抗毒升白合剂的质量检测方法与流程

本发明涉及医药检测领域。更具体地说，本发明涉及一种抗毒升白合剂的质量检测方法。

背景技术

越来越多的科学家将目光投向天然药物及中医药、民族医药，期待从天然药物及中医药、民族医药中开发出有效的抗肿瘤药物。中医药文化博大精深，源远流长，为中华民族的繁衍和繁荣做出了重大贡献。中药通过提高机体免疫系统功能，诱导肿瘤细胞凋亡，影响细胞周期，降低血液黏度，逆转肿瘤多药耐药而发挥治疗恶性肿瘤的作用，不论在减轻临床症状，提高生存质量，延长生存期，防止复发转移，还是与放化疗配合，增效减毒等方面均效果显著。

抗毒升白合剂是由黄芪、白术、当归、丹参、茯苓、五味子、补骨脂、鹿胶、枸杞、红参、枳实、阿胶、龟胶、炙甘草、淫羊藿、鸡血藤等多味药材经科学方法提取配制而成，该方是具有广西民族特色的辅助抗肿瘤验方，具有扶正祛邪、减毒增效的作用，尤其在减轻临床症状，提高患者生活质量，辅助放化疗治疗方面具有很好的效果。但是目前抗毒升白合剂的使用缺乏相应的质量控制方法和标准，产品质量有待提高。

技术实现要素：

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种定性鉴别抗毒升白合剂中是否含有效成分的抗毒升白合剂的质量检测方法。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种抗毒升白合剂的质量检测方法，定性检测抗毒升白合剂中是否含有辛弗林、黄芪甲苷、淫羊藿苷及补骨脂、异补骨脂素。

优选的是，抗毒升白合剂中辛弗林的检测方法包括以下步骤：

s1、取辛弗林对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5～0.8mg辛弗林的对照品溶液；

s2、取抗毒升白合剂5～10ml置于蒸发皿中，水浴蒸干，残渣用4～10ml质量分数为60％的甲醇溶液溶解，作为供试品溶液；

s3、取不含枳实原料的抗毒升白合剂5～10ml，按供试品溶液的制备方法制得枳实阴性对照溶液；

s4、照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液、供试品溶液及枳实阴性对照溶液各2～10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以体积比为10：4：0.5的氯仿-甲醇-氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％茚三酮乙醇溶液，加热至105℃使斑点显色清晰，在供试品色谱中与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的斑点。

优选的是，抗毒升白合剂中黄芪甲苷的检测方法包括以下步骤：

s1、取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.6～1.0mg黄芪甲苷的对照品溶液；

s2、取抗毒升白合剂5～10ml，加氯仿10ml，超声处理30分钟，氯仿层弃去，水层蒸干，残渣加水10ml溶解，用水饱和正丁醇萃取两次，每次水饱和正丁醇的用量为10ml，合并两次的水饱和正丁醇萃取液，加三倍氨试液，振摇，静置分层，取上层蒸干，得到的固体用0.5～1ml甲醇溶解，作为供试品溶液；

s3、取不含黄芪原料的抗毒升白合剂5～10ml，按供试品溶液的制备方法制得黄芪阴性对照溶液；

s4、照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液、供试品溶液及黄芪阴性对照溶液各2～10μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以体积比为13：7：2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至105℃使斑点显色清晰，在供试品色谱中与对照品色谱相对应的位置上，在日光下显相同的棕褐色斑点，在波长为365nm的紫外光灯下显相同的橙黄色荧光斑点。

优选的是，抗毒升白合剂中淫羊藿苷的检测方法包括以下步骤：

s1、取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg淫羊藿苷的对照品溶液；

s2、取抗毒升白合剂10ml，用乙酸乙酯萃取两次，每次乙酸乙酯的用量为20ml，合并两次的乙酸乙酯萃取液，蒸干，残渣加5ml甲醇溶解，作为供试品溶液；

s3、取不含淫羊藿原料的抗毒升白合剂10ml，按供试品溶液的制备方法制得淫羊藿阴性对照溶液；

s4、照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液、供试品溶液及淫羊藿阴性对照溶液各5μl，分别点于同一硅胶h薄层板上，以体积比为10：1：1：1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在供试品色谱中与对照品色谱相对应的位置上，在波长为365nm的紫外光灯下显相同的荧光斑点。

