黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测试纸条的制作方法

本实用新型属于黄曲霉素B1荧光检测技术领域，具体涉及一种黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测试纸条。

背景技术：

黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1简写为AFB1)是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素)，具有强致癌性以及剧毒性，是迄今发现的各种真菌毒素中最稳定的一种；从1993年开始黄曲霉毒素被认定为世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定的一类致癌物，是世界公认的三大强致癌物质之一，而黄曲霉毒素B1由于毒性最大，污染最重，是危害最大的一种黄曲霉毒素；黄曲霉毒素B1污染的食物主要是花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品，且在高温、高湿地区受污染最为严重。目前，GB2761-2011《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》中对粮食谷物及其制品中黄曲霉毒素B1的最高限量为20μg/kg。GB13078-2001《饲料卫生标准》中对不同种类的饲料中黄曲霉毒素B1的最高限量标准为10-50μg/kg。

目前，国标法测定黄曲霉毒素B1采用HPLC法，此方法需要大型的仪器设备，设备价格昂贵，操作过程复杂、时间较长，且无法在现场和基础小型实验室使用。因此人们发明了一种采用黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒或胶体金快速检测试纸条检测黄曲霉素的方法，此类方法用于大量样品的筛查，具有操作简便，检测快速，成本较低等优点，但采用的该类试纸条准确性和重复性较差，容易造成假阳性或者假阴性。

专利一种检测黄曲霉毒素B1的荧光免疫层析试纸(公告号CN106018795A)，公开了一种检测黄曲霉毒素B1的荧光免疫层析试纸，包括支撑体和固定在支撑体上的吸附层，吸附层从测试端开始依次为吸附纤维层、荧光抗体纤维层、纤维素膜层及吸水材料层，所述的纤维素膜层上设有用偶联AFB1的载体蛋白溶液印制的隐形检测印迹和用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗体溶液印制的隐形对照印迹；所述的荧光抗体纤维层采用吸附荧光抗体的玻璃纤维棉制成，荧光抗体为氧化石墨烯荧光纳米材料、NaYF4:Yb,Tm纳米颗粒或NaGd(WO4)2：Eu3+纳米颗粒标记的AFB1单克隆抗体或者多克隆抗体。该发明通过采用联AFB1的载体蛋白溶液印制的隐形检测印迹和用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗体溶液印制的隐形对照印迹提高检测的准确性和灵敏度，但是如果检测液与抗体不能够稳定的附着在吸附层上也会影响检测结果，而普通的纤维层的吸附力较差，并且渗透力较差，会影响检测液的层析。

因此，急需一种既简便快速，又能准确定量的黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测试纸条。

技术实现要素：

本实用新型提供了如下的技术方案：

一种黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测试纸条，包括盒体，所述盒体内设有支撑板，所述支撑板上设有依次连接的表面涂覆有荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体的乳胶垫和NC膜，所述NC膜上设有由黄曲霉毒素B1抗原喷涂的检测线和由羊抗鸡二抗喷涂的控制线，所述检测线与所述控制线相互平行且所述检测线距离所述乳胶垫较近；所述盒体上在所述乳胶垫的上方设有加样孔，所述盒体上在所述检测线和所述控制线的上方设有显示窗。

优选的，所述乳胶垫具有良好的透气性和杀菌作用，可以使通过所述加样孔滴加在所述乳胶垫上的检测液更好的渗透和层析，杀菌作用保证了检测环境；所述NC膜的吸附作用好，层析效果好。

优选的，所述NC膜的一端与所述乳胶垫连接，所述NC膜的另一端连接有吸水层，所述吸水层可以吸取多余的检测液。

优选的，在所述盒体内，所述乳胶垫的下方设有与所述加样孔位置对应的余液腔，由于所述乳胶垫的渗透性好，当所述检测液在乳胶垫上向所述NC膜方向层析时，多余的检测液落入所述余液腔，防止多余的检测液溢出；进一步为加强对多余检测液的吸收效果，所述余液腔内设有吸收垫。

