一种黄柏对照提取物及其制备方法和应用与流程

本发明属于化学领域，尤其是涉及一种黄柏对照提取物及其制备方法。
背景技术：
：药品检验是验证药品质量的一个重要手段，随着仪器分析的广泛使用，越来越多地使用药品标准物质。在药品检验工作中常会用对照品作为检查药品质量的特殊参照物，以它作为确定药品真伪优劣的对照标准。对照品在药品检验中具有十分重要的地位。现在中药标准中，单一成分控制质量的模式难以很好的反映中药质量，采用多种成分或特征色谱峰综合控制质量的方法越来越引起人们的重视。然而，商品化的对照品的供不应求和高昂的检测成本限制了多成分的质量控制在实际生产、科研和监管领域的应用。使用对照提取物既可以解决单体对照品制备难度大、紧缺的问题，又可以达到对指标成分控制的目的，对中药的质量控制和标准执行都有重要的意义。现行中药质量控制模式基本上是沿着天然药物化学的发展，对中药某一种或几种有效成分为目标的分析方法和既有定性又可定量的质量标准的构思，参照国外植物药的质量控制方法，借鉴化学药品质量控制的模式，并借助文献报道建立相应的简单理化鉴别，再发展到以光谱、色谱为主的鉴别和含量测定的质量标准。每一味中药材都是多成分的综合体，这决定了其特有的整体性和模糊性，也表明以药材中一两个甚至几个成分作为药材质量的评价方法存在很大的局限性。1990版《中国药典》增加了对照药材的薄层色谱鉴别，使得中药及中成药的鉴别有了很大的进展。目前中药和国外的草药越来越重视多成分或多组分的检测，例如德国银杏叶提取物的质量控制。指纹图谱的分析方法，可以从整体上对药材进行质量控制，现在仍然有很大的研究价值。目前中国药典在控制药材质量方面有两种“对照品”，化学对照品和中药对照药材。其中化学对照品可用于药材的定性鉴别和定量分析，中药对照药材则用于显微鉴别和薄层鉴别。然而，化学对照品和中药对照药材在中药质量控制上都有其局限性。首先，中药中化学成分多样化，单一或者几个化合物并不能反映药材的全貌，而现有的标准往往有很多漏洞，以次充好的现象时有发生。中药对照药材受到产地、生长环境的影响，很难保证每一批的质量一致，而且只能用于定性鉴别，无法反映药材成分含量的高低。中药对照提取物有四个基本要求(ascs):authenticity，药材来源可靠，具有代表性；specificity，使用的检测方法具有专属性；con-sistency，不同批次对照提取物应保持一致；stability，性状稳定、均匀、便于使用。运用薄层色谱指纹图谱以及高效液相色谱指纹图谱的方法，中药对照提取物能满足定性鉴别的需要。通过标化的对照提取物还可以进一步进行半定量甚至定量的分析。中药对照提取物将对中药质量控制有重要义。黄柏药材(为芸香科植物黄皮树phellodendronchinenseschneid，的干燥树皮)。国家药典委员会发布的中国药典质量标准中，对黄柏作为对照药材时薄层色谱法检测黄柏碱，高效液相色谱法测定小檗碱和黄柏碱的含量，黄柏对照药材作为供试品操作比较复杂，且药材本身不稳定。药品日常检验过程中，有效成分检测不稳定，产品质量得不到有效控制。由于中药对照提取物有上述特定的要求，目前现有技术还未有或未有成熟的黄柏对照提取物及其制备方法来代替黄柏对照药材的应用。技术实现要素：为了解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种为了解决上述技术问题，本发明对黄柏制剂或黄柏药材检测中存在的检测标准不全面，使用多种对照品检测成本高的问题，本发明提供一种对黄柏药材、黄柏提取物及其黄柏制剂中的化合物同时进行检测的黄柏对照提取物，该黄柏对照提取物一致性好、性状稳定、均匀，可用于黄柏药材、黄柏处方的质量控制，对有效化合物定性定量的分析测定。本发明还提供了黄柏对照提取物的制备方法。该方法操作简便、成本低、重复性好且提取率高。本发明还提供了用黄柏对照提取物代替对照药材检测含黄柏成分的样品的控制方法。本发明是通过下述技术方案实现的：本发明的一种黄柏对照提取物，所述提取物为黄色干燥粉末，其是由含重量百分比黄柏提取物67-84％和辅料16-33％组成，其中黄柏提取物中含有小檗碱不低于30％。进一步优选，本发明的一种黄柏对照提取物，其中小檗碱的含量≥34％。本发明所述的黄柏对照提取物采用薄层色谱法检测得到的色谱图中的小檗碱的荧光斑点和采用高效液相色谱法检测得到的色谱图在小檗碱位置处的色谱峰应分别与其对应的化学对照品或其对应的原料药材一致。