LC-ICP-MS测定血浆中Pt元素含量的方法与流程

本发明涉及一种测定血浆中Pt元素含量的方法，具体涉及一种LC-ICP-MS测定血浆中Pt元素含量的方法。属于生物样品分析技术领域。

背景技术：

铂植入剂作为抗肿瘤长效制剂，可在组织器官中植入给药或外科术中给药，实现局部的药物高浓度及较小的周边血药浓度。药用铂制剂主要包括顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、舒铂、洛铂6种，其中顺铂和卡铂是临床使用最多的广谱抗癌药物。

抗肿瘤铂制剂在临床应用中可引起广泛的不良反应，通过监测血液铂含量以使药物长期维持在安全有效浓度范围之内，间接反映临床用药对生物组织器官的毒性反应，进而提供药动力学研究资料，做好不良反应的预防和处理，提高疗效并减轻毒副作用。

血浆样品通常样品量很少，一般只有几百微升，血浆中铂的检测需要保证进样量少、灵敏度高、结果准确。而现有的ICP-MS进样均需要蠕动泵连续进样，按照0.7～1.0mL/min的进样量计算，从样品清洗到检测结束消耗样品体积较大，血浆取样量不够一次ICP-MS分析。因此血浆中Pt的检测需要解决微量体积样品的慢速、小体积进样分析，实现稳定重复性分析和高灵敏度要求。

技术实现要素：

本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种液相色谱-电感耦合等离子体质谱仪(LC-ICP-MS)测定血浆中Pt元素含量的方法。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

一种LC-ICP-MS测定血浆中Pt元素含量的方法，包括以下步骤：

(1)确定色谱-质谱工作条件；

(2)配制标准溶液，建立标准曲线；

(3)对血浆样品进行前处理；

(4)测定血浆中Pt元素的含量：血浆样品使用LC-ICP-MS检测，按照步骤(1)所述工作条件，由步骤(2)所得标准曲线得到血浆中Pt元素的浓度。

优选的，步骤(1)所述液相色谱的工作条件为不含有色谱柱。

优选的，步骤(1)所述液相色谱的工作条件为：流动相为纯水，流速为1.0mL/min；进样量为20μL进样速度为5μL/s；洗针液为纯水，洗脱程序为等度洗脱。

优选的，步骤(1)所述质谱(ICP-MS)的工作条件为：

高频功率：1.20kW；等离子体气流速：8.0L/min；辅助气流速：1.10L/min；载气流速：0.7L/min；炬管类型：Mini；雾化器类型：同轴；雾化室：旋流；雾化室温度：5℃；采样深度：5.0mm；高频频率：27.12MHz。

优选的，步骤(2)所述标准工作曲线的建立方法为：使用空白血浆配制Pt标准溶液，标准溶液浓度分别为0.0、0.5、1.5、5、15、50、150和500ng/mL，分别进行LC-ICP-MS检测，以Pt元素的浓度为横坐标，以Pt元素的峰面积为纵坐标建立标准工作曲线。

优选的，步骤(3)所述对血浆样品进行前处理的具体方法为：将适量血浆转移至离心管中，放入离心机中12000r/min离心5min，收集上层清液，使用LC-ICP-MS进行分析检测。

本发明的有益效果：

本发明方法使用LC-ICP-MS直接测定血浆样品中Pt元素含量，液相色谱装置中无色谱柱，仅利用液相色谱的自动进样器，以应对生物样品取样量少的特点。该方法灵敏度高，方法检出限低，耐用性和重复性好，RSD％低于1.39％，该法适应于大批量取样量少的生物样品的批量分析。

附图说明

图1是Pt元素校正曲线图；

图2是Pt元素谱峰轮廓图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进行进一步的阐述，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。

