本发明属于新型纳米材料、免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的制备方法及应用，具体是采用二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料作为模拟酶来标记二抗，以三角形金纳米片作为基底材料来构建出一种夹心型免疫传感器，实现对前列腺特异性抗原的快速、灵敏的检测。
背景技术
前列腺癌(pca)是男性中第二常见的非皮肤癌(仅次于肺癌)，占所有新癌症的14%全世界男性病例。前列腺特异性抗原浓度的检测不仅可以用于对前列腺癌症的的诊断，还可以通过检测前列腺特异性抗原的含量以及量的变化来判断前列腺癌的性质以及状态，因此在医学上通过在血清中对前列腺特异性抗原进行定量检测，在前列腺癌的诊断、评估病变范围、预测评估疗效、监测复发等方面发挥着重要的作用，通过特异性和敏感性的生物标志物和分析工具进行早期的诊断，可以降低前列腺癌发生率，能有效的提高生存率。
电化学免疫传感器是基于抗原和抗体特异性结合的一种分析方法，具有检测迅速、检出限低、灵敏度高、操作简单和制备成本低的优点。近年来，电化学免疫传感器备受关注，被广泛应用于肿瘤标志物的检测中。本发明利用自组装技术，利用新型二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料作为模拟酶来标记二抗作为信号放大器，以三角形金纳米片作为基底材料，制备了一种夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器。新型二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料具有独特的结构，拥有大量的催化活性位点，对h2o2的还原表现出了优异的催化性，这种纳米复合材料不仅能充分发挥二硫化钼纳米花卓越的催化性能和比表面积大的特性，而且还能有效的利用中空核壳金银铂纳米立方体独特的催化性能、卓越的导电性能和良好的生物相容性，通过发挥这两种新型的纳米材料协同作用，二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料作为模拟酶来标记二抗作为信号放大器，以及三角形金纳米片作为基底材料展现出的优异的导电性能，都能有效提高免疫传感器的灵敏度。基于以上优点，所构建的夹心型免疫传感器实现了对前列腺特异性抗原的定量检测，具有检测范围广、检测下限低、灵敏度高、操作简单、检测速度快等优点，并且具有良好的重现性、稳定性和选择性，为前列腺癌的早期诊断提供了一种可靠的检测手段。
技术实现要素：
本发明提供了一种夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的制备方法及应用，所述电化学免疫传感器包括：工作电极、对电极和参比电极，所述工作电极的为玻碳电极，其表面依次修饰三角形金纳米片，前列腺特异性抗体，牛血清蛋白，前列腺特异性抗原，二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料孵化前列腺特异性抗体的二抗标记物，所述的参比电极为饱和甘汞电极，所述对电极为铂丝电极。
本发明的目的之一是提供一种夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的制备方法。
本发明的目的之二是将所制备的夹心型电化学免疫传感器用于前列腺特异性抗原的定量检测。
本发明的技术方案，包括以下步骤：
（1）制备三角形金纳米片；
（2）制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料；
（3）制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料孵化前列腺特异性抗体的二抗标记物；
（4）制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作电极；
（5）制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作曲线。
其中步骤（1）制备三角形金纳米片包括：
①制备金种子溶液
将25.0µl~30.0µl、50.0mmol/l氯金酸溶液加入到4.0~5.0ml、0.1mol/l十六烷基三甲基氯化铵溶液中，然后将200.0~300.0µl、10.0mmol/l硼氢化钠在持续搅拌下滴加到上述溶液中，在室温的条件下反应2h，得到金种子溶液；
②制备三角形金纳米片