优选的是，抗毒升白合剂中补骨脂和异补骨脂素的检测方法包括以下步骤：

s1、取补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml含补骨脂素和异补骨脂素各2mg的对照品溶液；

s2、取抗毒升白合剂10ml，用乙酸乙酯萃取两次，每次乙酸乙酯的用量为20ml，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干，残渣加2ml甲醇溶解，作为供试品溶液；

s3、取不含补骨脂原料的抗毒升白合剂10ml，按供试品溶液的制备方法制得补骨脂阴性对照溶液；

s4、照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液、供试品溶液及补骨脂阴性对照溶液各5μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以体积比为8：3的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，在供试品色谱中与对照品色谱相对应的位置上，在波长为365nm的紫外光灯下显相同的荧光斑点。

优选的是，薄层色谱法试验所用的展开装置包括：

玻璃块体，其上表面中部开设有一矩形凹槽，所述凹槽的底面倾斜，所述凹槽底面靠近最高边缘处设置有相互间隔且位于相同高度的多个半球形凸起，相邻两半球形凸起的间距小于薄层板宽度，所述玻璃块体正对所述凹槽底面最高边缘的侧壁上开设有一矩形孔，所述矩形孔的宽度与所述凹槽底面最高边缘的宽度相同，所述矩形孔水平延伸至与所述凹槽连通，所述矩形孔中设置有一用于搁置薄层板的水平托板，所述托板的宽度略小于所述矩形孔的宽度，所述托板的长度与所述矩形孔的长度相同，所述托板的下板面连接有一水平的转轴，所述转轴一端转动连接在所述矩形孔的侧壁，所述转轴的另一端从所述矩形孔的另一侧壁穿出至所述玻璃块体外，所述玻璃块体的上表面还开设有多个毛细管插孔，多个毛细管插孔均贯穿至所述矩形孔的顶面，且多个毛细管插孔沿与所述凹槽底面最高边缘对应的上边缘平行的直线布置，该直线与所述凹槽底面最高边缘对应的上边缘的间距为1cm，所述玻璃块体的上表面还开设有一展开液注入孔，所述展开液注入孔包括连通的竖直部分和倾斜部分，所述展开液注入孔的倾斜部分末端设置于所述凹槽靠近底面最低边缘的侧壁上，且与所述凹槽连通；

其中所述凹槽的上端口边缘开设有一环形沉槽，所述环形沉槽内设置有与覆盖所述环形沉槽和所述凹槽的顶盖，所述毛细管插孔和展开液注入孔上端均可拆卸连接有胶塞。

优选的是，所述矩形槽顶面靠近所述多个毛细管插孔部分设置有电热丝。

优选的是，所述环形沉槽的底面、所述顶盖底面与所述环形沉槽底面接触的部分均设置为毛玻璃。

本发明至少包括以下有益效果：采用本发明提供的薄层色谱鉴别方法和材料，对抗毒升白合剂进行定性检测，专属性强，稳定性好，可以用于抗毒升白合剂产品的质量控制。

本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

附图说明

图1为本发明所述抗毒升白合剂中辛弗林的薄层色谱图：其中序号1为辛弗林对照品溶液，序号2～11为抗毒升白合剂供试品溶液，序号12为枳实阴性对照溶液；

图2为本发明所述抗毒升白合剂中黄芪甲苷的薄层色谱图(日光显色)：其中序号1为黄芪甲苷对照品溶液，序号2～11为抗毒升白合剂供试品溶液，序号12为黄芪阴性对照溶液；

图3为本发明所述抗毒升白合剂中黄芪甲苷的薄层色谱图(365nm荧光显色)：其中序号1为黄芪甲苷对照品溶液，序号2～11为抗毒升白合剂供试品溶液，序号12为黄芪阴性对照溶液；

图4为本发明所述抗毒升白合剂中淫羊藿苷的薄层色谱图(365nm荧光显色)结果图：其中序号1为淫羊藿苷对照品溶液；序号2～11为抗毒升白合剂供试品溶液；序号12为淫羊藿阴性对照溶液；

图5为本发明所述抗毒升白合剂中补骨脂素和异补骨脂素的薄层色谱图(365nm荧光显色)：其中序号1为补骨脂素(b)和异补骨脂素(a)对照品溶液；序号2～11为抗毒升白合剂供试品溶液；序号12为补骨脂阴性对照溶液；

