本发明涉及药物检测技术领域，特别涉及一种楝栀口服液中栀子苷和芍药苷含量的检测方法。
背景技术：
楝栀口服液为中药制剂，由黄连、白芍、栀子、延胡索等8味中药制成，为棕红色澄明液体，味苦甜久置后有少量沉淀，轻摇易散。具有行气化瘀、清热止痛的功效，临床常用于胃痛偏热者，慢性胃炎、胃及十二指肠溃疡的急性发作，疗效显著。原制剂标准，检验项目包括性状、鉴别、检查，且鉴别项仅有栀子苷的薄层鉴别，目前未见有楝栀口服液含量测定的研究报导。为提高制剂标准，控制质量，保障楝栀口服液的临床疗效及用药安全，有必要对建立一种楝栀口服液中栀子苷和芍药苷含量的检测方法。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供一种楝栀口服液中栀子苷和芍药苷含量的检测方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种楝栀口服液中栀子苷和芍药苷含量的检测方法，包括以下步骤：
步骤1.通过移液管量取楝栀口服液样品2ml；
步骤2.对量取的楝栀口服液样品进行水浴浓缩，向水浴浓缩后的楝栀口服液样品加入甲醇20ml进行混合，对所得混合液进行称定重量；
步骤3.向混合液进行发出超声波，进行超声波处理10～30min，得处理后的混合液；
步骤4.根据混合液的称定重量向处理后的混合液中加入甲醇，补足处理后混合液的重量，对补足重量的混合液进行过滤，即得供试品溶液；
步骤5.通过液相色谱仪按设定的色谱条件对供试品溶液进行测定，用甲醇配制栀子苷和芍药苷对照品溶液,分别进样10ul，用外标两点法对数方程分别计算供试品溶液中栀子苷和芍药苷的含量，得供试品溶液中栀子苷和芍药苷的含量。
进一步，步骤2中，通过电子天平称对所得混合液称定重量。
进一步，步骤3中，通过超声波清洗器对混合液进行发出超声波，进行超声波处理20min。
本发明的有益效果是：建立的方法操作简单、准确、重复性好，为楝栀口服液的质量控制提供了科学可行的依据。
具体实施方式
以下结合对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
一种楝栀口服液中栀子苷和芍药苷含量的检测方法，包括以下步骤：
步骤1.通过移液管量取楝栀口服液样品2ml；
步骤2.对量取的楝栀口服液样品进行水浴浓缩，向水浴浓缩后的楝栀口服液样品加入甲醇20ml进行混合，对所得混合液进行称定重量；
步骤3.向混合液进行发出超声波，进行超声波处理10～30min，得处理后的混合液；
步骤4.根据混合液的称定重量向处理后的混合液中加入甲醇，补足处理后混合液的重量，对补足重量的混合液进行过滤，即得供试品溶液；
步骤5.通过液相色谱仪按设定的色谱条件对供试品溶液进行测定，用甲醇配制栀子苷和芍药苷对照品溶液,分别进样10ul，用外标两点法对数方程分别计算供试品溶液中栀子苷和芍药苷的含量，得供试品溶液中栀子苷和芍药苷的含量。
上述实施例中，步骤2中，通过电子天平称对所得混合液称定重量。
上述实施例中，步骤3中，通过超声波清洗器对混合液进行发出超声波，进行超声波处理20min。
可选的，作为本发明的一个实施例：一种楝栀口服液中栀子苷和芍药苷含量的检测方法，步骤以下步骤：
1、仪器与试药
仪器：薄层层析硅胶板Si60(默克)、Waters 2685高效液相色谱仪；紫外检测器；METTLER AE240电子天平；AS7240BT型超声波清洗器；
试药：黄连对照药材(批号913-9404)、盐酸小檗碱(批号110713-201212)延胡索对照药材(批号120928-201208)延胡索乙素(批号110726-201414)、芍药苷(批号110736-201539，含量96.4％)、栀子苷(批号110749-201115，含量99.7％)，均购自中国食品药品检定研究院。甲醇、甲醇为色谱纯、其他试剂为分析纯、蒸馏水和双蒸水为本实验室自制。
2方法与结果
2.1黄连的鉴别
取3批样品各10ml，置水浴蒸干，加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。阴性样品同法制备。另取黄连对照药材0.25g，加甲醇25ml,超声波处理30分钟，滤过，置水浴蒸干，加2ml甲醇溶解，得对照药材溶液，再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法[1]试验，吸取上述对照品溶液和对照药材溶液各1ul，供试品溶液5ul，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺(3：3.5：1：1.5：0.5：1)为展开剂，置用浓氨试液预饱和20分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱的相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。
2.2延胡索的鉴别
