本发明属于检测技术领域，具体涉及一种特殊食品中牛磺酸的检测方法。
背景技术：
特殊食品是指为满足某些特殊人群的生理需要，或某些疾病患者的营养需要，按照特殊配方而专门加工的食品。
牛磺酸是一种特殊的氨基酸，海洋贝类中含量最为丰富，是人体必不可少的一种营养元素。它具有抗动脉粥样硬化，预防高血脂、脑血栓等作用。牛磺酸的含量占心脏中氨基酸的50%，对缺血的心肌细胞有明显的保护作用，抑制心律失常的发生，牛磺酸更是为病毒性心肌炎的治疗提供了新的方法。
现有技术中，张博等人提供了一种邻苯二甲醛-柱后衍生-高效液相色谱荧光法测定功能性饮料中的牛磺酸，具体反应原理如下：
该方法较国家标准提供的方法能够提高检测的灵敏度和选择性，但是其检出限仍有待提高，且功能饮料食品基质、成分单一，杂质少，对于特殊食品中的牛磺酸的检测无法适应。因此，寻求一种检出限低、准确性高且易控制的检测方法成为了亟待解决的问题。
技术实现要素：
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种特殊食品中牛磺酸的检测方法。
本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：
本发明提供了一种特殊食品中牛磺酸的检测方法，包括以下步骤：
（1）称取1.00g样品，加入25ml水和2-巯基乙醇溶液的混合液，旋涡混匀，超声10min，用盐酸调节试样溶液的ph值至1.7±0.1，放置2min后，再用naoh溶液调节试样溶液的ph值至4.5±0.1，用纯水定容至50ml，混匀，滤纸过滤，取清液过膜得上机液；
（2）上机液经过na离子氨基柱，进入独立的水解装置（内部保持95℃），与水解液混合，随后进入衍生盘管中，与衍生液充分混合，最终进入检测器检测。
进一步的，所述水和2-巯基乙醇溶液的体积比为24：1；所述2-巯基乙醇溶液的体积分数为5%。
进一步的，所述水解液为naoh水解液，浓度为0.05mol/l。
本发明所使用的水解液的配制方法为：称取1.00gnaoh，用500ml超纯水溶解，经0.45μm微孔滤膜过滤。
本发明所使用的衍生液的配制方法为：首先将110mgopa溶于50ml甲醇中，得溶液a；然后称取18g四硼酸纳溶于1000ml超纯水中，得溶液b；量取2-巯基乙醇与乙腈按1:1混合，得溶液c；将溶液a与b混合后，脱气抽滤，加入溶液c100μl，轻轻摇晃混匀即可。
进一步的，所述检测的参数为：色谱柱：sepaxna-np5，5μm，250mm×4.6mm；柱温：60℃；流速：0.4ml/min；水解液流速：0.35ml/min；衍生液流速：0.35ml/min；荧光检测器：激发波长：352nm；发射波长：452nm；进样量：10μl；流动相：98%柠檬酸三钠溶液-2%甲醇。
本发明所使用的流动相中，所述柠檬酸三钠溶液的配制方法为：称取19.6g柠檬酸三钠，加950ml水溶解，用硝酸调ph3.5，经0.45μm微孔滤膜过滤。
本发明所提供的邻苯二甲醛（opa）柱后衍生法：试样用水溶解，取上清液过滤膜上机检测。通过钠离子氨基酸分析柱分离，牛磺酸进入水解池利用naoh溶液在高温（95℃）使其水解成乙胺，然后乙胺与opa反应并有巯基乙醇（60℃）形成一个具有荧光的异氮（杂）茚基衍生物，荧光检测器检测。
本发明的有益效果为：
（1）本发明提供的方法，检出限低，重复性好，适应于基质、成分更加复杂的特殊食品；
（2）本发明方法简单，准确性高。
附图说明
图1为标样的柱后衍生谱图。
图2为圣元优博氨基酸代谢障碍婴儿配方粉的柱后衍生谱图。
图3为牛磺酸质控样（普通婴幼儿配方乳粉样品）色谱图。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步的解释和说明。
1、试剂
甲醇：色谱级
盐酸：分析纯
氢氧化钠：分析纯
硝酸：分析纯
柠檬酸三钠：分析纯
苯酚：分析纯
邻苯二甲醛（opa）:优级纯
2-巯基乙醇：优级纯
四硼酸纳：优级纯
乙腈：色谱纯
2、仪器和设备
waterse2695带fir和pda检测器
shimadzulc20a带水解池和荧光检测器
实施例1
1.1试剂配制
naoh水解液（0.05mol/l）：称取1.00gnaoh，用500ml超纯水溶解，经0.45μm微孔滤膜过滤。
opa衍生液：a:110mgopa溶于50ml甲醇中；b:称取18g四硼酸纳溶于1000ml超纯水中；c:2-巯基乙醇与乙腈按1:1混合液；a与b混合后，脱气抽滤，加c100μl，轻轻摇晃混匀。