首先分别配制a、b两种溶液：a溶液为将40.0µl、50.0mmol/l氯金酸溶液和15.0µl、10.0mmol/l的碘化钠溶液加入到8.0ml、0.1mol/l的十六烷基三甲基氯化铵溶液中；b溶液为将500.0µl、50.0mmol/l氯金酸溶液和300.0µl、10.0mmol/l的碘化钠溶液加入到40.0ml、0.1mol/l的十六烷基三甲基氯化铵溶液中；分别将40.0~60.0µl和400.0~600.0µl、0.1mol/l抗坏血酸溶液加入到a、b溶液中，然后将100.0µl~200.0µl稀释10倍的金种子溶液加入到a溶液中反应1s后，迅速将3.0~4.0ml的a溶液加入到b溶液搅拌十几秒，然后在室温条件下静置1~3h，最终离心、清洗3次，得到三角形金纳米片。
其中步骤（2）制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料包括：
①制备中空核壳金银铂纳米立方体
将10.0µl、25.0mmol/l的氯金酸加入到10.0ml、75.0mmol/l十六烷基三甲基氯化铵溶液中，然后滴加0.6ml、10.0mmol/l硼氢化钠溶液，室温条件下反应2h，得到金种子溶液。然后将0.1~0.3ml、10.0mmol/l氯金酸溶液和2.0~4.0ml、0.2mol/l十六烷基三甲基氯化铵溶液加入到25.0ml去离子水中，将1.5~2.5ml、0.1mol/l抗坏血酸加入到上述溶液反应十几秒，然后加入0.3~0.5ml稀释100倍的金种子溶液，室温静置8h之后，将0.5~1.0ml、10.0mmol/l硝酸银和2.0~4.0ml、0.1mol/l抗坏血酸溶液加入到上述溶液，放在50℃水浴锅中静置12h，得到金银纳米立方胶体溶液。取4.0~6.0ml金银纳米立方胶体溶液，在油浴锅中持续搅拌加热回流到100℃，15min后将200.0~400.0µl、5.0mmol/l氯铂酸溶液滴加到溶液中，持续搅拌反应15min，冷却、离心、清洗3次，得到中空核壳金银铂纳米立方体；
②制备二硫化钼纳米花
将1.2~1.6g钼酸铵加入到15.0ml去离子水中，然后将0.8~1.0g乙二胺加入上述溶液中，超声溶解之后，加入适量1.0mol/l的盐酸调节ph到4.0~6.0，在50℃条件下反应2h,离心清洗3次，在50℃环境下真空干燥，得到钼酸铵和乙二胺的配合物；取0.1~0.2g钼酸铵和乙二胺的配合物加入到15.0ml去离子水中，然后加入0.2~0.4gl-半胱氨酸，超声分散，放入25.0ml聚四氟乙烯内衬的高压反应釜，加热到200℃，保温14h，最终离心清洗3次，真空干燥得到二硫化钼纳米花；
③制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料
将0.1~0.2g二硫化钼纳米花超声分散到20.0ml无水乙醇中，在油浴锅中回流加热到100℃，然后加入20.0~30.0μl3-氨丙基三乙氧基硅烷,反应2h之后，冷却，离心，清洗3次，冷冻干燥得到氨基化的二硫化钼纳米花；将2.0~4.0ml、2.0mg/ml中空核壳金银铂纳米立方体加入到2.0ml、2.0mg/ml的氨基化的二硫化钼纳米花，超声分散1h,在室温环境下，震荡6h，离心清洗2次，得到二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料。
其中步骤（3）制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料孵化前列腺特异性抗体的二抗标记物包括：
①将2.0~4.0ml、10.0µg/ml前列腺特异性抗体加入到2.0ml、2.0mg/ml二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料中，在4℃环境下震荡12h，离心清洗分散在磷酸缓冲溶液中。
其中步骤（4）制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作电极包括：
①将直径为3.0~5.0mm的玻碳电极用al2o3抛光粉抛光成镜面，分别依次在无水乙醇、超纯水中超声清洗；
②将6.0µl、0.5~3.0mg/ml的三角形金纳米片分散液滴加到电极表面上，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，在室温下晾干；
③继续将6.0µl、4.0~8.0µg/ml的前列腺特异性抗体滴加到电极表面，在4℃冰箱中干燥；
④然后将3.0µl、0.7~1.4wt%的牛血清白蛋白溶液滴加到电极表面，用以封闭非特异性活性位点，用ph为7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；
⑤滴加6.0µl、0.00005~100.0ng/ml的一系列不同浓度的前列腺特异性抗原溶液，用ph为7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，在4℃冰箱中晾干；
