原发性或转移性肛管鳞状细胞 癌）。另一方面，患者具有原发性或转移性胸腺肿瘤（例如，原发性或转移性胸腺癌）。另 一方面，患者具有原发性或转移性子宫内膜癌。另一方面，患者具有未知原发性的癌。该方 法可能进一步包括使用针对CD30的制剂治疗患者的步骤。
[0008] 另一方面，本发明提供了一种治疗CD30阳性癌症的方法。该方法包括给具有癌症 和具有可检测的⑶30表达的患者施用针对⑶30的制剂的有效治疗方案。在某些实施方案 中，针对CD30的制剂是一种抗体或抗体药物缀合物。该抗体可具有效应子功能。患者可能 先前已经接受手术、放疗和/或使用不针对CD30且不能诱发癌症缓解的药剂的化疗治疗。 患者可能先前已经接受手术、放疗和/或化疗的治疗，但此后复发。患者可能已被重新诊断 为癌症。在一些实施方案中，所述抗体是嵌合、人源化或人类抗体。一方面，患者具有卵巢 原发或转移性卵巢癌（例如，原发性或转移性卵巢浆液性癌）。另一方面，患者具有原发性 或转移性皮肤癌（例如，原发或转移性黑色素瘤或皮肤鳞状细胞癌）。另一方面，患者具有 原发性或转移性乳腺癌（例如，原发性或转移性三阴性乳腺癌）。另一方面，患者具有原发 性或转移性甲状腺癌（例如，原发性或转移性甲状腺未分化癌）。另一方面，患者具有原发 性或转移性胰腺癌（例如，原发性或转移性的未分化胰癌或腺癌）。另一方面，患者具有原 发性或转移性肺癌（例如，原发性或转移性小细胞或鳞状细胞肺癌）。另一方面，患者具有 原发性或转移性肛门癌（例如，原发性或转移性肛管鳞状细胞癌）。另一方面，患者具有原 发性或转移性胸腺肿瘤（例如，原发性或转移性胸腺癌）。另一方面，患者具有原发性或转 移性子宫内膜癌。另一方面，患者具有未知原发性的癌。
[0009] 在一些优选的实施方案中，测定表达水平的分析在组织切片中进行，表达水平是 组织切片中CD30阳性的恶性和/或异型细胞的比例。
[0010] 通过参考以下示例性实施方案的详细描述，结合附图和表格将更好地理解本发明 的各方面。
[0011] 定义
[0012] 除非另有指明，本文中使用的下述术语和短语旨在具有下述含义。
[0013] 术语"抗体"指：(a)免疫球蛋白多肽和免疫球蛋白多肽的免疫活性部分，例如，免 疫球蛋白家族的多肽或其含有与特异性抗原（例如，CD30)免疫特异性结合的抗原结合位 点的片段；或（b)此类免疫球蛋白多肽或片段的保守取代衍生物，其能与抗原（例如，CD30) 免疫特异性结合。例如，Harlow&Lane, Antibodies :A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988)对抗体进行了一般性描述。除非上下文另有明显指示，抗 体还包括抗体衍生物或药物缀合物，将在下文中对其进行更详细地描述。
[0014] "抗体衍生物"表示通过异源分子共价连接（例如，通过异源多肽连接）修饰的或 通过正常情况下不与抗体相关的糖基化、去糖基化、乙酞化或磷酸化等修饰的如上文定义 的抗体。
[0015] 术语"单克隆抗体"指源于单个细胞克隆（包括任何真核或原核细胞克隆或噬菌 体克隆）并且并非其生产方法的抗体。因此，术语"单克隆抗体"不限于通过杂交瘤技术生 产的抗体。
[0016] "抗原"是与抗体特异性结合的实体。
[0017] 术语"抑制"或"对……的抑制"表示降低了可测量的量，或者完全阻止测量。
[0018] 术语"试剂"表示元素、化合物或分子实体，包括，例如，药物性、治疗性或药理性化 合物。试剂可以是天然的或合成的或其组合。"治疗剂"是单独或与另外的试剂组合（例 如，前药转化酶与前药组合）对癌细胞发挥治疗性（例如，有益的）效果的试剂。典型地， 可用于本文所述的方法和组合物的治疗剂是具有细胞毒性效果的那些治疗剂。
[0019] "细胞毒性剂"指对细胞具有细胞毒性效果，从而分别减少（cbpleting)或抑制细 胞群体中细胞生长的试剂。
[0020] 在⑶30抗体对表达⑶30的细胞的作用的上下文中，术语"减少（cbplete) "表示 表达⑶30的细胞的数目减少或消失。
[0021] 术语"治疗"表示：通过在表达CD30的癌症的临床或诊断症状发作之后的任何临 床阶段向受试者施用针对CD30的制剂（例如，抗CD30的抗体或抗体药物缀合物）来减慢、 停止或逆转患者中表达CD30的癌症的进程，如通过疾病的临床或诊断症状的减少或消失 来证实。治疗可能包括，例如，降低症状的严重性、症状的数目或复发频率。
