同时测定阿莫西林克拉维酸钾血药浓度的方法
【专利摘要】本发明公开了一种同时测定阿莫西林钠克拉维酸钾血药浓度的方法，该方法该方法采用对乙酰氨基酚为内标，将人血浆样品用甲醇沉淀蛋白后高速离心进样，以C18为色谱柱，以乙腈-0.05mmol/L磷酸盐缓冲液作为流动相，紫外检测波长为220nm，得出阿莫西林钠和克拉维酸钾的最低检测浓度。本发明简便、准确、灵敏、特异性强、重现性好，可作为阿莫西林钠-克拉维酸钾的生物利用度和生物等效性研究的血药浓度测定方法。
【专利说明】同时测定阿莫西林克拉维酸钾血药浓度的方法
【技术领域】
[0001]本发明是涉及医药生产领域，具体地，涉及一种同时测定阿莫西林克拉维酸钾血药浓度的方法及其制备方法。
【背景技术】
[0002]阿莫西林克拉维酸钾是由β -内酰胺抑制剂克拉维酸钾与半合成青霉素阿莫西林组成的复方制剂。阿莫西林是杀菌性广谱抗生素，克拉维酸钾是不可逆的广谱β_内酰胺酶抑制剂，可有效地抑制耐药菌产生的内酰胺酶。临床上已经取得了满意的疗效。
[0003]人血浆中阿莫西林和克拉维酸钾浓度测定方法有微生物法、HPLC-MS法，但是微生物测定法虽然不需特殊设备，但灵敏度较低，干扰因素多，不能满足阿莫西林克拉维酸钾动力学研究及生物等效性实验要求。HPLC-MS法灵敏度高，但仪器昂贵且不稳定。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种同时测定阿莫西林克拉维酸钾血药浓度的方法，该方法采用对乙酰氨基酚为内标，将人血浆样品用甲醇沉淀蛋白后高速离心进样，以C18为色谱柱，以乙腈-0.05mmol/L磷酸盐缓冲液作为流动相，紫外检测波长为220nm，得出阿莫西林钠和克拉维酸钾的最低检测浓度，本方法渐变、准确、灵敏、特异性腔、重现性好，能够达到同时测定人血浆中阿莫西林钠克拉维酸钾浓度的方法。
[0005]本发明解决上述问题所采用的技术方案是:
同时测定阿莫西林克拉维酸钾血药浓度的方法，
(1)配制阿莫西林钠-克拉维酸钾标准储备液:含阿莫西林钠88.3微克/ml和克拉维酸钾45.3微克/ml ；
(2)配制对乙酰氨基酚内标溶液和磷酸二氢钾缓冲液；
(3)样品预处理:取阿莫西林钠-克拉维酸钾标准储备液于离心管中，加入空白血浆至215微升，精密加入10微升内标对乙酰氨基酚，漩涡振荡10s，再精密加入200微升甲醇，漩涡振荡15s后，4000r/min在4°C离心6min后，取上清液备用；
(4)取步骤(3)的上清液进入色谱柱为C18，以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液10:90作为流动相，流速:lml/min，紫外检测波长22nm的HPLC仪器中进行分析；
(5)制备阿莫西林钠-克拉维酸钾回归标准曲线:配制系列浓度阿莫西林钠-克拉维酸钾溶液照步骤(3)处理后取各系列浓度等量体积的上清液按照步骤(4)进样分析，得阿莫西林钠的标准曲线回归方程为:C=8.946Y-1.362 ;克拉维酸钾的标准曲线回归方程为:C=8.946Y-1.475，其中Y为阿莫西林钠、克拉维酸钾与内标物峰面积比，且Y为横坐标。
[0006]磷酸二氢钾缓冲液为0.05mmol/L,且pH为2.0-2.5。
[0007]照步骤(5)中的标准回归曲线，稀释加入空白人血浆的阿莫西林钠-克拉维酸钾标准储备液得到阿莫西林钠、克拉维酸钾最低检测浓度。
[0008]综上，本发明的有益效果是:本发明方法简便、准确、灵敏、特异性强、重现性好，可作为阿莫西林钠-克拉维酸钾的生物利用度和生物等效性研究的血药浓度测定方法。
【具体实施方式】