本发明所述的黄柏对照提取物通过下述方法制备得到的：(1)黄柏干膏：取不同来源及批次的黄柏药材粉末用甲醇超声提取，滤过得滤液1；药渣再用甲醇超声提取1-3次，收集的1-3次滤液与滤液1混合、蒸干得到黄柏干膏；(2)黄柏提取物：黄柏干膏溶解于甲醇，再加入辅料蒸干研磨过筛即得黄柏提取物；(3)黄柏对照提取物：将不同来源或批次的黄柏提取物进行调配勾兑，得到黄柏对照提取物。上述步骤1中黄柏药材粉末与甲醇的重量体积比为1:8～1:50(优选1:8～1:20，优选1:10)；所述超声时间为30～60min，功率为100w～3kw(优选超声时间为30min，功率为500w)。步骤1中所述的过滤是用中速滤纸或者2000目筛网过滤。所述步骤2中甲醇用量为2-5倍干膏重量。所述步骤2中在黄柏干膏甲醇溶液中加入干膏重量的10％～60％(优选20-40％)的辅料；所述辅料包括但不限于：微粉硅胶、药用淀粉等.优选辅料为20-50％(优选40％)微粉硅胶，和/或10-30％(优选20％)药用淀粉。所述辅料填加能够保证提取物性状稳定、均匀且便于使用。步骤2中所述蒸干后研磨过筛是过90～200目(优选200目)筛网过滤。步骤3中所述的调配具体指：将不同来源或批次的黄柏提取物进行调配，应使最终的黄柏对照提取物中对应原药材比例为1：(2-5)(g/g)，(优选1：4g/g)，其中黄柏提取物中含有小檗碱不低于30％。进一步优选，本发明的一种黄柏对照提取物，其中小檗碱的含量≥34％。本发明在所述步骤2与步骤3之间还包括以薄层色谱法和/或高效液相色谱法对不同批次的黄柏提取物的小檗碱进行检测的步骤。为保证本发明的黄柏对照提取物的可靠性、成分一致性、均一性。优选在步骤(1)前增加不同药材来源的筛选步骤：将不同来源或批次的原料药材以薄层色谱法和/或高效液相色谱法进行检测；然后对不同来源或批次的原料药材的通过薄层色谱法和/或高效液相色谱法得到的色谱图和/或测定的含量进行比较分析，剔除色谱图和/或测定的含量异常的原料药材，保留色谱图和/或测定的含量一致的原料药材进行下一步的黄柏干膏的制备。本发明的黄柏对照提取物以单位剂量形式存在，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片、胶囊的每粒等，本发明的制剂包括但不限于片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的药物制剂，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。本发明的黄柏对照提取物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素c、edta二钠、edta钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β－环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。本发明的黄柏对照提取物还可以作为黄柏标准提取物，用于原料药使用或作为药物组合物的有效成分，其重量比为0.01-99.9％。本发明提供了黄柏对照提取物的制备方法步骤如下：见图4工艺流程图1、黄柏干膏：取不同来源及批次的黄柏药材粉末用甲醇超声提取，滤过得滤液1；药渣再用甲醇超声提取1-3次，收集的1-3次滤液与滤液1混合、蒸干得到黄柏干膏；2、黄柏提取物：黄柏干膏溶解于甲醇，再加入辅料蒸干研磨过筛即得黄柏提取物；3、黄柏提取物检测：以薄层色谱法和/或高效液相色谱法对不同批次的黄柏提取物的盐酸小檗碱进行检测的步骤；4、黄柏对照提取物：将检测后的黄柏提取物进行调配勾兑，得到黄柏对照提取物。上述步骤1中黄柏药材粉末与甲醇的重量体积比为1:8～1:50(优选1:10)；所述超声时间为30～60min，功率为100w～3kw(优选超声时间为30min，功率为500w)。步骤1中所述的过滤是用中速滤纸或者2000目筛网过滤。所述步骤2中甲醇用量为2-5倍干膏重量。所述步骤2中在黄柏干膏甲醇溶液中入干膏重量的10％～60％的辅料，所述辅料包括但不限于：微粉硅胶、药用淀粉等。进一步优选辅料为20-50％(优选40％)微粉硅胶，和/或10-30％(优选20％)药用淀粉。所述辅料填加能够保证提取物性状稳定、均匀且便于使用。所述步骤2中蒸干后研磨过筛是过90～200目(优选200目)筛网过滤。