⑥将6.0µl、2.0~4.0mg/ml二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料孵化前列腺特异性抗体的二抗标记物滴加到电极表面，用ph为7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，在4℃冰箱中晾干，制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作电极。
其中步骤（5）制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作曲线包括：
①使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的传感器为工作电极，在10.0ml、50.0mmol/l的ph为5.3~8.0的磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
②用时间-电流法对分析物进行检测，输入电压为-0.4v，取样间隔0.1s，运行时间200s；
③当背景电流趋于稳定后，向10.0ml、50.0mmol/l的ph为7.4的磷酸盐缓冲溶液中注入10.0~15.0µl、5.0mol/l的双氧水溶液，记录不同浓度下前列腺特异性抗原所对应的电流值，绘制检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作曲线；
④利用工作曲线法，得到待测样品中前列腺特异性抗原的浓度。
本发明所用的原材料均可在化学试剂公司或生物制药公司购买。
本发明的有益成果
（1）本发明通过新型二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料作为模拟酶来标记二抗作为信号放大器，二硫化钼纳米花和中空核壳金银铂纳米立方体具有独特的结构，拥有大量的催化活性位点，对h2o2的还原表现出了优异的催化性，所制备的新型二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料能够充分发挥协同效应，展现出优异的催化性能、导电性能和生物相容性，以及三角形金纳米片作为基底材料具有优异的导电性能，都能有效地提高传感器的灵敏度，所构建的夹心型免疫传感器实现了对前列腺特异性抗原的定量检测，具有检测范围广、检测下限低、灵敏度高、操作简单、检测速度快等优点，并且具有良好的重现性、稳定性和选择性，为的早期诊断提供了一种可靠的检测手段；
（2）本发明所构建的夹心型电化学免疫传感器实现了精确定量检测前列腺特异性抗原的目的，其线性检测范围是0.00005ng/ml~100ng/ml，最低检测下限为16.6fg/ml；
（3）本发明的方法构建的电化学免疫传感器，操作简单、检测迅速，可用于实际样品的快速检测。
具体实施方式
现将本发明通过具体实施方式进一步说明，但不限于此。
实施例1制备三角形金纳米片包括：
①制备金种子溶液
将25.0µl、50.0mmol/l氯金酸溶液加入到4.0ml、0.1mol/l十六烷基三甲基氯化铵溶液中，然后将200.0µl、10.0mmol/l硼氢化钠在持续搅拌下滴加到上述溶液中，在室温的条件下反应2h，得到金种子溶液；
②制备三角形金纳米片
首先分别配制a、b两种溶液：a溶液为将40.0µl、50.0mmol/l氯金酸溶液和15.0µl、10.0mmol/l的碘化钠溶液加入到8.0ml、0.1mol/l的十六烷基三甲基氯化铵溶液中；b溶液为将500.0µl、50.0mmol/l氯金酸溶液和300.0µl、10.0mmol/l的碘化钠溶液加入到40.0ml、0.1mol/l的十六烷基三甲基氯化铵溶液中；分别将40.0µl和400.0µl、0.1mol/l抗坏血酸溶液加入到a、b溶液中，然后将100.0µl稀释10倍的金种子溶液加入到a溶液中反应1s后，迅速将3.0ml的a溶液加入到b溶液搅拌十几秒，然后在室温条件下静置1h，最终离心、清洗3次，得到三角形金纳米片。
实施例2制备三角形金纳米片包括：
①制备金种子溶液
将27.5µl、50.0mmol/l氯金酸溶液加入到4.5ml、0.1mol/l十六烷基三甲基氯化铵溶液中，然后将250.0µl、10.0mmol/l硼氢化钠在持续搅拌下滴加到上述溶液中，在室温的条件下反应2h，得到金种子溶液；
②制备三角形金纳米片
首先分别配制a、b两种溶液：a溶液为将40.0µl、50.0mmol/l氯金酸溶液和15.0µl、10.0mmol/l的碘化钠溶液加入到8.0ml、0.1mol/l的十六烷基三甲基氯化铵溶液中；b溶液为将500.0µl、50.0mmol/l氯金酸溶液和300.0µl、10.0mmol/l的碘化钠溶液加入到40.0ml、0.1mol/l的十六烷基三甲基氯化铵溶液中；分别将50.0µl和500.0µl、0.1mol/l抗坏血酸溶液加入到a、b溶液中，然后将250.0µl稀释10倍的金种子溶液加入到a溶液中反应1s后，迅速将3.5ml的a溶液加入到b溶液搅拌十几秒，然后在室温条件下静置2h，最终离心、清洗3次，得到三角形金纳米片。