[0022] 术语"三阴性乳腺癌"是指雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体 2 (HER2/neu)的临床检测均为阴性的乳腺癌。
[0023] 术语"可药用的"表示联邦或州政府管理机构许可的或美国药典或其它公认药典 中列出的用于动物的（更特别地，用于人类的）。术语"药物相容成分"表示与CD30抗体一 起施用的可药用的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体。
[0024] 在施用药物试剂的上下文中，术语"有效量"表示足以在患者中抑制表达⑶30的 癌症的一种或多种临床或诊断症状出现或减轻所述症状的试剂的量。根据本文所述的方 法，在"有效剂量方案"中施用试剂的有效量。术语"有效剂量方案"是足以实现对表达CD30 的癌症的治疗的试剂的量和给药频率的组合。
[0025] 术语"患者"包括接受诊断、预防或治疗性治疗的人和其它哺乳动物受试者。
[0026] 治疗剂典型地可基本不含不想要的污染物。这意味着试剂典型地至少为大约50w/ w(重量/重量）的纯度，以及基本上不含干扰性蛋白质和污染物。有时，试剂至少为大约 80% w/w的纯度，更优选为至少90或大约95% w/w的纯度。但是，使用常规的蛋白纯化技 术，可获得至少99% w/w的纯度的同质肽。
【具体实施方式】
[0027] I. 一般件
[0028] 本发明尤其提供了卵巢癌（例如卵巢浆液性癌）、皮肤癌（例如黑色素瘤和皮肤鳞 状细胞癌）、乳癌（例如三阴性乳腺癌）、甲状腺癌（例如甲状腺未分化癌）、胰腺癌（例如 未分化胰癌）、肺癌（例如小细胞和鳞状上皮细胞肺癌）、肛门癌（例如肛门鳞状细胞癌）、 胸腺癌、子宫内膜癌和原发不明癌的诊断、预后、预防、治疗以及监测治疗的方法。本发明尤 其提供了泌尿生殖鳞状细胞癌、妇科癌肉瘤、尿道鳞状细胞癌、子宫癌肉瘤、支持细胞瘤、间 质细胞瘤和胰腺癌的诊断、预后、预防、治疗以及监测治疗的方法。在一些方面，CD30的抗体 被用于诊断、预后、预防、治疗以及监测治疗的方法。这些方法部分基于实施例中所呈现的 结果的前提下，即CD30在某些癌症中表达。在来自癌组织的福尔马林固定石蜡包埋（FFPE) 的样品中，利用结合CD30的抗体检测这种表达。
[0029] II.针对⑶30的抗体
[0030] 针对CD30的抗体可用于癌症（例如，卵巢癌、皮肤癌、乳腺癌、甲状腺癌、胰脏癌、 肺癌、肛门癌、胸腺癌、子宫内膜癌、原发不明癌）中CD30的检测以及癌症的治疗。取决于 抗体的性质，某些抗体优选用于检测，而其他抗体优选用于治疗。
[0031] A.针对⑶30的抗体的一般性描述
[0032] 抗CD30的抗体包括单克隆、嵌合（具有人恒定区和小鼠可变区）、人源化、镶饰 (veneered)或人抗体；单链抗体等等。免疫球蛋白分子可以是任何类型或类别（例如，IgG、 IgE、IgM、IgD、IgA 和 IgY)的或亚类（例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2)的。
[0033] 抗CD30的抗体可以是结合抗原的抗体片段，例如，Fab、F(ab'）、F(ab'）2、Fd链，单 链Fv (scFv)，单链抗体，二硫键连接的Fv (sdFv)，包含或VH结构域的片段，包括纳米抗体 或来自骆驼、美洲驼（llamas)等的片段，或Fab表达文库产生的片段，或上文所述的任何抗 体的CD30结合片段。结合抗原的抗体片段（包括单链抗体）可包含单独的可变区或与下 述全部或部分组合的可变区：铰链区、CH1，CH2，CH3和CL结构域。此外，结合抗原的片段还 可包含可变区与铰链区、CH1，CH2, CH3和CL结构域的任何组合。