上述步骤3中所述的检测，其中黄柏提取物的薄层色谱法包括如下步骤：(1)化学对照品溶液：精密称取小檗碱，用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液；(2)黄柏提取物溶液：精密黄柏提取物用甲醇超声处理，定容，配成浓度为2.5mg/ml溶液，过0.22μm滤膜即得；(3)所述薄层色谱法检测条件为：薄层板：g60预制板；点样：0.5μl，条带状点样长10mm；展开剂：乙酸丁酯：甲醇：异丙醇：氨水＝5：2：1.5：1.2；展开方式：双槽展开缸，浓氨水试液预平衡，展开剂使用量：浓氨水使用量＝1：(1-2)薄层板的干燥：点样后的薄层板置于五氧化二磷真空干燥器，保证薄层板的干燥；检视:置于uv366nm下检视；优选本发明所述的展开剂展开方式，如果采用双槽展开缸(20cm*10cm)一侧加展开剂10ml，另一侧放置20ml浓氨水试液，如使用的展开槽的规格是10*10cm时，一侧加展开剂10ml，另一侧放置10ml浓氨水试液。其中黄柏提取物的高效液相色谱法包括如下步骤：(1)化学对照品溶液的制备：精密称取小檗碱，用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液；(2)黄柏提取物供试品溶液的制备：取黄柏提取物加入甲醇-盐酸(100：1)，超声处理，放冷，配制成浓度为0.24mg/ml的溶液，滤过，取续滤液，即得黄柏提取物溶液；(3)色谱条件：所述的高效液相色谱法检测条件：色谱仪器：高效液相色谱仪，配有dad检测器色谱柱：c18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：a-乙腈，b-含0.3％磷酸-0.3％三乙胺的水溶液1:1；梯度洗脱程序：0-25min：15％a→25％a，25-40min：25％a→28％a，40-50min：28％a；检测波长270nm(dad检测器)；流速0.8ml/min；进样量10μl；柱温25℃。(4)检测方法：精密黄柏提取物供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。上述步骤4所述的调配具体指：将不同来源或批次的黄柏提取物进行调配，应使最终的黄柏对照提取物中对应原药材比例为1：(2-5)，优选1：4(g/g)，其中黄柏提取物中含有小檗碱含量不低于30％。进一步优选，本发明的一种黄柏对照提取物，其中小檗碱的含量≥34％。本发明所述的调配标注中的各成分的含量的范围也是经过多次反复实验综合保持稳定性、一致性以及后面的应用等得出的最佳数据。本发明还提供了一种黄柏药材或中药制剂的鉴别方法，或黄柏或含黄柏有效成分的药材或中药制剂的质量控制方法，将上述制备得到的所述黄柏照提取物、待测样品以薄层色谱法和/或高效液相色谱法进行检测，对比判别。本发明的有益效果通过下述试验例阐述本发明的黄柏对照提取物的制备方法采用了粗提、精制、加辅料干燥、研磨过筛和调配的步骤，操作简便、重复性好且提取率高。用此制备方法制备得到的黄柏对照提取物因是多次或不同批次的提取物进行调配而成，克服了因中药对照药材受到产地、生长环境的影响，很难保证每一批的质量一致的缺陷，从而保证了不同批次的黄柏对照提取物的一致性；同时通过添加适当的溶剂，保证提取物与药材成分的一致性；选取具有代表性的药材作为原料，得到的产物具有代表性，作为对照提取物更能直观反映待检测药材的质量；通过添加辅料，保证提取物性状稳定、均匀且便于使用。采用本发明的黄柏对照提取物的制备方法最终得到的对照提取物中含有小檗碱不低于30％。进一步优选，小檗碱的含量≥34％。且对照提取物薄层色谱指纹图谱、hplc指纹图谱与药材对应一致；且与对照药材相比使用方便，对照提取物只需要简单的溶解即可使用而不需要繁琐的提取过程。本发明还提供了药材或中药制剂的鉴别方法，或黄柏或含黄柏/黄柏有效成分的药材或中药制剂的质量控制方法，不仅可以对药材或中药制剂进行定性鉴别，而且还可以用于半定量甚至定量分析。附图说明图1黄柏提取物物对照品tlc色谱图s：小檗碱；1-3：提取物对照品)图2黄柏药材及对照提取物tlc色谱图，1、2：黄柏-ers；3-14：黄柏药材图3黄柏提取物对照品hplc-dad色谱图(s：小檗碱)图4黄柏药材及对照提取物hplc-dad色谱图黄柏ers以及6批药材hplc图谱(蓝色为ers其他为药材)黄柏-ers为黄柏对照提取物图5是黄柏对照提取物的制备方法流程图。具体实施方式下面结合附图，对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。