实施例3制备三角形金纳米片包括：
①制备金种子溶液
将30.0µl、50.0mmol/l氯金酸溶液加入到5.0ml、0.1mol/l十六烷基三甲基氯化铵溶液中，然后将300.0µl、10.0mmol/l硼氢化钠在持续搅拌下滴加到上述溶液中，在室温的条件下反应2h，得到金种子溶液；
②制备三角形金纳米片
首先分别配制a、b两种溶液：a溶液为将40.0µl、50.0mmol/l氯金酸溶液和15.0µl、10.0mmol/l的碘化钠溶液加入到8.0ml、0.1mol/l的十六烷基三甲基氯化铵溶液中；b溶液为将500.0µl、50.0mmol/l氯金酸溶液和300.0µl、10.0mmol/l的碘化钠溶液加入到40.0ml、0.1mol/l的十六烷基三甲基氯化铵溶液中；分别将60.0µl和600.0µl、0.1mol/l抗坏血酸溶液加入到a、b溶液中，然后将200.0µl稀释10倍的金种子溶液加入到a溶液中反应1s后，迅速将4.0ml的a溶液加入到b溶液搅拌十几秒，然后在室温条件下静置3h，最终离心、清洗3次，得到三角形金纳米片。
实施例4制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料包括：
①制备中空核壳金银铂纳米立方体
将10.0µl、25.0mmol/l的氯金酸加入到10.0ml、75.0mmol/l十六烷基三甲基氯化铵溶液中，然后滴加0.6ml、10.0mmol/l硼氢化钠溶液，室温条件下反应2h，得到金种子溶液。然后将0.1ml、10.0mmol/l氯金酸溶液和2.0ml、0.2mol/l十六烷基三甲基氯化铵溶液加入到25.0ml去离子水中，将1.5ml、0.1mol/l抗坏血酸加入到上述溶液反应十几秒，然后加入0.3ml稀释100倍的金种子溶液，室温静置8h之后，将0.5ml、10mmol/l硝酸银和2.0ml、0.1mol/l抗坏血酸溶液加入到上述溶液，放在50℃水浴锅中静置12h，得到金银纳米立方胶体溶液。取4.0ml金银纳米立方胶体溶液，在油浴锅中持续搅拌加热回流到100℃，15min后将200.0µl、5.0mmol/l氯铂酸溶液滴加到溶液中，持续搅拌反应15min，冷却、离心、清洗3次，得到中空核壳金银铂纳米立方体；
②制备二硫化钼纳米花
将1.2g钼酸铵加入到15.0ml去离子水中，然后将0.8g乙二胺加入上述溶液中，超声溶解之后，加入适量1.0mol/l的盐酸调节ph到4.0，在50℃条件下反应2h,离心清洗3次，在50℃环境下真空干燥，得到钼酸铵和乙二胺的配合物；
取0.1g钼酸铵和乙二胺的配合物加入到15.0ml去离子水中，然后加入0.2gl-半胱氨酸，超声分散，放入25.0ml聚四氟乙烯内衬的高压反应釜，加热到200℃，保温14h，最终离心清洗3次，真空干燥得到二硫化钼纳米花；
③制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料
将0.1g二硫化钼纳米花超声分散到20.0ml无水乙醇中，在油浴锅中回流加热到100℃，然后加入20.0µl3-氨丙基三乙氧基硅烷,反应2h之后，冷却，离心，清洗3次，冷冻干燥得到氨基化的二硫化钼纳米花；
将2.0ml、2.0mg/ml中空核壳金银铂纳米立方体加入到2.0ml、2.0mg/ml的氨基化的二硫化钼纳米花，超声分散1h,在室温环境下，震荡6h，离心清洗2次，得到二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料。
实施例5制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料包括：
①制备中空核壳金银铂纳米立方体
将10.0µl、25.0mmol/l的氯金酸加入到10.0ml、75.0mmol/l十六烷基三甲基氯化铵溶液中，然后滴加0.6ml、10.0mmol/l硼氢化钠溶液，室温条件下反应2h，得到金种子溶液。然后将0.2ml、10.0mmol/l氯金酸溶液和3.0ml、0.2mol/l十六烷基三甲基氯化铵溶液加入到25.0ml去离子水中，将2.0ml、0.1mol/l抗坏血酸加入到上述溶液反应十几秒，然后加入0.4ml稀释100倍的金种子溶液，室温静置8h之后，将0.75ml、10.0mmol/l硝酸银和3.0ml、0.1mol/l抗坏血酸溶液加入到上述溶液，放在50℃水浴锅中静置12h，得到金银纳米立方胶体溶液。取5.0ml金银纳米立方胶体溶液，在油浴锅中持续搅拌加热回流到100℃，15min后将300.0µl、5.0mmol/l氯铂酸溶液滴加到溶液中，持续搅拌反应15min，冷却、离心、清洗3次，得到中空核壳金银铂纳米立方体；