[0034] 抗体可以是单特异性、双特异性、三特异性或更多特异性的。多特异性抗体 可以是对CD30不同的表位特异的，或者可以对CD30以及异源蛋白两者均特异（可参 考，例如，W093/17715 ;W0 92/08802 ;W0 91/00360 ;W092/05793 ;Tutt et al.，1991，J. Immunol.l47:60-69;美国专利号 4,474,893;4,714,681;4,925,648;5,573,920 和 5,601，819;Kostelny et al·，1992, J. Immunol. 148:1547-1553)。可用于实施本文所述的 方法的多特异性抗体（包括双特异性和三特异性抗体）是与CD30以及第二细胞表面受体 或受体复合物（例如，免疫球蛋白基因超家族成员、TNF受体超家族成员、整联蛋白、细胞因 子受体、趋化因子受体、主要组织相容性蛋白、凝集素（C型、S型或I型）或补体控制蛋白） 二者均免疫特异性结合的抗体。
[0035] 还可按照它们与 CD30 的结合亲和力（10_7M, 5x10_8M, 10_8M, 5x10_9M, 10_9M, 5xlO_1QM, KT1CIM，5xl(TnM，l(TnM，5x1(T12M，KT 12M, 5x1(T13M，KT13M, 5x1(T14M，Hr1%, 5x1(T15M 或 1(T15M)来 描述抗⑶30抗体。
[0036] 抗CD30抗体可以是嵌合抗体。嵌合抗体是这样一种分子，该抗体中的 不同部分源于不同的动物物种，例如，具有源于鼠单克隆抗体的可变区和人免疫 球蛋白恒定区的抗体。用于产生嵌合抗体的方法是本领域己知的（参考，例如， Morrison, Science, 1985, 229:1202 ；0i et al. , 1986, BioTechniques4:214 ；Gillies et al. , 1989, J. Immunol. Methods 125:191-202 ;美国专利号 5, 807, 715 ;4, 816, 567 和 4, 816, 397)。
[0037] 抗⑶30抗体还可以是人源化抗体，包括镶饰抗体。人源化抗体是这样的一种抗 体分子，其结合所期望的抗原，并且具有来自非人物种的一个或多个互补决定区（CDRs)和 来自人免疫球蛋白分子的构架和恒定区。通常，人构架区中的构架残基将被来自CDR供体 抗体的相应残基取代，以改变，或优选以改善抗原结合。通过本领域公知的方法来鉴定这些 构架取代，例如，通过构建CDR和构架残基的相互作用模型来鉴定对于抗原结合来说重要 的构架残基，以及通过序列比较以鉴定出具体位置上的不寻常的构架残基（可参考，例如 Queen etal·，美国专利号 5, 585, 089 ;Riecbmann et al·，1988, Nature 332:323)。可使用 本领域己知的多种技术来对抗体进行人源化，例如CDR移植（EP 0239400 ;W091/09967 ;美 国专利号55, 225, 539 ;5, 530, 101和5, 585, 089)，镶饰或重塑表面（可参考EP 0592106; EP 0519596 ;Padlan，Molecular Immunology, 1991，28 (4/5):489-498 ;Studnicka et al., 1994,Protein Engineering 7 (6):805-814 ；Roguska et al., 1994,PNAS 91:969-973)，以及链改组（chain shuffling)(美国专利号5, 565, 332)(所有这些参考文 献都通过引用并入本文）。
[0038] 抗⑶30抗体还可以是人抗体。可通过本领域己知的多种方法来制造人抗体， 例如噬菌体展示方法（见上文），其使用源于人免疫球蛋白序列的抗体文库。还可参考， 例如，美国专利号 4, 444, 887 和 4, 716, 111 ;W0 98/46645, W0 98/50433, W0 98/24893， TO 98/16654, W0 96/34096, W0 96/33735 和 W0 91/10741。此外，可使用被称为"引导选 择（guided selection) "的技术来产生识别选择的表位的人抗体，其中，使用选择的非人 单克隆抗体，例如，小鼠抗体，来引导识别相同表位的完全人抗体的选择（可参考，例如， Jespers et al·，1994, Biotechnology 12:899-903)。还可使用表达人免疫球蛋白基因的 转基因小鼠来产生人抗体。可使用杂交瘤技术，从经免疫的转基因小鼠获得针对抗原的 单克隆抗体。关于产生人抗体的技术的综述，参见Lonberg and Huszar，1995，Int. Rev. Immunol. 13:65-93。关于产生人抗体和人单克隆抗体的该技术以及用于产生此类抗体的方 案的详细讨论，参考，例如，PCT 公 W098/24893 ;W092/01047 ;W0 96/34096 ;W0 96/33735 ; 欧洲专利号 0598, 877 和美国专利号 5, 413, 923 ;5, 625, 126 ;5, 633, 425 ;5, 569, 825 ; 5, 661，016 ;5, 545, 806 ;5, 814, 318 ;5, 885, 793 ;5, 916, 771 ;和 5, 939, 598。