优选的，所述加样孔的侧面为漏斗形，扩大检测液的容积，防止检测液溢出。

优选的，所述显示窗上设有透明的保护层，所述保护层既可以方便观察，又可以对检测线和控制线进行保护，防止影响检测结果。

优选的，最后本实用新型将插入检测仪中进行检测，为方便操作，在所述盒体表面靠近所述加样孔的一端设有若干凸起，所述凸起主要起防滑作用。

通过采用上述技术方案,本实用新型的有益效果是：检测效果好，便于观察；不会造成检测液溢出，保持检测过程中的整洁；具有防滑的凸起，防止在将本实用新型插入检测仪的过程中滑落。

附图说明

附图用来提供对本实用新型的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本实用新型的实施例一起用于解释本实用新型，并不构成对本实用新型的限制。在附图中：

图1是本实用新型结构示意图；

图2是本实用新型俯视图；

图中的标记为：1、盒体；2、支撑板；21、乳胶垫；22、NC膜；221、检测线；222、控制线；23、吸水层；3、加样孔；4、显示窗；41、保护层；5、余液腔；51、吸收垫；6、凸起。

具体实施方式

如图1-图2所示，一种黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测试纸条，包括盒体1，盒体1内设有支撑板2，支撑板2上设有依次连接的表面涂覆有荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体的乳胶垫21和NC膜22，NC膜22上设有由黄曲霉毒素B1抗原喷涂的检测线221和由羊抗鸡二抗喷涂的控制线222，检测线221与控制线222相互平行且检测线221距离乳胶垫21较近；盒体1上在乳胶垫21的上方设有加样孔3，盒体1上在检测线221和控制线222的上方设有显示窗4。

如图1-图2所示，一种黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测试纸条，包括盒体1，盒体1内设有支撑板2，支撑板2上设有依次连接的表面涂覆有被有荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体的乳胶垫21和NC膜22，NC膜22上设有由黄曲霉毒素B1抗原喷涂的检测线221和由羊抗鸡二抗喷涂的控制线222，检测线221与控制线222相互平行且检测线221距离乳胶垫21较近；盒体1上在乳胶垫21的上方设有加样孔3，盒体1上在检测线221和控制线222的上方设有显示窗4；在盒体1内，乳胶垫21的下方设有与加样孔3位置对应的余液腔5，由于乳胶垫21的渗透性好，当检测液在乳胶垫21上向NC膜22方向层析时，多余的检测液落入余液腔5，防止多余的检测液溢出；进一步为加强对多余检测液的吸收效果，余液腔5内设有吸收垫51。

如图1-图2所示，详细的，加样孔3的侧面为漏斗形；显示窗4上设有透明的保护层41；在盒体1表面靠近加样孔3的一端设有若干凸起6。

如图1-图2所示，本实用新型的具体操作方法为：取合适检测液滴加在加样孔3上，检测液落在乳胶垫21上，并向NC膜22方向层析，直至到达检测线221和控制线222；多余的检测液分别被余液腔5、吸水层23和漏斗形的加样孔3吸收或容纳。

为进一步验证本实用新型的检测效果，对实施例中提供的黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测试纸条进行实验检测：在用国标法测定为0的不同种类空白样品中分别添加黄曲霉毒素B1浓度为1.00，2.50，5.00，10.00，25.00，50.00μg/kg的标准品，然后使用本实用新型提供黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测试纸条进行检测。检测结果见表1。

表1不同样本检测的准确性和重复性

从表1可以看出，本实用新型提供的黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测试纸条的测试不同粮食谷物中黄曲霉毒素B1的添加回收率较高，重复变异系数较低。

以上仅为本实用新型的优选实施例而已，并不用于限制本实用新型，尽管参照前述实施例对本实用新型进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。