②制备二硫化钼纳米花
将1.4g钼酸铵加入到15.0ml去离子水中，然后将0.9g乙二胺加入上述溶液中，超声溶解之后，加入适量1.0mol/l的盐酸调节ph到5.0，在50℃条件下反应2h,离心清洗3次，在50℃环境下真空干燥，得到钼酸铵和乙二胺的配合物；取0.15g钼酸铵和乙二胺的配合物加入到15.0ml去离子水中，然后加入0.3gl-半胱氨酸，超声分散，放入25.0ml聚四氟乙烯内衬的高压反应釜，加热到200℃，保温14h，最终离心清洗3次，真空干燥得到二硫化钼纳米花；
③制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料
将0.15g二硫化钼纳米花超声分散到20.0ml无水乙醇中，在油浴锅中回流加热到100℃，然后加入25.0µl3-氨丙基三乙氧基硅烷,反应2h之后，冷却，离心，清洗3次，冷冻干燥得到氨基化的二硫化钼纳米花；将3.0ml、2.0mg/ml中空核壳金银铂纳米立方体加入到2.0ml、2.0mg/ml的氨基化的二硫化钼纳米花，超声分散1h,在室温环境下，震荡6h，离心清洗2次，得到二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料。
实施例6制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料包括：
①制备中空核壳金银铂纳米立方体
将10.0µl、25.0mmol/l的氯金酸加入到10.0ml、75.0mmol/l十六烷基三甲基氯化铵溶液中，然后滴加0.6ml、10.0mmol/l硼氢化钠溶液，室温条件下反应2h，得到金种子溶液。然后将0.3ml、10.0mmol/l氯金酸溶液和4.0ml、0.2mol/l十六烷基三甲基氯化铵溶液加入到25.0ml去离子水中，将2.5ml、0.1mol/l抗坏血酸加入到上述溶液反应十几秒，然后加入0.5ml稀释100倍的金种子溶液，室温静置8h之后，将1.0ml、10.0mmol/l硝酸银和4.0ml、0.1mol/l抗坏血酸溶液加入到上述溶液，放在50℃水浴锅中静置12h，得到金银纳米立方胶体溶液。取6.0ml金银纳米立方胶体溶液，在油浴锅中持续搅拌加热回流到100℃，15min后将400.0µl、5.0mmol/l氯铂酸溶液滴加到溶液中，持续搅拌反应15min，冷却、离心、清洗三次，得到中空核壳金银铂纳米立方体；
②制备二硫化钼纳米花
将1.6g钼酸铵加入到15.0ml去离子水中，然后将1.0g乙二胺加入上述溶液中，超声溶解之后，加入适量1.0mol/l的盐酸调节ph到6.0，在50℃条件下反应2h,离心清洗3次，在50℃环境下真空干燥，得到钼酸铵和乙二胺的配合物；取0.2g钼酸铵和乙二胺的配合物加入到15.0ml去离子水中，然后加入0.4gl-半胱氨酸，超声分散，放入25.0ml聚四氟乙烯内衬的高压反应釜，加热到200℃，保温14h，最终离心清洗3次，真空干燥得到二硫化钼纳米花；
③制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料
将0.2g二硫化钼纳米花超声分散到20.0ml无水乙醇中，在油浴锅中回流加热到100℃，然后加入30.0µl3-氨丙基三乙氧基硅烷,反应2h之后，冷却，离心，清洗3次，冷冻干燥得到氨基化的二硫化钼纳米花；将4.0ml、2.0mg/ml中空核壳金银铂纳米立方体加入到2.0ml、2.0mg/ml的氨基化的二硫化钼纳米花，超声分散1h,在室温环境下，震荡6h，离心清洗2次，得到二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料。
实施例7制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料孵化前列腺特异性抗体的二抗标记物包括：
①将2.0ml、10.0µg/ml前列腺特异性抗体加入到2.0ml、2.0mg/ml二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料中，在4℃环境下震荡12h，离心清洗分散在磷酸盐缓冲溶液中。
实施例8制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体纳米复合材料孵化前列腺特异性抗体的二抗标记物包括：
①将3.0ml、10.0µg/ml前列腺特异性抗体加入到2.0ml、2.0mg/ml二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料中，在4℃环境下震荡12h，离心清洗分散在磷酸盐缓冲溶液中。
