检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条的制作方法

本实用新型涉及一种检测鸡传染性贫血病毒抗体的器具。更具体地说，本实用新型涉及一种用在病毒感染或免疫接种情况下的检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条。

背景技术：

鸡传染性贫血病毒(Chicken Infectious Anemia Virus,CIAV)引起鸡传染性贫血，以雏鸡再生障碍性贫血、全身淋巴组织萎缩、皮下和肌肉出血及高死亡率为特征，而且造成感染鸡免疫抑制，加重和导致其他疾病的发生。CIAV广泛存在于全球大部分养鸡的国家和地区，我国于1983年分离到CIAV，目前在我国大部分省、市和地区都有鸡传染性贫血的发生和流行，给养鸡业造成重要的经济损失。

快速检测鸡传染性贫血病毒抗体，不仅可以评价疫苗免疫效果，而且可以辅助临床诊断，是有效控制鸡传染性贫血病毒感染的前提。目前检测鸡传染性贫血病毒抗体的方法主要有琼脂免疫扩散试验(AGP)、血清中和实验、IFA和ELISA等方法。然而，AGP耗时长，血清中和实验、IFA和ELISA检测技术操作复杂，需要昂贵的仪器设备、过程较长、耗时费力，需要特定仪器设备和专业技术人员操作，很难在基层普及，不能满足生产一线或疫病现场的快速检测需要。因此，亟待有一种快速检测鸡传染性贫血病毒抗体的设备及技术。

技术实现要素：

本实用新型的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。

本实用新型还有一个目的是提供一种可检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条，其以胶体金标记鸡传染性贫血病毒或胶体金标记重组鸡传染性贫血病毒VP1蛋白为基础制备而成，金标病毒蛋白中金颗粒与病毒蛋白分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标对病毒蛋白的特异性和亲和力影响很小，且具有较高的印迹率。

为了实现根据本实用新型的这些目的和其它优点，提供了一种检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条，其特征在于，包括：

支撑层、吸附纤维层、金标纤维层、纤维素膜层及吸水层，其中吸附纤维层、金标纤维层、纤维素膜层及吸水层顺次搭接粘贴在支撑层上；

鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线，其为包被的纯化的鸡传染性贫血病毒抗原液印制的印迹线且设置在所述纤维素膜层上；

羊或兔抗鸡传染性贫血病毒免疫球蛋白G的对照印迹线，其为包被的羊或兔抗鸡传染性贫血病毒免疫球蛋白G溶液印制的对照印迹线且设置在所述纤维素膜层上，且与所述鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线定距间隔排列；

其中，所述金标纤维层上附着有与鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线对应的以胶体金标记的鸡传染性贫血病毒或胶体金标记的重组鸡传染性贫血病毒VP1蛋白。

优选的是，其中，在所述吸附纤维层、金标纤维层以及吸水层上敷设有保护膜，且在所述吸附纤维层上端面保护膜上设置样品标记线，所述样品标记线与所述吸附纤维层和所述金标纤维层交界处的水平距离为0.3～0.7cm。

优选的是，其中，所述鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线为一条“/”或者两条“/”。

优选的是，其中，当所述鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线为一条“/”时，所述鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线与羊或兔抗鸡传染性贫血病毒免疫球蛋白G的对照印迹线的排列形式为“||”、“十十”、“┬┬”、“┴┴”、“├├”、“┤┤”和“●●”中的一种；当所述鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线为两条“/”时，所述鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线与羊或兔抗鸡传染性贫血病毒免疫球蛋白G的对照印迹线的排列形式为“|||”、“十十十”、“┬┬┬”、“┴┴┴”、“├├├”、“┤┤┤”和“●●●”中的一种。

优选的是，其中，所述纤维素膜层由硝酸纤维素膜、纤维素、羧化纤维素或聚偏二氟乙烯制成。

优选的是，其中，所述吸附纤维层由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成。

优选的是，其中，所述支撑层由不吸水的硬质塑胶片或硬纸条制成。

优选的是，其中，所述吸水层用吸水纸制成。

优选的是，其中，所述金标纤维层由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成。

优选的是，其中，所述鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线设置在所述纤维素膜层且靠近所述金标纤维层的一端。