图6为本发明其中一实施例所述展开装置的剖面图；

图7为本发明其中一实施例所述展开装置的结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得；在本发明的描述中，术语“横向”、“纵向”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，并不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。

<实施例1>

利用薄层色谱法对抗毒升白合剂中的有效成分进行定性检测，按照以下步骤进行：

1.仪器与材料

(1)仪器与试药

仪器：万分之一电子分析天平(型号为cp114，奥豪斯仪器上海有限公司)；暗箱式四用紫外分析仪(型号为zf一8，上海嘉鹏科技有限公司)；硅胶g薄层板(批号为20160707，规格100×200mm)；硅胶gf254薄层板(批号为20161116，规格100×200mm)；硅胶h薄层板(批号为20160802，规格100×200mm)均购于青岛海洋化工有限公司。

试剂：薄层色谱用试剂均为分析纯；水为超纯水。

补骨脂素对照品(批号为17010603)、异补骨脂素对照品(批号为16100812)，购于成都康邦生物科技有限公司；黄芪甲苷对照品(批号为wkq16042601)、辛弗林对照品(批号为wkq16071502)，购于北京普博斯生物科技有限公司；淫羊藿苷对照品(批号为must-16111710)，购于中科院成都生物研究所。

(2)供试样品

抗毒升白合剂，广西药用植物园制药厂提供，批号：20160901、20160902、20160903、20160904、20160905、20160906、20160907、20160908、20160909、20160910。

2.方法与结果

(1)抗毒升白合剂中辛弗林的薄层色谱鉴别方法：

辛弗林对照品溶液的制备：准确称取辛弗林对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

抗毒升白合剂供试品溶液制备：取抗毒升白合剂溶液10ml置于蒸发皿中，水浴蒸干，残渣用10ml60％甲醇溶解，作为供试品溶液；

阴性对照溶液的制备：按抗毒升白合剂的制备工艺制备原料中不含枳实的阴性抗毒升白制剂，依供试品溶液的制备方法制备枳实阴性对照溶液；

薄层层析检查：照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以氯仿-甲醇-氨水(10：4：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％茚三酮乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，如图1所示。

(2)抗毒神白合剂中黄芪甲苷的薄层色谱鉴别方法：

黄芪甲苷对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液；

抗毒升白合剂供试品溶液制备：取抗毒升白合剂溶液10ml，加氯仿10ml，超声处理30分钟，氯仿层弃去，水层蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和正丁醇20ml萃取两次，每次10ml，滤液合并，加三倍氨试液，振摇，静置分层，取上层蒸干，固体用1ml甲醇溶解，作为供试品溶液；

阴性对照溶液的制备：按抗毒升白合剂的制备工艺制备原料中不含黄芪的阴性抗毒升白制剂，依供试品溶液的制备方法制备黄芪阴性对照溶液；

薄层层析检查：照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13：7：2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点，紫外光灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点，如图2和图3所示。

(3)抗毒升白合剂中淫羊藿苷的薄层色谱鉴别方法：

淫羊藿苷对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；

抗毒升白合剂供试品溶液制备：取抗毒升白合剂溶液10ml，用乙酸乙酯萃取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干，残渣加5ml甲醇使溶解，作为供试品溶液；

阴性对照溶液的制备：按抗毒升白合剂的制备工艺制备原料中不含淫羊藿的阴性抗毒升白制剂，依供试品溶液的制备方法制备淫羊藿阴性对照溶液；

薄层层析检查：照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶h薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10:1:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视，显相同的颜荧光斑点，如图4所示。

(4)抗毒升白合剂中补骨脂、异补骨脂素的薄层色谱鉴别方法：

补骨脂素、异补骨脂素对照品溶液的制备：取补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。

抗毒升白合剂供试品溶液制备：取抗毒升白合剂溶液10ml，用乙酸乙酯萃取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干，残渣加2ml甲醇使溶解，作为供试品溶液。

阴性对照溶液的制备：按抗毒升白合剂制备工艺制备原料中不含补骨脂的阴性抗毒升白制剂，依供试品溶液的制备方法制备补骨脂阴性对照溶液。

薄层层析检查：照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(8:3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，如图5所示。

本发明提供的抗毒升白合剂的质量检测方法，可以对抗毒升白合剂中辛弗林、黄芪甲苷、淫羊藿苷、补骨脂素及异补骨脂素进行鉴别检查，可为产品提供可靠、准确且操作简单的质量控制方法，确保产品的质量和疗效，保证患者用药安全。