实施例1、本发明黄柏对照提取物代替对照药材的对比试验用薄层色谱法以及高效液相色谱法分别以化学对照品和黄柏对照提取物为参照物质对市售药材进行分析。1薄层色谱1.1样品制备化学对照品溶液：精密称取小檗碱，用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液；黄柏对照提取物溶液：精密称取实施例3制备得到的精密称取黄柏提取物对照品，加入甲醇超声提取15分钟，定容，配制成2.5mg/ml浓度的溶液，通过0.45μm滤膜，取滤液作为提取物对照品溶液。药材供试品溶液：取黄柏药材粉末(过二号筛)0.2g，加入甲醇20ml，超声提取30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。药店药材均买自广州，分别为：黄柏1-141.2薄层色谱检测检测条件如下：薄层板:tlcg60预制板(merck)点样:0.5μl，条带状点样长6mm。展开剂:乙酸丁酯：甲醇：异丙醇：氨水＝5：2：1.5：1.2展开方式：双槽展开缸(20cm*10cm)一侧加展开剂10ml，另一侧放置两个10ml小烧杯，各加入10ml浓氨水试液共同预平衡15分钟*展开剂使用量：浓氨水使用量＝1：2*每个10ml的小烧杯固定装样量为10ml浓氨水试液，则使用的展开槽的规格是10*10cm时，只需要放置一个10ml的小烧杯载样薄层板的干燥:点样后的薄层板置五氧化二磷真空干燥器2小时，保证薄层板的干燥。检视:置于uv366nm下检视。检测结果：如图1所示，为uv366nm下检视薄层色谱图(t：17℃，rh：37％)，图2为uv366nm下检视薄层色谱图(t：23℃，rh：65％)结果分析：由图1、2可知，盐酸小檗碱、黄柏对照提取物和药材(黄柏1-黄柏14)在同一位置都可以显示相同的斑点，从图谱看出黄柏对照提取物与药材(黄柏1-14)有高度的一致性。2高效液相色谱2.1样品制备化学对照品溶液：精密称取小檗碱5mg，用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液；黄柏对照提取物溶液：精密称取实施例3制备得到的黄柏对照提取，加入甲醇-盐酸(100：1的体积比)，超声(500w)处理30分钟，放冷，配制成浓度为0.24mg/ml的溶液，过0.22μm的滤膜，取续滤液，即得。药材供试品溶液：取黄柏药材粉末(过二号筛)0.2g，加入甲醇20ml，超声提取30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。药店药材均买自广州，分别为：黄柏1-6.2.2高效液相色谱检测高效液相色谱法检测条件如下：色谱仪器：安捷伦hplc1260高效液相色谱仪检测器：agilentdad检测器色谱柱：kromasil100-5c184.6*250mm，5μm。流动相：(a)乙腈；(b)0.3％磷酸-0.3％三乙胺(1：1)流动相梯度：黄柏对照提取物溶液的制备取黄柏对照提取物适量，精密称定，加入甲醇-盐酸(100：1)的混合溶液超声处理(功率250w，频率40khz)30分钟，放冷，配制成浓度为0.24mg/ml的溶液，过0.45um的滤膜，取续滤液，即得。参照物溶液的制备精密称取小檗碱对照品，用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液即可。药材供试品溶液取黄柏药材粉末(过二号筛)0.2g，加入甲醇20ml，超声提取30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。药店药材均买自广州，分别为：黄柏1-6。测定法分别精密吸取参照物溶液、对照提提取物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。供试品指纹图谱中应分别呈现相应的参照物色谱峰保留时间相同的色谱峰。高效液相色谱法检测结果：测定，记录色谱图，即得图3，s-小檗碱，图4所示的hplc指纹图谱叠加图，从下到上1-7分别对应黄柏1、黄柏2、黄柏3、黄柏4、黄柏5、黄柏6，ers对应黄柏对照提取物。表16批药材含量测定：％小檗碱rsd(n＝2)黄柏药材19.030.86黄柏药材29.570.17黄柏药材39.620.07黄柏药材410.730.31去皮川黄柏8.961.82带皮川黄柏(去皮后)6.970.13由图4可以看出，黄柏1-黄柏6药材的指纹图谱具有高度的一致性，由此建立黄柏药材的指纹图谱共有模式，利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.130723版本)计算，并对所有样品进行相似度分析。