专利名称：黄曲霉毒素B<sub>1</sub>生物降解剂的制备方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及黄曲霉毒素B1生物降解剂的制备方法及其应用，属饲料添加剂领域。(ニ)
背景技术：
黄曲霉毒素(Aflatoxin，AF)是由黄曲霉、寄生曲霉等几种真菌产生的次生代谢产物，是ー类结构和理化性质相似的分子真菌毒素，是ー种剧毒物和强致癌物质，其中AFBi为迄今发现的各种真菌毒素中最稳定、毒性最強的ー种。由于产毒的黄曲霉菌产生毒素B1的量最多，而且毒性最強，所以一般測定B1的含量代表食品中黄曲霉毒素的含量。大量的流行病学调查及研究均证实，畜禽食入被污染的饲料会降低动物的生产性能、引发一系列疾病，可间接通过食物链进入人体并具有极强的 致癌作用，严重威胁人类健康。1993年，AFB1被世界卫生组织的癌症研究机构划定为A类致癌物。传统的去除AFB1方法主要有吸附、萃取、热处理、射线处理、酸碱处理、氧化还原处理，但是有费时费力、去毒率不高、易造成营养物质流失的缺点。因此，迫切需要一种高效安全的脱毒方法消除这类毒素对人畜健康的危害。
发明内容
为了解决上述问题，本发明利用能够降解黄曲霉毒素B1的黑曲霉(aspergillusniger)及其所产生的降解酶提供了ー种黄曲霉毒素B1生物降解剂的制备方法及其应用。本发明所使用的黑曲霉(aspergillus niger),购自中国普通微生物菌种保藏中心，其保存编号为CGMCC NO. 3. 2915。黄曲霉毒素B1生物降解剂的制备方法如下
将黑曲霉(CGMCC NO. 3. 2915)在PDA固体培养基平板上划线分离，37°C培养48h，调取单菌落，接入IOOmlPDB液体培养基中，在37°C下振荡培养3 5d，取发酵液将发酵液在4°C,8000 r / min条件下离心20 min，或采用抽滤的方法，分离上清液与菌体细胞；取上清液，用浓度为30 90%的硫酸铵沉淀；用发酵液1/10体积的生理盐水溶解沉淀物，透析6 24小时脱盐，即得黄曲霉毒素BI生物降解剂，所得黄曲霉毒素BI生物降解剂中蛋白含量在 20 40mg/ml。所述PDA固体培养基(g/L)制备方法为马铃薯200，葡萄糖20，琼脂20，混合后，121°C高压蒸汽灭菌15min。所述PDB培养基(g/L)制备方法为马铃薯200，葡萄糖20，混合后，121 °C高压蒸汽灭菌15min。所述振荡培养的条件为发酵温度为20 40で，发酵时间24 1201!，？!1值5.0 9. 0，转速为 120 200r/min。将该降解剂按5 10% (V/W)与啤酒酵母细胞等物质混合，烘干后制备成黄曲霉毒素BI生物降解饲料添加剂，添加剂应用于全价饲料的添加量为I 2% (重量比)。
具体实施方式
实例I
将黑曲霉(CGMCC NO. 3. 2915)在PDA固体培养基平板上划线分离，37°C培养48h，调取单菌落，接入IOOmlPDB液体培养基中；
在37°C下振荡培养3 5d，取发酵液；在4°C，8000 r / min条件下离心20 min，或采用抽滤的方法，分离上清液与菌体细胞，取上清液，即得粗提液；
用30 90%的硫酸铵沉淀粗提液,用10 ml生理盐水溶解沉淀物,装入透析袋。用清水透析6 24小时脱盐，即得精制黄曲霉毒素B1降解剂(蛋白含量在20 40mg/ml)。该降解剂按5 10% (V/W)用啤酒酵母细胞混合，制备成黄曲霉毒素BI生物降解饲料添加剂，按I 2% (重量比)与全价饲料混合使用。使用效果验证
I.取含黄曲霉毒素B1液体样品100ml (AFB1含量为40mg/L)，加入精制黄曲霉毒素B1降解剂1ml，混匀，37°C作用2d后，样品中黄曲霉毒素B1的降解率达80 90%为合格。 2.取饲料SOOgUFB1含量为20 100mg/kg)，添加其重量的I %按照本发明制备的黄曲霉毒素BI生物降解饲料添加剂，同时加入300ml去离子水，混匀。在温度37°C作用3d后,词料中黄曲霉韋素B1的降解率为70 80%为合格。目前，市售全价饲料中由于使用了霉菌污染的玉米，或多或少都含有黄曲霉毒素B1 (AFB1X畜禽长期使用AFB1含量超过20mg/kg的饲料，即会出现黄曲霉毒素中毒，表现为采食量下降、增重缓慢、消痩、甚至死亡。利用本发明制备的黄曲霉毒素BI生物降解饲料添加剤，按I 2% (重量比)与全价饲料混合，可将饲料中的大部分AFB1降解，较少或消除畜禽黄曲霉毒素中毒现象。
权利要求
1.ー种黄曲霉毒素B1生物降解剂的制备方法，其特征在于先将黑曲霉(CGMCCNO. 3. 2915)在PDA固体培养基平板上划线分离，37°C培养48h，调取单菌落，接入IOOmlPDB液体培养基中，在37°C下振荡培养3 5d，取发酵液；将发酵液在4°C，8000 r / min条件下离心20 min，或采用抽滤的方法，分离上清液与菌体细胞；取上清液，用浓度为30 90%的硫酸铵沉淀；用发酵液1/10体积的生理盐水溶解沉淀物，透析6 24小时脱盐，即得黄曲霉毒素BI生物降解剂，所得黄曲霉毒素BI生物降解剂中蛋白含量在20 40mg/ml ； 所述PDA固体培养基(g/L)制备方法为马铃薯200，葡萄糖20，琼脂20，混合后，121°C高压蒸汽灭菌15min ； 所述PDB培养基(g/L)制备方法为马铃薯200，葡萄糖20，混合后，121°C高压蒸汽灭M 15min ； 所述振荡培养的条件为发酵温度为20 40°C，发酵时间24 120h，pH值5. O 9. 0，转速为120 200r/min。
2.ー种黄曲霉毒素B1生物降解剂的应用，其特征在于将该降解剂按V/W 5 10%与啤酒酵母细胞混合，烘干后制备成黄曲霉毒素BI生物降解饲料添加剂，添加剂应用于全价饲料的添加量为重量比I 2%。
全文摘要
本发明提供了一种黄曲霉毒素Bl生物降解剂的制备方法及其应用，是利用能够降解黄曲霉毒素B1的黑曲霉(aspergillusniger)及其所产生的降解酶提供了一种黄曲霉毒素Bl生物降解剂的制备方法及其应用；将该降解剂按5～10%(V/W)与啤酒酵母细胞等物质混合，烘干后制备成黄曲霉毒素B1生物降解饲料添加剂，将添加剂按1～2％(重量比)与全价饲料混合，可将饲料中的大部分AFB1降解，较少或消除畜禽黄曲霉毒素中毒现象。
文档编号A23K1/16GK102687800SQ20121013370
公开日2012年9月26日 申请日期2012年5月3日 优先权日2012年5月3日
发明者常维山, 李冰 申请人:山东农业大学