<实施例2>

本实施例所用的仪器和材料及试验方法基本与实施例1相同，区别在于，本实施例在进行薄层色谱试验时使用一种展开装置，如图6和图7所示，其包括：

玻璃块体1，其上表面中部开设有一矩形凹槽2，所述凹槽2的底面倾斜，所述凹槽2底面靠近最高边缘处设置有相互间隔且位于相同高度的多个半球形凸起3，相邻两半球形凸起3的间距小于薄层板宽度，所述玻璃块体1正对所述凹槽2底面最高边缘的侧壁上开设有一矩形孔4，所述矩形孔4的宽度与所述凹槽2底面最高边缘的宽度相同，所述矩形孔4水平延伸至与所述凹槽2连通，所述矩形孔4中设置有一用于搁置薄层板的水平托板5，所述托板5的宽度略小于所述矩形孔4的宽度，所述托板5的长度与所述矩形孔4的长度相同，所述托板5的下板面连接有一水平的转轴6，所述转轴6一端转动连接在所述矩形孔4的侧壁，所述转轴6的另一端从所述矩形孔4的另一侧壁穿出至所述玻璃块体1外，所述玻璃块体1的上表面还开设有多个毛细管插孔7，多个毛细管插孔7均贯穿至所述矩形孔4的顶面，且多个毛细管插孔7沿与所述凹槽2底面最高边缘对应的上边缘平行的直线布置，该直线与所述凹槽2底面最高边缘对应的上边缘的间距为1cm，所述玻璃块体1的上表面还开设有一展开液注入孔8，所述展开液注入孔8包括连通的竖直部分和倾斜部分，所述展开液注入孔8的倾斜部分末端设置于所述凹槽2靠近底面最低边缘的侧壁上，且与所述凹槽2连通；

其中所述凹槽2的上端口边缘开设有一环形沉槽，所述环形沉槽内设置有与覆盖所述环形沉槽和所述凹槽2的顶盖9，所述毛细管插孔和展开液注入孔上端均可拆卸连接有胶塞。

理想的是半球形凸起3的半径较小，当转轴6转动使托板5向凹槽2方向倾斜，薄层板沿着托板5滑到凹槽2底面时，薄层板下端在未与凹槽2底面接触时已经越过半球形凸起3，半球形凸起3不会对薄层板的移动造成阻碍。

上述实施例在使用过程中，先将薄层板插入矩形孔4中，搁置于所述托板5上，再将吸有待测液的毛细管插入正对薄层板的毛细管插孔7内，并在薄层板上滴下一定量的待测液，等待测液干固在薄层板上后，转动转轴6使托板5向凹槽2方向倾斜，托板5如同倾斜的门板关闭住矩形孔4，避免外界空气进入凹槽2内，也避免展开剂从矩形孔4挥发，造成展开剂组成成分比例以及展开剂极性发生改变，同时薄层板会沿着托板5滑到凹槽2底面，再从展开液注入孔8注入调制好的展开液，并控制展开液的用量，使液面位于薄层板上沾有待测液位置的下方，因为半球形凸起3能使薄层板上端被托起，不与凹槽底面接触，避免了薄层板与凹槽底面接触产生的边缘效应，也方便工作人员在实验后从凹槽中取出薄层板，从玻璃块体1外观察展开液的展开情况，当展开液展开至接近薄层板顶端即可打开顶盖9，拿出薄层板。由于上述实施例在较密闭的环境下进行点样并在与外界环境无接触的情况下进行薄层板转移，较好的避免了现有技术中点样和转移过程可能带来的待测样品被污染的情况发生，提高了薄层色谱法检测精度，另外，由于凹槽2底部倾斜，展开剂只用在凹槽2一侧达到相应液面高度即可，不用铺满整个凹槽2底面，因而可以减少展开剂用量，节约成本。

在另一实施例中，所述矩形槽顶面靠近所述多个毛细管插孔7部分设置有电热丝，这样能加快待测液在薄层板表面干固的过程，节约时间。

在另一实施例中，所述环形沉槽的底面、所述顶盖9底面与所述环形沉槽底面接触的部分均设置为毛玻璃，这样能确保顶盖9与环形沉槽之间的密封性，减少灰层等空气中的杂质对薄层色谱试验结果的干扰，也避免展开剂挥发，造成展开剂组成成分比例以及展开剂极性发生改变。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。