[0009]下面结合实施例，对本发明作进一步地的详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
[0010]实施例1:
同时测定阿莫西林克拉维酸钾血药浓度的方法，包括以下步骤:
(1)配制阿莫西林钠-克拉维酸钾标准储备液:含阿莫西林钠88.3微克/ml和克拉维酸钾45.3微克/ml ；
(2)配制对乙酰氨基酚内标溶液和磷酸二氢钾缓冲液；
(3)样品预处理:取阿莫西林钠-克拉维酸钾标准储备液于离心管中，加入空白血浆至215微升，精密加入10微升内标对乙酰氨基酚，漩涡振荡10s，再精密加入200微升甲醇，漩涡振荡15s后，4000r/min在4°C离心6min后，取上清液备用；
(4)取步骤(3)的上清液进入色谱柱为C18，以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液10:90作为流动相，流速:lml/min，紫外检测波长22nm的HPLC仪器中进行分析；
(5)制备阿莫西林钠-克拉维酸钾回归标准曲线:配制系列浓度阿莫西林钠-克拉维酸钾溶液照步骤(3)处理后取各系列浓度等量体积的上清液按照步骤(4)进样分析，得阿莫西林钠的标准曲线回归方程为:C=8.946Y-1.362 ;克拉维酸钾的标准曲线回归方程为:C=8.946Y-1.475，其中Y为阿莫西林钠、克拉维酸钾与内标物峰面积比，且Y为横坐标。
[0011]磷酸二氢钾缓冲液为0.05mmol/L,且pH为2.0-2.5。
[0012]照步骤(5)中的标准回归曲线，稀释加入空白人血浆的阿莫西林钠-克拉维酸钾标准储备液得到阿莫西林钠、克拉维酸钾最低检测浓度。
【权利要求】
1.同时测定阿莫西林克拉维酸钾血药浓度的方法，其特征在于， 配制阿莫西林钠-克拉维酸钾标准储备液:含阿莫西林钠88.3微克/ml和克拉维酸钾45.3 微克 /ml ； 配制对乙酰氨基酚内标溶液和磷酸二氢钾缓冲液； 样品预处理:取阿莫西林钠-克拉维酸钾标准储备液于离心管中，加入空白血浆至215微升，精密加入10微升内标对乙酰氨基酚，漩涡振荡10s，再精密加入200微升甲醇，漩涡振荡15s后，4000r/min在4°C离心6min后，取上清液备用； 取步骤(3)的上清液进入色谱柱为C18，以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液10:90作为流动相，流速:lml/min，紫外检测波长22nm的HPLC仪器中进行分析； 制备阿莫西林钠-克拉维酸钾回归标准曲线:配制系列浓度阿莫西林钠-克拉维酸钾溶液照步骤(3)处理后取各系列浓度等量体积的上清液按照步骤(4)进样分析，得阿莫西林钠的标准曲线回归方程为:C=8.946Y-1.362 ;克拉维酸钾的标准曲线回归方程为:C=8.946Y-1.475，其中Y为阿莫西林钠、克拉维酸钾与内标物峰面积比，且Y为横坐标。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，磷酸二氢钾缓冲液为0.05mmol/L,且pH为 2.0-2.5。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，照步骤(5)中的标准回归曲线，稀释加入空白人血浆的阿莫西林钠-克拉维酸钾标准储备液得到阿莫西林钠、克拉维酸钾最低检测浓度。
【文档编号】G01N30/06GK104345100SQ201410434466
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2014年8月29日 优先权日:2014年8月29日
【发明者】王强, 张静文, 刘萍 申请人:四川制药制剂有限公司