取3批样品各10ml,加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。阴性样品同法制备。另取延胡索对照药材1g，加甲醇50ml,超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，同用乙醚振摇提取2次起同法操作，作为对照药材溶液。再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(9:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱的相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。
2.3含量测定
2.3.1色谱条件与系统适用性试验
Waters SunFire C18柱；以乙腈-0.2％磷酸溶液(15:85)为流动相；流速为1.0ml/min；二极管阵列检测器，检测波长238nm；进样量10μl；分离度为12.0。
2.3.2供试品溶液的制备
精密量取样品2ml，水浴浓缩近干，加甲醇20ml，称定重量，超声20min，补足重量，过滤，即得。
2.3.2对照品溶液的制备
分别精密称取芍药苷对照品、栀子苷对照品各10mg,分别置于25ml容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，作为对照品溶液。
2.3.3线性关系考察
精密吸取上述对照品溶液各0.1ml、0.2ml、0.5ml、1ml、2.5ml、5ml，分置10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，加上对照品溶液，共7个点，按上述色谱条件测定。以对照品进样量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，得到栀子苷线性方程：y＝15,632,589.2435 x+4,152.9233 R2＝0.9998及芍药苷线性方程：y＝11,304,405.0167 x-16,659.0977 R2＝1.0000结果表明，栀子苷进样量在0.0041～0.4000μg范围内、芍药苷进样量在0.0041～0.4064μg范围内与各自峰面积积分值均呈良好的线性关系；
2.3.4精密度试验
取栀子苷对照品溶液5ml，芍药苷对照品溶液1ml，置同一10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。作为混合对照品溶液，连续进样6次，分别测定峰面积，结果栀子苷峰面积的平均值为3066023，RSD为0.31％，芍药苷峰面积的平均值为437561，RSD为0.43％，表明该仪器精密度良好。
2.3.5稳定性
精密吸取同一供试品溶液，于配制后0、2、4、8、12h时测定峰面积，栀子苷峰面积的平均值为4692318，RSD为0.61％，芍药苷峰面积的平均值为397366，RSD为1.42％，说明供试品溶液在12h内稳定。
2.3.6重复性试验
取楝栀口服液样品6份，按“2.3.2对照品溶液的制备”方法制备供试品溶液，进样，测定样品中栀子苷、芍药苷的含量，栀子苷、芍药苷含量RSD分别为1.0％和1.2％。表明方法重复性良好。
2.3.7加样回收率试验
精密量取已知含量的楝栀口服液2ml，共6份，分别精密加入1ml混合对照品溶液(栀子苷0.1998mg/ml，芍药苷0.04064mg/ml)，按“2.3.2对照品溶液的制备”方法操作，得加样回收供试品溶液。分别吸取对照品溶液、加样回收供试品溶液10ul，进样，根照本文色谱条件测定，据外标两点法对数方程计算栀子苷、芍药苷的含量，并计算回收率，结果见表1、表2。
表1栀子苷 含量测定结果及回收率
表2芍药苷 含量测定结果及回收率
2.4样品含量测定
取上述6批楝栀口服液样品，按“2.3.2对照品溶液的制备”方法制备供试品溶液,按拟定的色谱条件进行测定,分别进样10ul，用外标两点法对数方程分别计栀子苷、芍药苷的含量，结果见表3。
表3样品含量测定结果(n＝4)
3.结论
3.1流动相的选择
对高效液相色谱不同的流动相乙腈-水(15∶85)、乙睛-1％醋酸(13∶87)等系统进行了比较,结果表明：以乙腈-0.2％磷酸溶液(15:85)为流动相时,楝栀口服液中栀子苷和芍药苷的分离完全,峰形稳定,其他成分不干扰。
3.2测定波长及检测器的选择
栀子苷、芍药苷对照品紫外扫描最大吸收波长分别为238、230nm，选择238nm为测定波长，比较了紫外检测器、二极管阵列检测器的测定结果，选择二极管阵列检测器同时测定栀子苷、芍药苷的含量，得到结果较满意。
3.3溶剂及提取方法的选择
分别考察了超声提取法和加热回流提取法，并考察了不同浓度提取溶剂(甲醇、20％甲醇、50％甲醇)和不同提取时间(15、30、40、60min)的结果。经比较，最优提取方法为：精密量取样品2ml，水浴浓缩近干，加甲醇20ml，称定重量，超声20min，补足重量。
3.4与现有标准相比，本文增加了楝栀口服液主药黄连、延胡索中所含成分盐酸小檗碱、延胡索乙素的定性鉴别，同时增加了主药白芍、栀子中所含成分栀子苷、芍药苷的含量测定方法。本发明操作简单、准确、重复性好，为楝栀口服液的质量控制提供了科学可行的依据。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。