一种分离测定醋酸阿比特龙中间体中有关物质的方法与流程

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种高效液相色谱法测定醋酸阿比特龙中间体中有关物质含量的方法。

背景技术：

醋酸阿比特龙酯是一种雄性激素合成抑制剂，能够抑制CYP17的酶复合体的生成，从而减少体内雄激素产生，进而可以作为治疗晚期前列腺癌的药物。醋酸阿比特龙分子式为C26H33NO2，分子量391.25，化学名称为：17-(3-吡啶)雄甾-5,16-二烯-(3β)-乙酸酯，其结构如下式1所示：

2011年4月28日，美国食品药品管理局(FDA)批准了醋酸阿比特龙酯(商品名：Zytiga)作为治疗晚期前列腺癌的药物的应用，将其与泼尼松联用后，可以用于治疗接受过紫杉醇化疗的方案但并无疗效的转移性前列腺癌患者。同时，Zytiga和强的松联合用药的结果显示，与对照剂相比，病人的死亡率降低了35％。

醋酸阿比特龙在原料、合成过程、储藏过程中会产生一些杂质。在醋酸阿比特龙的合成路线中，醋酸阿比特龙由中间体阿比特龙发生酯化反应生成。

为严格控制醋酸阿比特龙的质量，我们对合成过程的中间体Z1即阿比特龙的杂质进行控制。因此建立中间体Z1有关物质质量控制项，对产品有关物质进行控制，能提高产品的质量可控性和安全性。

发明105223282B提供了一种高效液相色谱梯度法测定醋酸阿比特龙中有关物质的方法，其以有机相为流动相B，以缓冲液和流动相B的混合溶液为流动相A，梯度洗脱。该发明提供的方法能够分离杂质种类为5种，其能够分离的醋酸阿比特龙中杂质的种类较少。

本发明将以合成过程中的中间体Z1即阿比特龙为切入点，对其杂质进行控制。在目前所查阅的检测方法，无任何药典和文献报道一种检测方法能够同时分离测定中间体Z1的多个杂质。中间体Z1的杂质分析如下表：

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种分离阿比特龙中有关物质的方法，其能够快速、有效分离上述中间体、醋酸阿比特龙及其11种有关物质。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

上述有关物质的分子式为I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI，固定相为十八烷基键合硅胶，流动相为乙腈、甲醇、乙醇和水的混合溶液，其中乙腈、甲醇、乙醇和水的体积比为78～94:2～8:2～6:2～8；上述分离方法采用物质分配的原理完成分离。

所述阿比特龙中有关物质包含以下化合物的一种或多种：

其中杂质XI为合成阿比特龙的原料SM1。

作为优选的方案，上述流动相中乙腈、甲醇、乙醇和水的体积比为83～89：4～6：3～5：4～6，进一步优选为86：5：4：5。

作为优选的方案，上述分离方法采用高效液相色谱法。

作为优选的方案，阿比特龙的稀释剂为甲醇和异丙醇的混合溶液，其中甲醇和异丙醇的体积比为75～95:5～25，进一步优选为90:10。

作为优选的方案，上述色谱柱柱温为23～27℃，进一步优选为25℃。

作为优选的方案，上述色谱柱中流速为0.8～1.2ml/min，进一步优选为1.0ml/min。

作为优选的方案，上述色谱柱的进样体积为5～30μl，进一步优选为10μl。

本发明的目的之二在于提供一种基于目的一的方法测定阿比特龙中有关物质含量的方法，其能够快速、准确的测定阿比特龙中11种杂质的含量。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

色谱柱填料为十八烷基键合硅胶，流动相为乙腈、甲醇、乙醇和水的混合溶液，其中乙腈、甲醇、乙醇和水的体积比为78～94:2～8:2～6:2～8；

测定阿比特龙中有关物质含量的方法包括以下步骤：

1)根据目的一的方法完成阿比特龙及杂质的完全分离；

2)一定浓度的阿比特龙、醋酸阿比特龙及11种有关物质的混合溶液用步骤1)的方法完成分离，步骤1)产生的色谱图的杂质峰和主成分峰面积比较，按照加校正因子的主成分自身对照法计算各有关物质的含量。