柠檬酸三钠溶液（流动相）：称取19.6g柠檬酸三钠，加950ml水溶解，用磷酸调ph3.3，经0.45μm微孔滤膜过滤。
称取1.00g样品（圣元优博氨基酸代谢障碍婴儿配方粉：配料中含有l-丙氨酸等14种游离氨基酸），加入24ml温水和1ml体积分数为5%的疏基乙醇溶液的混合液，旋涡混匀，超声10min。用盐酸调节试样溶液的ph值至1.7±0.1，放置约2min后，再用naoh溶液（浓度为1mol/l）调节试样溶液的ph值至4.5±0.1，用纯水定容至50ml，混匀，滤纸过滤。取清液过膜上机。
1.3邻苯二甲醛（opa）柱后衍生
色谱柱：sepax，5μm，250mm×4.6mm
柱温：60℃
流速：0.4ml/min
水解液流速：0.35ml/min
衍生液流速：0.35ml/min
荧光检测器：激发波长：352nm；发射波长：452nm
进样量：10μl
流动相：98%柠檬酸三钠溶液-2%的甲醇。
具体检测结果如图2所示，图1为标准样品的色谱图，图3为牛磺酸质控样（普通婴幼儿配方乳粉样品）色谱图。
1.4定量方法
以峰面积定量，根据标准溶液得到试样待测液中牛磺酸的质量浓度，外标法定量。
（一）回收率
根据gb/t27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检验》的要求，结合实际检测样品中牛磺酸的含量，对样品进行三水平的加标测定，回收率在95%~105%之间，加标回收结果见下表：n=6，具体结果见表1。
表1
校准曲线
将浓度分别为0.05、0.1、0.5、1、5、10、25、50μg/ml的系列标准工作溶液分别进样10μl，得到牛磺酸组分的峰面积，以峰面积为纵坐标，以系列标准浓度为横坐标绘制标准曲线，呈良好的线性关系，线性相关系数r2=0.9999。
（二）精密度
对三个不同含量的样品分别进行6次独立测定，三个样品的精密度均小于10%，测定结果见表2。
表2
检出限：对空白样品进行20次的连续测定，以3倍空白值的标准偏差和校准曲线的斜率计算出方法的检出限为0.02mg/100g。
（三）准确度
根据gb/t27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检验》的要求，当被测组分的含量大于10-1000mg/kg时，偏差范围应小于15%。根据本方法对留样待测样品（理论含量42mg/100g）20次重复测定，测定结果的平均值为40.8g/100g，与理论值的相对偏差为2.9%，符合gb/t27404-2008的要求。
对比例1
1.1样品稀释后直接进样：称取1.00g样品（圣元优博氨基酸代谢障碍婴儿配方粉），加入25ml温水，旋涡混匀，超声10min，滤纸过滤，取清液过膜上机；
1.3邻苯二甲醛（opa）柱后衍生
色谱柱：agilentxdb-c18
柱温：60℃
流速：0.4ml/min
水解液流速：0.3ml/min
衍生液流速：0.3ml/min
荧光检测器：激发波长：330nm；发射波长：450nm
进样量：10μl
流动相：乙腈-水（20：80，v/v）。
由于牛磺酸经常添加在复杂食品基质中，例如添加了很多游离氨基酸物质的特殊医学配方食品中，本方法侧重于测量含有游离氨基酸的样品，因为游离氨基酸（如l-丙氨酸等）对牛磺酸的测量干扰很大，对比例1无法做到分离牛磺酸排除其他游离氨基酸等物质干扰，而实现准确检测。
对比例2
2.1称取1.00g样品（圣元优博氨基酸代谢障碍婴儿配方粉），加入25ml温水，旋涡混匀，超声10min。用盐酸调节试样溶液的ph值至1.7±0.1，放置约2min后，再用naoh溶液（浓度为1mol/l）调节试样溶液的ph值至4.5±0.1，用纯水定容至50ml，混匀，滤纸过滤。取清液过膜上机。
1.3邻苯二甲醛（opa）柱后衍生
色谱柱：sepaxna-np5，5μm，250mm×4.6mm
柱温：60℃
流速：0.4ml/min
水解液流速：0.3ml/min
衍生液流速：0.3ml/min
荧光检测器：激发波长：330nm；发射波长：450nm
进样量：10μl
流动相：100%柠檬酸三钠溶。
对空白样品进行20次的连续测定，以3倍空白值的标准偏差和校准曲线的斜率计算出方法的检出限为0.048mg/100g。且准确度降低。同时，发明人经过大量实验发现，当2-巯基乙醇的浓度过高或者过低时，其检出限均有所提高。