本发明属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法。
背景技术：
：《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：取本品粉末约0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)100ml，加热回流2小时，弃去石油醚，药渣挥干，再加甲醇100ml继续加热回流4小时，提取液置蒸发皿中，浓缩至适量，转移至50ml量瓶中，残渣及容器用少量甲醇洗涤，洗液并入同一量瓶中.加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。该方法回流时间较长，且对技术人员的专业水平要求较高。技术实现要素：针对上述不足，本发明旨在提供一种ASE-HPLC法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法，该方法萃取所需时间短，且检测精度高。为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE法萃取迷蒙花粉末，并收集甲醇萃取液；其中萃取包括先用正己烷去酯，再用40％甲醇萃取；步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中蒙花苷的含量。优选地，所述的步骤1包括下述子步骤：步骤S1：将迷蒙花粉碎，过三号筛，取0.5g与1g石英砂混合均匀；步骤S2：将步骤S1所得的混合物装于放有玻璃纤维滤膜的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；步骤S3：用正己烷去酯，再用40％甲醇萃取；步骤S4：结束后，将其烘干，并用甲醇定容至50ml，过滤，取滤液，即可。优选地，所述的去酯条件为：溶剂为丙烷，温度为80℃，时间为7min，循环次数为1次，冲洗体积为100％，吹扫时间为200s。优选地，所述的提取条件为：溶剂为甲醇，温度为100℃，时间为5min，循环次数为2次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。优选地，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：a)仪器：安捷伦1290高效液相色谱仪；b)色谱柱：ThermoSyncronisC18；c)柱温：40℃；d)流速：0.5mL/min；e)流动相：甲醇-0.1％冰醋酸；f)检测波长：326nm。优选地，所述的色谱柱的规格为3μm，3×100mm。优选地，所述的流动相为体积比等于48：52的甲醇-0.1％冰醋酸。本发明与传统方法相比，具有以下优点：《中国药典》采用石油醚去脂溶性成分，考虑ASE仪器对溶剂的使用要求，以及石油醚为宽沸程的烃类成分，本实验考察了正己烷去脂效果，结果使用正己烷循环1次，杂质峰较小，对蒙花苷的定量影响。参考《中国药典》采用甲醇作为提取溶剂，能提取完全。本实验提取溶剂为甲醇，依据经验，采用萃取温度100℃、静态萃取时间5min，利用单因素考察了循环次数1次、2次、3次，结果见表5，循环2次基本能提取完全。具体实施方式下面结合具体实施方式对本发明的权利要求做进一步详细说明，但不对本发明构成任何限制，任何在精神上和原则上对本发明的权利要求书保护范围做修改、等同替换和改进，仍属于本发明所要保护的范围。实施例11、仪器设备及试剂1.1仪器：电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、安捷伦1290高效液相色谱仪1.2试剂：水：符合GB/T6682规定的一级水；甲醇(CH4O)：色谱纯；冰醋酸(CH3COOH)：分析纯。2、方法2.1对照品溶液的制备：取蒙花苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。2.2供试品溶液的制备2.2.1《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：取本品粉末约0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)100ml，加热回流2小时，弃去石油醚，药渣挥干，再加甲醇100ml继续加热回流4小时，提取液置蒸发皿中，浓缩至适量，转移至50ml量瓶中，残渣及容器用少量甲醇洗涤，洗液并入同一量瓶中.加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.2.2快速溶剂萃取法(ASE)制备供试品方法：样品经粉碎机粉碎，过三号筛，约0.5g，精密称定，与0.5g硅藻土混合均匀，待用，移入到预先放好过滤膜的10ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移于50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.3ASE萃取条件除杂条件：溶剂为丙烷，温度为80℃，时间为7min，循环次数为1次，冲洗体积为100％，吹扫时间为200s。提取条件：溶剂为甲醇，温度为100℃，时间为5min，循环次数为2次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。2.4色谱条件与系统适用性试验a)仪器：安捷伦1290高效液相色谱仪；b)色谱柱：ThermoSyncronisC18，3μm，3×100mm；c)柱温：40℃；d)流速：0.5mL/min；e)流动相：甲醇-0.1％冰醋酸(48:52)；f)检测波长：326nm；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；理论板数按蒙花苷峰计算应不低于1000。2.5测定法照高效液相色谱法(通则0512)测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，测定，即得。2.6标准限值要求本品含蒙花苷(C28H34O14)不得少于0.50％。2.7计算(外标法)式中CR——对照品溶液浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；AX——供试品的峰面积；AR——对照品峰面积。注意：使用前萃取池底部应拆卸清理干净，否则容易引起压力不稳；萃取池底部的滤纸应在密封圈内，否则引起渗漏；萃取池装样时松紧适中，太松容易导致提取液过多；开机前检查气瓶气压是否达到1Mpa；使用结束后清理干净，萃取池要及时晾干(容易生锈)。3、结果3.1线性关系取蒙花苷对照品溶液(浓度：0.1321mg/ml)，分别精密吸取该溶液0.5μl、1μl、2μl、4μl、5μl进入LC测定，并依照上述方法测定，结果详见表1。以浓度(μg)-平均峰面积进行线性回归，求得回归方程：y＝70.215x+0.1362，R2＝0.9998。蒙花苷在0.06605～0.6605μg范围内呈良好的线性关系。表1线性试验结果3.2重复性试验取相同批号的样品(批号：150301)0.5g，共3份，精密称定，按ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为2μl，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中蒙花苷的含量见表2，RSD为1.0％，试验表明ASE提取方法重复性良好。表2重复性试验结果3.3精密度试验取蒙花苷对照品溶液(0.1321mg/ml)，连续进样6次，记录峰面积，峰面积RSD为0.8％，表明仪器精密度良好。3.4样品不同仪器提取结果及与药典方法结果比较(4批)表3不同仪器提取结果比较表4ASE与药典提取结果比较4、讨论：4.1ASE提取溶剂的选择：《中国药典》采用石油醚去脂溶性成分，考虑ASE仪器对溶剂的使用要求，以及石油醚为宽沸程的烃类成分，本实验考察了正己烷去脂效果，结果使用正己烷循环1次，杂质峰较小，对蒙花苷的定量影响。参考《中国药典》采用甲醇作为提取溶剂，能提取完全。4.2ASE提取条件的优化本实验提取溶剂为甲醇，依据经验，采用萃取温度100℃、静态萃取时间5min，利用单因素考察了循环次数1次、2次、3次，结果见表5，循环2次基本能提取完全。表5循环次数试验结果循环次数含量％11.12120.01730.004以上所述仅为本发明的较佳实施例，不构成对本发明的权利要求所要保护的范围任何限制。当前第1页1 2 3