一种快速检测番鸭细小病毒抗体的试纸条的制作方法

本实用新型涉及一种检测番鸭细小病毒抗体的器具，特别是涉及一种快速检测番鸭细小病毒抗体的试纸条。

背景技术：

番鸭细小病毒病(Muscovy duck parvovirus Disease, MDPD)，是由番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus, MDPV)引起的，以腹泻、喘气和软脚为主要临诊症状的一种急性、败血性传染病，该病主要发生于3周龄以内的番鸭，故又称三周病，其主要临床症状是呼吸困难、厌食、腹泻、脱水及迅速消瘦。由于该病传播快，发病率、死亡率都很高，给番鸭养殖造成重要经济损失。

番鸭细小病毒病最早于20世纪80年代中后期出现于我国福建和法国西部Brittany地区，现已广泛分布。由于MDPV属细小病毒，对环境抵抗力强，65℃加热30min对其滴度无影响，对乙醚等有机溶剂不敏感，对胰酶和pH3稳定，难于从环境中消除，极大影响了我国养鸭业的健康发展。

快速检测MDPDV抗体，不仅可以评价疫苗免疫效果，而且可以辅助临床诊断，是有效控制MDPD的前提。目前检测MDPDV抗体的方法主要有琼脂免疫扩散试验（AGP）、血清中和实验、IFA和ELISA等方法。然而，AGP耗时长，血清中和实验、IFA和ELISA等检测技术操作复杂，需要昂贵的仪器设备、过程较长、耗时费力，需要特定仪器设备和专业技术人员操作，很难在基层普及，不能满足生产一线或疫病现场的快速检测需要。因此，亟待有一种快速检测禽番鸭细小病毒抗体的设备及技术。

技术实现要素：

本实用新型的一个目的是提供一种快速检测番鸭细小病毒抗体的试纸条，并提供至少后面将说明的优点。

本实用新型还有一个目的是提供一种结果显示直观、准确、快速检测MDPV抗体的试纸条，与其他检测方法相比，该试纸条特异性强、灵敏度高、操作简便、结果显示快速，检测成本低廉。

本实用新型的技术方案具体为：

一种快速检测番鸭细小病毒抗体的试纸条，包括支撑层，支撑层一端粘贴样品吸附纤维层，另一端粘贴吸水层，在支撑层的吸附纤维层与吸水层之间的部分粘贴纤维素膜层与金标纤维层，吸附纤维层、金标纤维层、纤维素膜层、吸水层之间彼此拼接的交界处纤维互相交叉渗透，其特征在于：所述纤维素膜层上设有标记包含以纯化的番鸭细小病毒抗体的检测印迹与包含以羊或兔抗番鸭细小病毒抗体的对照印迹，检测印迹与对照印迹并列排列在纤维素膜层上，检测印迹的位置靠近吸附纤维层；金标纤维层为附着有胶体金标记的番鸭细小病毒或胶体金标记的重组番鸭细小病毒VP2蛋白的玻璃棉制成；本试纸条设有样品吸附纤维层的一端为入水端，设有吸水层的一端为握持端，入水端外侧覆盖有白色的第一保护膜，握持端覆盖有第二保护膜；在吸附纤维层和金标纤维层交界处对应的保护膜上偏向于样品吸附纤维层一侧0.5cm处印有印迹线；握持端设有便于握持的凹槽。

支撑层在入水端设为网格状，其网孔的形状为圆形、正方形、三角形、菱形、六边形。

支撑层为以塑胶薄片条制成。

本实用新型至少包括以下有益效果：

（1）检测特异性强，敏感性高。本实用新型提供的试纸条以胶体金标番鸭细小病毒或金标记的重组番鸭细小病毒VP2蛋白为基础制备而成，金标病毒中金颗粒与病毒蛋白分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标对病毒蛋白的特异性和亲和力影响很小，且具有较高的印迹率。

（2）操作简便，快速。本实用新型的试纸条在使用时无需附加任何其它仪器和试剂，只要将其测试端插入待检样品液中30秒左右，5分钟左右即可判定检测结果。

（3）结果显示直观、准确。本实用新型的试纸条以显示棕红色的检测印迹和对照印迹作为检测的阳性和阴性印迹，即在纤维素膜上显示两条棕红色印迹，表示在被检测样品中有病毒抗体检出，结果为阳性；在纤维素膜上只显示一条棕红色对照印迹C，表示在被检测样品液中未检出病毒抗体，结果为阴性。结果判定直观、准确，简单明了，不易出现假阴性和假阳性误判。

（4）减少投资和检测成本。本实用新型的试纸条在使用时，不需另配其它仪器、设备和试剂，节省大量仪器、设备和附加试剂费用；专业和非专业人士均可随时随地进行现场检测，无需支付专家诊断检查费或送样品去诊断室的路费，节省检测成本，检测费用低。

（5）应用范围广，便于普遍推广应用。本实用新型提供的试纸条操作简单，成“一步式”或“傻瓜式”，而且方便携带和保存，能满足不同层次人员的需要，包括专业化验、海关检疫、卫生防疫、质量监测、畜产品加工、集约化养殖到个体养殖等，具有广阔的市场前景和较好的经济、社会效益。