作为优选的方案，上述测定阿比特龙有关物质含量的方法包括以下步骤：

1)取阿比特龙制成供试品溶液，取供试品溶液稀释成对照溶液，取阿比特龙、醋酸阿比特龙和11种有关物质制成系统适用性溶液；

2)步骤1)的供试品溶液、对照溶液、系统适用性溶液和稀释剂按照目的一的方法用高效液相色谱完成分离；

3)供试品溶液产生的色谱图的杂质峰和主成分峰面积比较，按照加校正因子的主成分自身对照法计算各有关物质的含量；

作为优选的方案，上述流动相中乙腈、甲醇、乙醇和水的体积比为83～89：4～6：3～5：4～6，进一步优选为86：5：4：5。

作为优选的方案，阿比特龙的稀释剂为甲醇和异丙醇的混合溶液，其中甲醇和异丙醇的体积比为75～95:5～25，进一步优选为90:10。

作为优选的方案，上述色谱柱柱温为23～27℃，进一步优选为25℃。

作为优选的方案，上述色谱柱中流速为0.9～1.1ml/min，进一步优选为1.0ml/min。

作为优选的方案，上述色谱柱的进样体积为5～30μl，进一步优选为10μl。

作为优选的方案，检测器的检测波长为200～220nm，进一步优选为210nm。

本发明的有益效果在于：本发明提供的测定醋酸阿比特龙中间体中有关物质含量的方法，能够快速有效的分离、测定阿比特龙中11种有关物质，通过采用加校正因子的主成分自身对照法能够准确计算出各杂质含量。本发明提供的方法建立起对于阿比特龙有关物质的质量控制项，对产品醋酸阿比特龙有关物质进行控制，能提高产品的质量可控性和安全性。

附图说明

图1为系统适用性溶液的高效液相色谱图

图2为空白稀释剂的高效液相色谱图

图3为供试品溶液的高效液相色谱图

图4为对照溶液的高效液相色谱图

具体实施方式

以下将(参照附图)对本发明的优选实施例进行详细描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

实施例1 阿比特龙中各有关物质的分离测定

1.实验条件

2.溶液配制(避光操作)

1)供试品溶液：取本品(阿比特龙)适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成浓度为2mg/ml的溶液，摇匀，即得。

2)对照溶液：精密量取供试品溶液0.5ml，置100量瓶中，用稀释剂稀释制成浓度为10μg/ml的溶液，作为对照溶液。

3)系统适用性溶液：取阿比特龙系统适用性对照品(含阿比特龙、醋酸阿比特龙、杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI、杂质VII、杂质VIII、杂质IX、杂质X和杂质XI)用稀释剂溶解至每1ml含阿比特龙2mg和含各有关物质10μg的溶液。

3.测试方法

1)精密量取系统适用性溶液和稀释剂各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序为杂质V、杂质VI、杂质XI、杂质III、杂质VII、阿比特龙、杂质II、杂质IV、醋酸阿比特龙、VIII、杂质X、杂质I和杂质IX，阿比特龙和杂质II峰的分离度应不小于1.5。各杂质保留时间和分离度见表1。

表1 各杂质保留时间和分离度

本发明提供的分离测定阿比特龙中有关物质的方法，各杂质的分离度均大于1.5，说明该方法分离效果好，能够有效完成各杂质的分离。

2)精密量取对照溶液与供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的8倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，除溶剂峰和醋酸阿比特龙峰外，按加校正因子的主成分自身对照法计算各杂质含量，供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.1倍的峰可忽略不计(0.05％)。计算公式如下:

式中：Ax——供试品溶液中杂质峰峰面积；

As——对照溶液中主峰峰面积；

F——杂质校正因子。

各杂质的相对保留时间、校正因子见下表2。

表2 各杂质的相对保留时间、校正因子

4.结果

对5个不同批次的阿比特龙进行了有关物质检测，并按照上述杂质含量的计算公式计算，得出的有关物质的检测结果见下表3：

表3 不同批次阿比特龙中有关物质检测结果

本发明采用等度洗脱高效液相色谱法检测阿比特龙的有关物质，同时对11个已知杂质和未知杂质进行分离，且用加校正因子的主成分自身对照法进行计算，得到准确的杂质含量，方法简单、快速、有效。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。