实施例9制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料孵化前列腺特异性抗体的二抗标记物包括：
①将4.0ml、10.0µg/ml前列腺特异性抗体加入到2.0ml、2.0mg/ml二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料中，在4℃环境下震荡12h，离心清洗分散在磷酸盐缓冲溶液中。
实施例10制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作电极包括：
①将直径为3.0mm的玻碳电极用al2o3抛光粉抛光成镜面，分别依次在无水乙醇、超纯水中超声清洗；
②将6.0µl、0.5mg/ml的三角形金纳米片分散液滴加到电极表面上，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，在室温下晾干；
③继续将6.0µl、4.0µg/ml的前列腺特异性抗体滴加到电极表面，在4℃冰箱中干燥；
④然后将3.0µl、0.7wt%的牛血清白蛋白溶液滴加到电极表面，用以封闭非特异性活性位点，用ph为7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；
⑤滴加6.0µl、0.00005~100.0ng/ml的一系列不同浓度的前列腺特异性抗原溶液，用ph为7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，在4℃冰箱中晾干；
⑥将6.0µl、2.0mg/ml二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料孵化前列腺特异性抗体的二抗标记物滴加到电极表面，用ph为7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，在4℃冰箱中晾干，制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作电极。
实施例11制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作电极包括：
①将直径为4.0mm的玻碳电极用al2o3抛光粉抛光成镜面，分别依次在无水乙醇、超纯水中超声清洗；
②将6.0µl、2.0mg/ml的三角形金纳米片分散液滴加到电极表面上，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，在室温下晾干；
③继续将6.0µl、6.0µg/ml的前列腺特异性抗体滴加到电极表面，在4℃冰箱中干燥；
④然后将3.0µl、1.0wt%的牛血清白蛋白溶液滴加到电极表面，用以封闭非特异性活性位点，用ph为7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；
⑤滴加6.0µl、0.00005~100.0ng/ml的一系列不同浓度的前列腺特异性抗原溶液，用ph为7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，在4℃冰箱中晾干；
⑥将6.0µl、3.0mg/ml二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料孵化前列腺特异性抗体的二抗标记物滴加到电极表面，用ph为7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，在4℃冰箱中晾干，制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作电极。
实施例12制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作电极包括：
①将直径为5.0mm的玻碳电极用al2o3抛光粉抛光成镜面，分别依次在无水乙醇、超纯水中超声清洗；
②将6.0µl、3.0mg/ml的三角形金纳米片分散液滴加到电极表面上，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，在室温下晾干；
③继续将6.0µl、8.0µg/ml的前列腺特异性抗体滴加到电极表面，在4℃冰箱中干燥；
④然后将3.0µl、1.4wt%的牛血清白蛋白溶液滴加到电极表面，用以封闭非特异性活性位点，用ph为7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；