实施例：

1.实验材料及试剂

对照品Pt元素标准储备液购于国家标准物质中心；血浆；硝酸购自德国Merk公司；实验用水由Milli-Q水净化系统经去离子与二次净化制得。

2.实验仪器

本实验使用岛津液相色谱仪LC-20Ai与电感耦合等离子体质谱仪ICPMS-2030联用系统。具体配置为LC-20Ai×2输液泵，DGU-20A3在线脱气机，SIL-20AC自动进样器，CTO-20AC柱温箱，CBM-20A系统控制器，ICPMS-2030电感耦合等离子体质谱仪，LabSolutions ICPMS Version 1.02工作站；AY-120电子天平(日本岛津公司)；Allegra 64R低温高速离心机(美国Beckman)；KQ5200DA数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)；Advantage A10超纯水仪(瑞士Milli-Q公司)。

3.样品检测

3.1标准溶液配制

浓度为50ng/mL的Pt使用液配制：取0.5mL浓度为1mg/L的Pt标准储备液置于10mL容量瓶中，用空白血浆定容至刻度。

浓度为1000ng/mL Pt使用液配制：取0.1mL浓度为100mg/L的Pt标准储备液置于10mL容量瓶中，用空白血浆定容至刻度。

分别移取0、0.05、0.15、0.5和1.5mL的浓度为50ng/mL的Pt使用液置于5mL容量瓶中，用空白血浆定容至刻度；分别移取0.25、0.75、2.5mL的浓度为1000ng/mL的Pt使用液置于5mL容量瓶中，用空白血浆定容至刻度。得到浓度为0.0、0.5、1.5、5.0、15.0、50.0、150.0、500ng/mL的Pt标准溶液。

3.2样品处理

将适量血浆转移至离心管中，放入离心机中12000r/min离心5min，收集上层清液。

3.3检测条件

液相色谱：

不使用色谱柱，仅使用液相色谱的自动进样器功能，并按下述设定条件进样。

液相色谱条件设定：

流动相：纯水；流速：1.0mL/min；

进样量：20μL；进样速度：5μL/s；

洗针液：纯水；洗脱程序：等度洗脱。

质谱条件：

3.4绘制标准曲线

将步骤3.1中配制好的Pt标准序列溶液放入液相色谱自动进样盘中，按照上述检测条件，以Pt元素的浓度为横坐标，以Pt元素的峰面积为纵坐标建立标准工作曲线。标准曲线及谱峰轮廓图分别如图1和图2所示.其中线性系数r＝0.99956。

3.5样品检测

将血浆样品进入LC-ICP-MS检测，按照上述检测条件，由标准曲线得到血浆中Pt元素的浓度。

4、结果分析

4.1方法检出限

以进样体积20μL，浓度为0.5ng/mL样品溶液，考察Pt的信噪比，根据信噪比S/N＝3和S/N＝10，求出仪器检出限和定量限分别为0.16ng/mL和0.52ng/mL。

4.2方法准确性

以空白血浆分别配制定量限0.5ng/mL(LLOQ-0.5)、低点1ng/mL(QCL-1)、中间点20ng/mL(QCM-20)和高点浓度400ng/mL(QCH-400)的样品溶液各三份，检测并计算回收率，结果显示其回收率除了0.5ng/mL的稍高外，其它浓度的回收率范围为99.8～110％，回收率良好，回收率结果见表1。

表1.回收率结果

4.3仪器耐用性考察

使用同一条标准曲线，相同仪器连续测定3天，对1、15、50ng/mL的标液进行准确度的考察，结果见表2所示：

表2.耐用性结果(ng/mL)

4.4重复性试验

以20ng/mL带基体标液(基体为空白血浆)和500ng/mL标液对重复性进行考察，进样体积分别为20μL和1μL。其标准偏差为1.05％和1.39％。结果见表3和表4所示。

表3 20ng/mL标液连续测定结果(n＝9)

表4 500ng/mL标液连续测定结果(n＝15)

本发明方法使用岛津LC-20i+ICPMS-2030型电感耦合等离子体质谱仪测定了血浆样品中Pt元素含量。LC装置中无色谱柱，仅利用LC的自动进样器，以应对生物样品取样量少的特点。该方法灵敏度高，方法检出限0.16ng/mL，不同浓度样品3天耐用性结果在98.0-99.3％之间，重复性好RSD％低于1.39％，该法适应于大批量取样量少的生物样品的批量分析。

上述虽然结合附图对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。