（6）本实用新型根据ELISA的基本原理，用免疫层析试纸检测病毒抗体，利用微孔滤膜的渗滤浓缩和毛细管作用，将抗原-抗体反应由ELISA的传统液相环境转到固相滤膜上快速进行，并采用胶体金印迹代替酶印迹，凭肉眼直接观察胶体金的显色状况，即时获得检测结果，因此该方法比ELISA等血清学方法更为简便、快速。

附图说明

图1为本实用新型的剖面示意图；

图2为本实用新型的俯视示意图；

图3为支撑层的示意图。

具体实施方式

下面结合附图对本实用新型做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

如图1与图2，一种快速检测番鸭细小病毒抗体的试纸条，包括支撑层1，支撑层1一端粘贴样品吸附纤维层2，另一端粘贴吸水层5，在支撑层1的吸附纤维层2与吸水层5之间的部分粘贴纤维素膜层4与金标纤维层3，吸附纤维层2、金标纤维层3、纤维素膜层4、吸水层5之间彼此拼接的交界处纤维互相交叉渗透，在纤维素膜层4上设有标记包含以纯化的番鸭细小病毒抗体的检测印迹6与包含以羊或兔抗番鸭细小病毒抗体的对照印迹7，检测印迹6与对照印迹7并列排列在纤维素膜层上，检测印迹6的位置靠近吸附纤维层，检测印迹6的代号为C；对照印迹7的代号为T。

金标纤维层3为附着有胶体金标记的番鸭细小病毒或胶体金标记的重组番鸭细小病毒VP2蛋白的玻璃棉制成。

本试纸条设有样品吸附纤维层2的一端为入水端（也称为测试端），设有吸水层5的一端为握持端，入水端外侧覆盖有白色的第一保护膜81，握持端覆盖有其它颜色例如黄色的第二保护膜82。在吸附纤维层2和金标纤维层3交界处对应的保护膜上偏向于样品吸附纤维层2一侧0.5cm处印有印迹线9，印迹线的右端印有箭头及MAX字样。

事实上，即使设有不同颜色的保护膜，也可能会使检测人员将入水端与握持端混淆，造成检测事故。所以，在握持端设有便于握持的凹槽83或者凸起（图中只画了凹槽），凹槽83或者凸起标记有大拇指形状，这样设置，既能方便检测人员区分水端与握持端，也方便了握持，更符合人体工学。

如果为凹槽83，凹槽83向内延伸到吸水层5或者支撑层1，方便握持。

如果为凸起，凸起可以为弹性材料，方便握持。

支撑层1为以塑胶薄片条制成。

如图3，支撑层1在入水端设为网格状，其网孔11的形状为圆形、正方形、三角形、菱形、六边形。正常的试纸条检测时，吸水层5只有支撑层1的相对侧可以吸水（溶液），而本实用新型的支撑层1的入水端为网格状，可以使吸水层5在支撑层1的一侧通过网孔11也能吸水，这样以来，吸水层5可以两面吸水，加快了吸水的速度，缩短了检测所用的时间，提高了工作效率。

样品吸附纤维层2为以玻璃棉制成。

纤维素膜层4为以硝酸纤维素膜制成的。

吸水层5为由吸水滤纸制成。

本实用新型的检测操作方法

a 检测样品液的制备：无菌取被检动物的血液，并分离血清，以生理盐水作1: 200倍的稀释血清，得到待测样品；

b检测操作：将该试纸条入水端插入待检测样品中，插入深度不超过印迹线，约30秒后取出试纸条，水平放置约1-5分钟，同时观察结果。

c结果判断：如果在试纸条的纤维素膜上只显示出一条棕红色对照印迹C，表示测检结果呈阴性，说明在被检样品液中未检测出番鸭细小病毒抗体；如果试纸条上的纤维素膜出现棕红色的对照印迹C和检测印迹T，表示检测结果呈阳性，即在待检样品中检出番鸭细小病毒抗体；如果纤维素膜上没有任何棕红色印迹显示，则表明试纸条已失效或操作有误。

本实用新型的检测原理：

当试纸条测试端即吸附纤维层插入待检测样品溶液后，待检溶液通过层析作用带动待检病番鸭细小病毒抗体及金标纤维膜中的金标抗原一起向纤维素膜扩散，并最终渗入手柄端的吸水层中，扩散过程中待检病毒抗体可与该病毒抗体相对应的金标番鸭细小病毒或金标重组番鸭细小病毒VP2蛋白相结合，进而与纤维素膜上检测印迹中的病毒结合，从而显示出棕红色的检测印迹T；而对照印迹中的羊或兔抗番鸭细小病毒 IgG则可与金标番鸭细小病毒或金标重组番鸭细小病毒VP2蛋白结合，形成棕红色对照印迹C。如果待检样品液中没有MDPV抗体，试纸条只显示出一条棕红色对照印迹C；如果纤维素膜上没有任何棕红色印迹显示，则表明试纸条已失效或操作失误。