⑤滴加6.0µl、0.00005~100.0ng/ml的一系列不同浓度的前列腺特异性抗原溶液，用ph为7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，在4℃冰箱中晾干；
⑥将6.0µl、4.0mg/ml二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料孵化前列腺特异性抗体的二抗标记物滴加到电极表面，用ph为7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，在4℃冰箱中晾干，制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作电极。
实施例13制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作曲线包括：
①使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的传感器为工作电极，在10.0ml、50.0mmol/l的ph为5.3的磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
②用时间-电流法对分析物进行检测，输入电压为-0.4v，取样间隔0.1s，运行时间200s；
③当背景电流趋于稳定后，向10.0ml、50.0mmol/l的ph为5.3的磷酸盐缓冲溶液中注入10.0µl、5.0mol/l的双氧水溶液，记录不同浓度下前列腺特异性抗原所对应的电流值，绘制检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作曲线；
④利用工作曲线法，得到待测样品中前列腺特异性抗原的浓度。
实施例14制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作曲线包括：
①使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的传感器为工作电极，在10.0ml、50.0mmol/l的ph为7.4的磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
②用时间-电流法对分析物进行检测，输入电压为-0.4v，取样间隔0.1s，运行时间200s；
③当背景电流趋于稳定后，向10.0ml、50.0mmol/l的ph为6.8的磷酸盐缓冲溶液中注入13.0µl、5.0mol/l的双氧水溶液，记录不同浓度下前列腺特异性抗原所对应的电流值，绘制检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作曲线；
④利用工作曲线法，得到待测样品中前列腺特异性抗原的浓度。
实施例15制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作曲线包括：
①使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的传感器为工作电极，在10.0ml、50.0mmol/l的ph为8.0的磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
②用时间-电流法对分析物进行检测，输入电压为-0.4v，取样间隔0.1s，运行时间200s；
③当背景电流趋于稳定后，向10.0ml、50.0mmol/l的ph为7.4的磷酸盐缓冲溶液中注入15.0µl、5.0mol/l的双氧水溶液，记录不同浓度下前列腺特异性抗原所对应的电流值，绘制检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作曲线；
④利用工作曲线法，得到待测样品中前列腺特异性抗原的浓度。
实施例16制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作曲线包括：
①使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的传感器为工作电极，在10.0ml、50.0mmol/l的ph为8.0的磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
②用时间-电流法对分析物进行检测，输入电压为-0.4v，取样间隔0.1s，运行时间200s；
③当背景电流趋于稳定后，向10.0ml、50.0mmol/l的ph为8.0的磷酸盐缓冲溶液中注入15.0µl、5.0mol/l的双氧水溶液，记录不同浓度下前列腺特异性抗原所对应的电流值，绘制检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作曲线；
④利用工作曲线法，得到待测样品中前列腺特异性抗原的浓度。