中华蜜蜂囊状幼虫病病毒免疫胶体金试纸条的制作方法

文档序号:12713870阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种中华蜜蜂囊状幼虫病病毒免疫胶体金试纸条,其特征在于:它包括PVC底板,PVC 底板上从左至右依次固定样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜及吸水垫,硝酸纤维素膜上设有相互分开的检测线和质控线,其中胶体金垫标记有一种鼠抗中华蜜蜂囊状幼虫病病毒衣壳蛋白vp3单克隆抗体,硝酸纤维素膜上的检测线包被另一种鼠抗中华蜜蜂囊状幼虫病病毒vp3单克隆抗体,硝酸纤维素膜上的质控线包被羊抗鼠IgG。

2.根据权利要求1所述中华蜜蜂囊状幼虫病病毒免疫胶体金试纸条的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:

(1)首先对中华蜜蜂囊状幼虫病病毒衣壳蛋白vp3基因进行克隆、蛋白表达及纯化,获得外源vp3蛋白;

(2)制备鼠抗中华蜜蜂囊状幼虫病病毒vp3单克隆抗体:以纯化的vp3蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,筛选获得两个不同的杂交瘤细胞株,利用这两个细胞株制备两种不同的单克隆抗体;

(3)制备中华蜜蜂囊状幼虫病病毒免疫胶体金检测试纸条:

a、标记vp3单克隆抗体的胶体金垫制备:采用柠檬酸三钠作为还原剂来制备胶体金,对上述步骤(2)中制备的中华蜜蜂囊状幼虫病病毒vp3单克隆抗体中的一种进行胶体金标记,先确定单抗与胶体金结合的标记浓度和pH值;随后将单克隆抗体在搅拌状态下加入胶体金,边加边搅拌后,室温放置;再加入牛血清白蛋白,搅拌均匀,离心;去除沉淀取上清后,再离心;沉淀用1/10原体积的金标保存液重悬,所述金标保存液含1%BSA、2%蔗糖、0.1%Tween-20的磷酸缓冲盐溶液,将制备的胶体金标记抗体铺在玻璃纤维膜上,室温干燥后,制成胶体金垫;

b、试纸条组装:将另一种鼠抗中华蜜蜂囊状幼虫病病毒vp3单克隆抗体划线于硝酸纤维素膜作为检测线,距离检测线5mm处以羊抗鼠IgG抗体划线作为质控线;将PVC底板的粘面暴露,将硝酸纤维素膜粘在中间位置,接着粘贴金标垫并使其压在硝酸纤维素膜前端0.2cm处,然后以聚酯纤维膜为样品垫,粘贴样品垫压在金标垫的另一端,最后粘贴吸水垫。

3.根据权利要求2所述的中华蜜蜂囊状幼虫病病毒的免疫胶体金试纸条的制备方法,其特征在于,其中步骤(3)的(a)中所述鼠抗中华蜜蜂囊状幼虫病病毒vp3单克隆抗体与胶体金结合的标记浓度是38μg/ml-60μg/ml,最佳标记浓度为50.4μg/ml,结合的最适pH值为8.0。

4.根据权利要求2所述的中华蜜蜂囊状幼虫病病毒的免疫胶体金试纸条的制备方法,其特征在于,其中步骤(3)的(a)中制备的胶体金粒径为15-40nm;室温放置20min,加入的牛血清白蛋白的浓度为10%,牛血清白蛋白在溶液中的终浓度为1%,胶体金标记抗体按1ml铺15cm2的比例铺在玻璃纤维膜上。

5.根据权利要求2所述的中华蜜蜂囊状幼虫病病毒的免疫胶体金试纸条的制备方法,其特征在于,其中步骤(3)的(b)中包被检测线的单克隆抗体的工作浓度是1.0mg/ml,包被质控线的羊抗鼠IgG工作浓度是1.5mg/ml。

6.根据权利要求2所述的中华蜜蜂囊状幼虫病病毒的免疫胶体金试纸条的制备方法,其特征在于,其中步骤(3)的(b)中检测线和质控线之间的间距是5mm。

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