一种高效定量检测C反应蛋白的免疫学试剂盒的制作方法

文档序号:11824612阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种高效定量检测CRP的免疫学试剂盒,其特征在于,该试剂盒以抗CRP的多克隆抗体和抗CRP的单克隆抗体混合在一起作为联合捕获抗体,以抗CRP的单克隆抗体作为检测抗体,通过抗原抗体反应检测CRP。

2.根据权利要求1所述的免疫学试剂盒,其特征在于,作为检测抗体的抗CRP的单克隆抗体为小鼠脾脏与骨髓瘤细胞SP2/0融合后得到杂交瘤细胞株H16740分泌的单克隆抗体;作为联合捕获抗体的单克隆抗体为小鼠脾脏与骨髓瘤细胞SP2/0融合后得到杂交瘤细胞株H14815分泌的单克隆抗体。

3.根据权利要求1或2所述的免疫学试剂盒,其特征在于,所述抗CRP的多克隆抗体的制备方法为:将SEQ ID NO:1所示基因通过原核表达系统获得的蛋白作为CRP抗原标准品免疫SPF级新西兰兔,得到含有抗CRP多抗的兔血清,先用硫酸铵沉淀法从兔血清中初步纯化免疫球蛋白IgG,再用ProteinG/A亲和柱进一步纯化,得到抗CRP多抗。

4.根据权利要求1或2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒为检测CRP的酶联免疫试剂盒,该试剂盒包括包被联合捕获抗体的微孔板,浓缩洗涤液,重组人CRP蛋白的标准品抗原,待测样本浓缩稀释液,稀释抗体和标记酶的浓缩稀释液,生物素标记的检测抗体,联合捕获抗体,标记酶溶液,底物,终止液。

5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,联合捕获抗体的包被浓度是每种抗体0.3~0.5ug/孔;检测抗体的浓度为0.1mg/L。

6.根据权利要求1或2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒为检测CRP的胶体金试剂盒,试剂盒包括至少一个试纸条,试纸条包括样品垫,标记垫,硝酸纤维素膜,吸水纸,标记垫上包被胶体金标记的抗CRP检测抗体,硝酸纤维素膜包括包被有抗鼠IgG二抗的质控区和包被有联合捕获抗体的检测区。

7.根据权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述联合捕获抗体的包被浓度分别为0.5~1mg/ml,用量按膜包被液量为20~25ug/30cm2;所述检测抗体的包被浓度为0.2~1mg/ml,用量按膜包被液量为0.8ug/cm2

8.根据权利要求1或2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒为检测CRP的时间分辨荧光免疫层析试剂盒,试剂盒包括多个检测试纸条,所述试纸条包括样品垫、结合物释放垫、硝酸纤维素膜和吸水纸;所述结合物释放垫中含过量的抗CRP检测抗体和荧光微球的复合物;硝酸纤维素膜上含有检测线和对照线,检测线含定量的联合捕获抗体,对照线含定量的抗鼠IgG二抗。

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