本实用新型至少包括以下有益效果：

1、检测特异性强，敏感性高。本实用新型提供的试纸条以胶体金标记鸡传染性贫血病毒或胶体金标记重组鸡传染性贫血病毒VP1蛋白为基础制备而成，金标病毒蛋白中金颗粒与病毒蛋白分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标对病毒蛋白的特异性和亲和力影响很小，且具有较高的印迹率；

2、操作简便，快速。使用本实用新型试纸条时无需附加任何其它仪器和试剂，只要将其测试端插入待检样品液中30秒左右，然后在5分钟左右即可判定检测结果；

3、结果显示直观、准确。本实用新型的试纸条以显示棕红色的检测印迹和对照印迹作为检测的阳性和阴性印迹，即在纤维素膜上显示两条棕红色印迹，表示在被检测样品中有病毒抗体检出，结果为阳性；在纤维素膜上只显示一条棕红色对照印迹C，表示在被检测样品液中未检出病毒抗体，结果为阴性。结果判定直观、准确，简单明了，不易出现假阴性和假阳性误判；

4、减少投资和检测成本。本实用新型的试纸条在使用时，不需另配其它仪器、设备和试剂，节省大量仪器、设备和附加试剂费用；专业和非专业人士均可随时随地进行现场检测，无需支付专家诊断检查费或送样品去诊断室的路费，节省检测成本，检测费用低；

5、应用范围广，便于普遍推广应用。本实用新型提供的试纸条操作简单，成“一步式”或“傻瓜式”，而且方便携带和保存，能满足不同层次人员的需要，包括专业化验、海关检疫、卫生防疫、质量监测、畜产品加工、集约化养殖到个体养殖等，具有广阔的市场前景和较好的经济、社会效益。

本实用新型的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本实用新型的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

附图说明

图1为本实用新型的一个实施例中检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条的侧面结构示意图；

图2为本实用新型的另一个实施例中检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条的俯视结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图对本实用新型/实用新型做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。

图1示出了本实用新型检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条的一种实现形式，其中包括：

支撑层1、吸附纤维层2、金标纤维层3、纤维素膜层4及吸水层5，其中吸附纤维层2、金标纤维层3、纤维素膜层4及吸水层5顺次搭接粘贴在支撑层1上；

其中，所述支撑层由不吸水的硬质塑胶片或硬纸条制成，并且，这种方式只是一种较佳实例的说明，但并不局限于此。在实施本实用新型时，可以根据测试条件的需求采用不同材料制成的支撑层的实施态样。

其中，所述纤维素膜层由硝酸纤维素膜、纯纤维素膜、羧化纤维素膜或聚偏二氟乙烯膜制成；所述吸附纤维层由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成；所述吸水层用吸水纸制成；所述金标纤维层由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成。

鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线6，其为包被的纯化的鸡传染性贫血病毒抗原液印制的印迹线且设置在所述纤维素膜层4上；

羊或兔抗鸡传染性贫血病毒免疫球蛋白G的对照印迹线7，其为包被的羊或兔抗鸡传染性贫血病毒免疫球蛋白G溶液印制的对照印迹线且设置在所述纤维素膜层4上，且与所述鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线6定距间隔排列；

其中，所述金标纤维层上附着有与鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线对应的以胶体金标记的鸡传染性贫血病毒或胶体金标记的重组鸡传染性贫血病毒VP1蛋白。

在另一种实例中，在所述吸附纤维层、金标纤维层以及吸水层上敷设有保护膜，且在所述吸附纤维层上端面保护膜上设置样品标记线，所述样品标记线与所述吸附纤维层和所述金标纤维层交界处的水平距离为0.3～0.7cm。