[0039] 可通过己知方法测定抗体与CD30的特异性结合，例如，竞争性和非竞争性免疫 测定系统，使用诸如蛋白质印迹、放射免疫测定、ELISA(酶联免疫吸附测定）、"夹层"免 疫测定、免疫沉淀测定、沉淀素反应、凝胶扩散沉淀素反应、免疫扩散测定、凝集测定、补体 固定测定、免疫放射分析测定、荧光免疫测定、蛋白A免疫测定（可参考，例如，Ausubel et al. , eds. , Short Protocols in Molecular Biology (John Wiley & Sons, Inc. , New York, 4th ed. 1999) ；Harlow & Lane, Using Antibodies:A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y.，1999)〇
[0040] 此外，可通过竞争性结合测定法来测定抗体与⑶30的结合亲和性以及抗体⑶30 相互作用的解离速率（off-rate)。竞争性结合测定的一个例子是放射免疫测定，包括：在 存在增加量的未经标记的⑶30的情况下，将经标记的⑶30 (例如，3H或1251)与目的抗体一 起孵育，并且检测与经标记的⑶30结合的抗体。然后，可通过Scatchard作图分析的数据 来确定抗体对CD30的亲和性和结合解离速率。还可使用放射免疫测定来测定与第二抗体 的竞争。在这种情况下，在存在增加量的未经标记的第二抗体的情况下，将CD30与缀合到 经标记的化合物（例如， 3H或1251)上的目标抗体一起孵育。或者，可通过表面等离振子共 振来测定抗体与CD30的结合亲和性以及抗体CD30相互作用的结合和解离速率。
[0041] 可根据抗体类型，通过标准方法，利用CD30蛋白的含有抗原的片段来制备抗体 (可参见，例如，Kohler，et al.，Nature，256:495，（1975) ;Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (C. S. Η. P. , NY, 1988) ；Queen et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:10029-10033(1989)和 TO 90/07861 ;Dower et al·，TO 91/17271 和 McCafferty et al.，W0 92/01047)(出于所有目的，每份文献通过引用并入本文）。例如，可使用多种技 术来制备单克隆抗体，包括，例如，使用杂交瘤、重组以及噬菌体展示技术或者它们的组 合。杂交瘤技术在例如上文的 Harlow et al·，和 Hammerling，et al·，In Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, pp. 563-681 (Elsevier, N. Y.，1981)中有一般性讨 论。可用于制造抗⑶30抗体的噬菌体展示方法包括，例如，Briinnan et al.，1995，J. Immunol. Methods 182:41-50 ；Ames et al.,1995, J. Immunol. Methods 184:177-186； Kettleborough et al.,1994,Eur.J.Immunol. 24:952-958 ；Persic et al. , 1997, Gene 187:9-18 ;Burton et al·, 1994, Advances in Immunology57:191-280 ;PCT 申请号 PCT/GB91/01134 ;PCT
【发明者】蒂娜·艾伯森, 玛丽亚·L.·史密斯 申请人:西雅图遗传学公司