本发明属于检测
技术领域：
，具体涉及一种测定烟草及烟草制品冷杉醇的方法。
背景技术：
：冷杉醇，又名十六元醇，因最早在杉属植物冷杉中提取而出得名，顺-冷杉醇常用于烟草行业，以增加烟草香气。顺-冷杉醇经调制、醇化后，90％的冷杉醇发生氧化、降解和转化，其降解产物主要是C-16的化合物，包括降龙涎香醚、龙涎香内酯等具有强烈的龙涎香香气的物质，对增加卷烟香气和吸味非常有效。常用于烟草浸膏中。到目前为止，冷杉醇的测定方法的报导很少，也没有形成常规的测定方法。Severson等人采用气相色谱测定了主要的表皮蜡质成分，但易引起冷杉醇分析时的降解得不到好的峰型难以定量。也有采用正相液相色谱方法测定了烟叶中顺冷杉醇，但纯化步骤较为繁琐，测定周期长。本发明是采用反相液相色谱方法进行测定，尚未发现相关报道。技术实现要素：针对冷杉醇测定方法的缺少及仅有几项技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种测定烟草及烟草制品冷杉醇的方法。该方法应用超声波技术，降低了烟草冷杉醇的提取时间，使烟草冷杉醇的提取、分离均在离心管中完成，适用于批量检测，且溶剂用量少，操作简单，节约成本，减少污染，提高工作效率，测定结果准确性及精密度高。为达到上述目的，本发明采取的技术方案为：一种测定烟草及烟草制品冷杉醇的方法，包括以下步骤：(1)烟草冷杉醇的超声提取：取烟草或烟草制品碾成的烟草粉末，置于离心玻璃管中，加入提取溶剂，并加入一定体积的水，超声提取烟草冷杉醇；(2)烟草冷杉醇提取液的分离：提取液冷却至室温，充分振荡，离心；(3)精确移取上层溶液，在氮气保护条件下吹干，再用流动相溶解后，过0.22um有机滤膜过滤至液相谱安培瓶中，待测；(4)对所得待测液进行液相色谱测定。进一步的，所述步骤(1)中烟草或烟草制品为各种类型的调制后烟叶、青烟叶、烟梗以及提取烟碱后的烟草残渣中的任意一种，烘干粉碎成烟草粉末。进一步的，所述步骤(1)中的提取溶剂为二氯甲烷，二氯甲烷和水的加入量的体积比为1:1。通过实验二氯甲烷提取量最大，提取效果最好。进一步的，所述步骤(1)中的离心玻璃管上设有聚四氟乙烯密封盖，冷杉醇在提取过程中，旋紧密封盖，以防止溶剂挥发影响结果测定的准确性。进一步的，所述步骤(1)中超声提取的条件是：超声频率40KHz，温度30℃，时间10min。进一步的，所述步骤(2)中超声提取完成后，离心过程采用3000转/分离心10min，利用液液分配原理，将烟草中的冷杉醇转移至上层二氯甲烷相中，提取后样品残渣保留在下层水相中。进一步的，步骤(4)中液相色谱测定条件是，使用超高效液相色谱仪，色谱柱：BEHC18(1.7um2.1*50mm)，流动相的体积比为水：乙腈＝30：70，流速：0.3mL/min，柱温：36℃，检测波长：273nm。本发明的有益效果是：本发明采用超声波技术，降低了烟草冷杉醇的提取时间，且烟草冷杉醇的提取、分离均在离心管中完成，溶剂用量少，操作简单，节约成本，减少污染，提高工作效率，适用于批量样品分析，且测定结果准确性及精密度高。附图说明图1为本发明烟草冷杉醇标准品及样品的液相色谱图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。实施例1一种测定烟草及烟草制品冷杉醇的方法，其步骤包括：(1)烟草冷杉醇的超声提取：取烟草或烟草制品碾成的烟草粉末，置于离心玻璃管中，加入提取溶剂，并加入一定体积的水，超声提取烟草冷杉醇；(2)烟草冷杉醇提取液的分离：提取液冷却至室温，充分振荡，离心；(3)精确移取上层溶液1mL，在氮气保护条件下吹干，再用1ml流动相溶解后，过0.22um有机滤膜过滤至液相谱安培瓶中，待测；(4)对所得待测液进行液相色谱测定。进一步的，所述步骤(1)中烟草或烟草制品为各种类型的调制后烟叶、青烟叶、烟梗以及提取烟碱后的烟草残渣中的任意一种，烘干粉碎成烟草粉末，称量0.2g，精确至0.0001g，采用的提取溶剂为二氯甲烷，加入量为5ml，加入水的体积也为5ml。进一步的，所述步骤(1)中的离心玻璃管体积≥20ml，并设有聚四氟乙烯密封盖，冷杉醇在提取过程中，旋紧密封盖，以防止溶剂挥发影响结果测定的准确性。进一步的，所述步骤(1)、步骤(2)中，超声提取的条件是：超声频率40KHz，温度30℃，时间10min；提取完成后，冷却至室温，充分振荡，3000转/分离心10min，利用液液分配原理，将烟草中的冷杉醇转移至上层二氯甲烷相中，提取后样品残渣保留在下层水相中。进一步的，所述步骤(4)中液相色谱测定条件是，采用超高效液相色谱仪，色谱柱：BEHC181.7um2.1*50mm，流动相的体积比为水：乙腈＝30：70，流速：0.3mL/min，柱温：36℃，检测波长：273nm。实施例2称取过60目筛烟草粉末样品0.1g，精确至0.0001g，放入20mL带有聚四氟乙烯密封盖的离心玻璃管中，准确加入5mL提取溶剂二氯甲烷，旋紧密封盖，放入恒温超声提取仪中，在超声频率为45kHz，温度30℃、时间10min条件下进行目标化合物提取。提取完成后，待提取液冷却至室温，在3000转/分条件下离心10min。精确移取上清液1mL，在氮气保护条件下吹干，再用1mL流动相溶解后，用0.22um有机滤膜过滤至液相色谱安培瓶中，应用液相色谱进行检测，如图1所示。冷杉醇在3.991分钟时出峰，样品冷杉醇含量0.062％。本发明是采用反相液相色谱方法进行测定，尚未发现同类相关研究报道，与仅有的气相色谱测定及正相液相色谱方法相比，提取效果好，回收率高，且较稳定，方法的重现性较好，溶剂用量少，提取时间短，操作简单，可提高工作效率，节约成本，测定结果准确性及精密度高。表1为添加回收率试验结果表2为精密度试验结果，具体试验结果参考表2.1和表2.2表2.1不同烟草样品的平行试验结果2.2同一烟草样品不同测定日期试验结果时间第一天第二天第三天第四天第五天第六天平均值RSD％测定值％0.0560.0510.0530.0530.0510.0540.0533.58表3不同提取溶剂冷杉醇提取率比较研究结果％(n＝6)以上所述并非是对本发明的限制，应当指出：对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，并不局限于此，在不脱离本发明实质范围的前提下，还可以做出若干变化、改型、添加或替换，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页1 2 3