在另一种实例中，所述鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线为一条“/”或者两条“/”。

当所述鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线为一条“/”时，所述鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线与羊或兔抗鸡传染性贫血病毒免疫球蛋白G的对照印迹线的排列形式为“||”、“十十”、“┬┬”、“┴┴”、“├├”、“┤┤”和“●●”中的一种；当所述鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线为两条“/”时，所述鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线与羊或兔抗鸡传染性贫血病毒免疫球蛋白G的对照印迹线的排列形式为“|||”、“十十十”、“┬┬┬”、“┴┴┴”、“├├├”、“┤┤┤”和“●●●”中的一种。

在另一种实例中，所述鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线设置在所述纤维素膜层且靠近所述金标纤维层的一端。

<实例1>

一种检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条，参见图1和图2，图中1为以塑胶薄片条制成的支撑层，2为以玻璃棉制成的吸附纤维层，3为附着有胶体金标记的鸡传染性贫血病毒或胶体金标记的重组鸡传染性贫血病毒VP1蛋白的玻璃棉制成的金标纤维层，4为硝酸纤维素膜制成的纤维素膜层，5为由吸水滤纸制成的吸水层，将编号2、3、4、5各层依次粘贴在支撑层1上，彼此拼接的交界处纤维互相交叉渗透。在纤维素膜层4上，以纯化的鸡传染性贫血病毒抗原液印制标记检测印迹线6(代号T)，以羊或兔抗鸡传染性贫血病毒免疫球蛋白G溶液印制标记的对照印迹线7(代号C)；检测印迹线与对照印迹线的排列形式为“‖”。8-1为覆盖在吸附纤维层2和金标纤维层3上面的测试端的白色保护膜，在样品吸附层2和金标纤维层3交界处对应的白色保护膜上偏向于吸附纤维层2一侧0.5cm处印有印迹线9，印迹线的右端印有箭头及MAX字样，吸水层5(手柄端)上覆盖有其它颜色(如黄色)保护膜8-2。

本实用新型所述试纸条的检测操作方法

a、检测样品液的制备无菌取被检动物的血液，并分离血清，以生理盐水作1:200倍的稀释血清，得到待测样品；

b、检测操作：将该试纸条测试端插入待检测样品中，插入深度不超过印迹线，约30秒后取出试纸条，水平放置约1-5分钟，同时观察结果。

c、结果判断：如果在试纸条的纤维素膜上只显示出一条棕红色对照印迹C，表示测检结果呈阴性，说明在被检样品液中未检测出鸡传染性贫血病毒抗体；如果试纸条上的纤维素膜出现棕红色的对照印迹C和检测印迹T，表示检测结果呈阳性，即在待检样品中检出鸡传染性贫血病毒抗体；如果纤维素膜上没有任何棕红色印迹显示，则表明试纸条已失效或操作有误。

(6)本实用新型所述试纸条的检测原理：

当试纸条测试端(吸附纤维层)插入待检测样品溶液后，待检溶液通过层析作用带动待检鸡传染性贫血病毒抗体及金标纤维膜中的金标抗原一起向纤维素膜扩散，并最终渗入手柄端的吸水层中，扩散过程中待检病毒抗体可与该病毒抗体相对应的金标记的鸡传染性贫血病毒或金标记的重组鸡传染性贫血病毒VP1蛋白相结合，进而与纤维素膜上检测印迹中的病毒结合，从而显示出棕红色的检测印迹T；而对照印迹中的羊或兔抗鸡传染性贫血病毒IgG则可与金标鸡传染性贫血病毒或金标重组鸡传染性贫血病毒VP1蛋白结合，形成棕红色对照印迹C。如果待检样品液中没有鸡传染性贫血病毒CIAV抗体，试纸条只显示出一条棕红色对照印迹C；如果纤维素膜上没有任何棕红色印迹显示，则表明试纸条已失效或操作失误。