根据tlc及hplc指纹图谱的结果可知，对所述黄柏对照提取物采用薄层色谱法检测得到的色谱图与其对应的原料药材一致，更确切的说，对所述黄柏对照提取物采用薄层色谱法检测得到的色谱图中的盐酸小檗碱位置处的荧光斑点和采用高效液相色谱法检测得到的色谱图在盐酸小檗碱位置处的色谱峰分别与其对应的化学对照品或其对应的原料药材一致，因此本发明的黄柏对照提取物可应用于药材或中药制剂的定性鉴别，例如对药材或中药制剂的盐酸小檗碱成分进行定性分析。根据hplc测定结果以及统计分析，建立的黄柏药材指纹图谱共有模式与黄柏药材的相似度极高，而本发明的黄柏对照提取物和黄柏药材指纹图谱共有模式的相似度又极高，这说明使用本发明的黄柏对照提取物对药材或中药制剂进行盐酸小檗碱的含量测定可靠性极高，因此本发明的黄柏对照提取物可应用于药材或中药制剂的半定量鉴别分析，也可应用于黄柏及含黄柏/黄柏有效成分的药材或中药制剂的质量控制中，例如对药材或中药制剂的盐酸小檗碱成分进行半定量鉴别分析，或者对黄柏及含黄柏/黄柏有效成分的药材或中药制剂进行半定量检测进而控制其质量。实施例2黄柏对照提取物的性状分析1.表观状态：实施例3得到的黄柏对照提取物为黄色粉末。2.水分测定：按照2010版中国药典附录ixg(减压干燥法)进行。检测结果为黄柏对照提取物含水量为5.41％。3.一致性测试：按照实施例1的方法制备6批次黄柏对照提取物，经测定各批次小檗碱、的薄层色谱检测结果差异很小；经高效液相色谱检测其小檗碱含量均在调配标准范围之内。因此利用本发明的黄柏对照提取物的制备方法制备得到的黄柏对照提取物一致性非常好。4.稳定性测试：取10个不同批次的按照实施例1的方法制备的黄柏对照提取物的供试品，按照国家药典委员会制订的“国家药品标准物质研制技术要求”的相关规定，考察指标包括性状和溶解性。供试品开口置适宜的洁净容器中，60℃温度下放置10天，于第5天和第10天取样，按稳定性重点考察项目进行检测。结果显示，高温试验前后供试品性状无明显变化，高温试验前后薄层色谱图也无明显变化，溶出率测定结果用spss进行独立样本t-检验，计算结果p＞0.05，说明无显著性差异。实施例3黄柏对照提取物的制备仪器及试药：linomat5薄层色谱半自动点样仪、ats4薄层色谱全自动点样仪、薄层色谱双槽展开缸、chromatogramimmersiondeviceiii色谱显色用浸渍槽和tlcvisualizer薄层色谱摄像仪(瑞士，camag)。agilent1260series高效液相色谱仪，配有dad检测器(美国，agilenttechnologies)。甲醇、乙醇、异丙醇均为分析纯(天津大茂化学试剂厂)。甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、浓氨水和三乙胺均为分析纯(广州化学试剂厂)。盐酸小檗碱(也称小檗碱)，标示纯度均≥98％，(四川维克奇生物科技有限公司)；拟用于制备对照提取物的药材:黄柏。黄柏药材6批采购于广州各大药店及药材市场本实施例提供了本发明黄柏对照提取物的制备方法，其方法流程图如图5所示。一、提取选取黄柏药材制成粉末，药材粉末过二号筛(850±29μm，24目)，然后加入其质量10倍体积的的甲醇(即固液比为1：10(w/v))，超声(功率500w，常温)提取30min后中速定性滤纸过滤，收集滤渣1和滤液1，滤渣1按相同方法再次提取二次，并将再次提取二次收集的滤液与滤液1合并即为提取液，将提取液蒸干溶剂即得干膏。二、制备黄柏提取物用干膏2-5倍(重量体积比)的甲醇将干膏溶解完全后，再加干膏重量40％微粉硅胶和干膏重量20％药用淀粉，用旋转蒸发仪蒸干，粉碎过200目筛，得到黄柏提取物。三、提取物检测：制备6批黄柏提取物，按照试验例一的检测方法检测，检测结果如表2所示。表2黄柏提取物的成分含量表％小檗碱rsd(n＝4)黄柏对照提取物137.303.15黄柏对照提取物239.031.04黄柏对照提取物338.401.15黄柏对照提取物442.482.06去皮川黄柏37.312.50带皮川黄柏(去皮后)34.461.40四、调配将步骤三的6个批次的黄柏提取物按一定比例混合勾兑到黄柏对照提取物，调配标准为：最终产品对应原药材比例大约为1：4(g/g)，应使最终的黄柏对照提取物中小檗碱的含量≥30％，表3黄柏对照提取物中的成分含量当前第1页12