<实例2>

一种检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条，其结构、试纸条的检测操作方法、试纸条的检测原理与实施例1基本相同，不同之处在于：由尼龙纤维制成的金标纤维层3上附着以金标记的鸡传染性贫血病毒VP1蛋白；在硝酸纤维制成的纤维素膜层4上设有纯化的鸡传染性贫血病毒抗原液印制的检测印迹线T，以羊或兔抗鸡传染性贫血病毒免疫球蛋白G溶液印制的对照印迹线C。其它检测样品制备、操作方法和结果判定等均与实施例1相同，在此不再赘述。

<实例3>

一种检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条，其结构、试纸条的检测操作方法、试纸条的检测原理与实施例1基本相同，不同之处在于：由聚酯纤维制成的金标纤维层3上附着有金标记的重组鸡传染性贫血病毒VP1蛋白；在聚偏二氟乙烯制成的纤维素膜层4上设有纯化的鸡传染性贫血病毒抗原液印制标记的检测印迹线T，以羊或兔抗鸡传染性贫血病毒免疫球蛋白G溶液印制标记的对照印迹线C。其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均与实施例1相同，在此不再赘述。

<实例4>

一种检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条，其结构、试纸条的检测操作方法、试纸条的检测原理与实施例3基本相同，不同之处在于：由尼龙纤维制成的金标纤维层3上附着有金标记的重组鸡传染性贫血病毒VP1蛋白；聚偏二氟乙烯制成的纤维素膜层4上设有以纯化的鸡传染性贫血病毒抗原液印制标记的检测印迹线T，以羊或兔抗鸡传染性贫血病毒免疫球蛋白G溶液印制标记的对照印迹线C。

<实例5>

一种检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条，其结构、试纸条的检测操作方法、试纸条的检测原理与实施例3基本相同，不同之处在于：由尼龙纤维制成的金标纤维层3上附着有胶体金标记的鸡传染性贫血病毒VP1蛋白；在聚偏二氟乙烯制成的纤维素膜层4上设有纯化的鸡传染性贫血病毒抗原液印制的检测印迹线T，以羊或兔抗鸡传染性贫血病毒免疫球蛋白G溶液印制的对照印迹线C，所述鸡传染性贫血病毒抗体的检测印迹线与所述羊或兔抗鸡传染性贫血病毒免疫球蛋白G的对照印迹线的排列组合为“||”、“十十”、“┬┬”、“┴┴”、“├├”、“┤┤”和“●●”中的一种或者“|||”、“十十十”、“┬┬┬”、“┴┴┴”、“├├├”、“┤┤┤”和“●●●”中的一种。

<实例6>

一种检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条，该快速检测试纸条结构和实施例1基本相同，不同之处在于：支撑层1由不吸水的硬纸条制成，吸附纤维层2由尼龙纤维制成，纤维素膜层4采用纯纤维素膜制成。

<实例7>

一种检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条，该快速检测试纸条结构和实施例1基本相同，不同之处在于：吸附纤维层2由聚酯纤维膜制成，纤维素膜层4采用羧化纤维素膜制成。

<实例8>

一种检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条，该快速检测试纸条结构和实施例3基本相同，不同之处在于：测试端的吸附纤维层2用尼龙纤维制成，纤维素膜层4采用聚偏二氟乙烯(PVDF)纤维膜制成。

<实例9>

一种检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条，该快速检测试纸条结构和实施例5基本相同，不同之处在于：吸附纤维层2用聚酯纤维膜制成，纤维素膜层4采用纯纤维素膜制成。

这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本实用新型的说明的。对本实用新型的检测鸡传染性贫血病毒抗体的试纸条的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。

如上所述，根据本实用新型，由于以胶体金标记鸡传染性贫血病毒或胶体金标记重组鸡传染性贫血病毒VP1蛋白为基础制备而成，金标病毒蛋白中金颗粒与病毒蛋白分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标对病毒蛋白的特异性和亲和力影响很小，且具有较高的印迹率，因此，该试纸条具有较高的特异性和敏感性，可检测到2纳克的相应病毒的蛋白，该方法比ELISA等血清学方法更为简便、快速。

尽管本实用新型的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用。它完全可以被适用于各种适合本实用新型的领域。对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改。因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本实用新型并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。