六味地黄胶囊近红外定量校正模型的构建方法及检测方法与流程

本发明涉及近红外检测领域，特别涉及六味地黄胶囊近红外定量校正模型的构建方法及检测方法。
背景技术：
：六味地黄方由中药熟地黄、山药、酒萸肉、泽泻、牡丹皮、茯苓组成，是中医“滋补阴肾”的经典名方。该品种应用广泛，由该方开发而来的剂型众多，其中六味地黄胶囊，以吸收迅速，生物利用度高，服用量少等特点而周知。用于肾阴亏损、头晕耳鸣、腰膝酸软、骨蒸潮热、盗汗遗精、消渴等。六味地黄胶囊因其组方药物众多，成分复杂，制药工艺繁琐，其多成分质量控制难度较大。近红外(nir)光谱技术作为一种快速无损的绿色分析技术，具有快速分析、样品处理简单、无需消耗试剂等特点。近年来，近红外光谱技术作为一种间接分析技术，已经陆续用于药效成分的含量测定、制药过程的在线检测和监控、天然药物鉴别、中药材的产地鉴别等。将近红外光谱技术应用于六味地黄胶囊的质量快速检测，从而保证产品质量的安全性、稳定性和有效性，达到快速、高效质量控制的目的。目前，主要是采用高效液相色谱法增加对某种单一成分含量测定的方法来提高六味地黄胶囊的质量标准。但是传统高效液相色谱法检测耗时耗力、样品处理复杂、成本高。因此，提供一种新的方法对六味地黄胶囊进行快速含量测定具有重要的现实意义。技术实现要素：有鉴于此，本发明提供一种六味地黄胶囊近红外定量校正模型的构建方法及检测方法。该方法快速分析、样品处理简单、无需消耗试剂、绿色环保。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：本发明提供了一种六味地黄胶囊近红外定量校正模型的构建方法，取六味地黄胶囊内容物，以马钱苷、莫诺苷、芍药苷、丹皮酚、毛蕊花糖苷、熊果酸和水分作为关键质控指标，分别经高效液相色谱检测和近红外光谱检测，获得相应的高效液相色谱检测结果和近红外光谱结果，经偏最小二乘法获得六味地黄胶囊近红外定量校正模型。在本发明的一些具体实施方案中，马钱苷、莫诺苷、芍药苷、丹皮酚含量采用高效液相色谱法测定，所述高效液相色谱的条件为：检测波长为210～300nm；流速为0.5～1.5ml/min；柱温为20～40℃；色谱柱为c18色谱柱；以乙腈为流动相a，以0.05～0.5％磷酸溶液为流动相b，按如下梯度进行洗脱：在本发明的一些具体实施方案中，对照品溶液的制备方法为：取马钱苷、莫诺苷、丹皮酚、芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含马钱苷200μg、莫诺苷60μg、芍药苷20μg、丹皮酚500μg的溶液，即得。在本发明的一些具体实施方案中，供试品溶液的制备方法为：精密称取本品内容物0.5-10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30-80％甲醇5-100ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率50khz)20-60分钟，放冷，再称定重量，用适当浓度甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。在本发明的一些具体实施方案中，毛蕊花糖苷含量采用高效液相色谱法测定，所述高效液相色谱的条件为：检测波长为280～350nm；流速为0.5～1.5ml/min；柱温为20～40℃；色谱柱(c18)为ace-c18-hl(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈-0.2％磷酸溶液(16：84)为流动相。在本发明的一些具体实施方案中，对照品溶液的制备方法为：取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加30～80％甲醇制成每1ml含毛蕊花糖苷50μg的溶液，即得。在本发明的一些具体实施方案中，供试品溶液的制备方法为：精密称取本品内容物0.5-10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30-80％甲醇5-100ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率50khz)20-60分钟，放冷，再称定重量，用适当浓度甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。在本发明的一些具体实施方案中，供试品溶液的制备方法为：精密称取本品内容物2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇10ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率50khz)30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。在本发明的一些具体实施方案中，熊果酸含量采用高效液相色谱法测定，所述高效液相色谱的条件为：检测波长为200～260nm；流速为0.5～1.5ml/min；柱温为20～40℃；优选的，检测波长为215nm；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；色谱柱(c18)为ace-c18-hl(250mm×4.6mm，5μm)；以甲醇-0.2％磷酸溶液(89:11)为流动相。在本发明的一些具体实施方案中，对照品溶液的制备方法为：取熊果酸对照品适量，精密称定，加30～80％甲醇(优选70％甲醇)制成每1ml含熊果酸60μg的溶液，即得。在本发明的一些具体实施方案中，供试品溶液的制备方法为：精密称取本品内容物0.5-10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30-80％甲醇5-100ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率50khz)20-60分钟，放冷，再称定重量，用适当浓度甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。在本发明的一些具体实施方案中，供试品溶液的制备方法为：精密称取本品内容物2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇10ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率50khz)30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。在本发明的一些具体实施方案中，水分含量测定采用烘干法(参照2015版《中国药典》四部通则0832第二法)进行水分含量测定。在本发明的一些具体实施方案中，所述近红外光谱检测包括光谱采集、光谱预处理的步骤；所述光谱采集为：取六味地黄胶囊内容物，在25℃±5℃条件下，采用漫反射内置光源采集近红外光谱，以空气为参比背景，扫描次数为200～400，光谱范围1100～2300nm，波长增量1～2nm。在本发明的一些具体实施方案中，所述光谱预处理为：采用一阶导数九点平滑法对原始光谱进行预处理。在本发明的一些具体实施方案中，所述获得六味地黄胶囊近红外定量校正模型具体为：采用偏最小二乘法、交叉-验证法，利用unscrambler定量分析软件，将预处理后光谱数据与样品hplc含量数据关联，建立各指标的定量校正模型。在本发明的一些具体实施方案中，马钱苷近红外定量校正模型中，内部验证直线方程为y＝0.9127x+0.0107，外部验证直线方程为y＝0.9021x+0.0120，其中x为化验值，y为预测值，内部验证决定系数r2＝0.9553，外部验证决定系数r2＝0.9453，rmsec＝0.4622，rmsep＝0.3728；莫诺苷近红外定量校正模型中，内部验证直线方程为y＝0.9716x+0.0040，外部验证直线方程为y＝0.8949x+0.0144，其中x为化验值，y为预测值，内部验证决定系数r2＝0.9857，外部验证决定系数r2＝0.9540，rmsec＝0.5378，rmsep＝0.5822；丹皮酚近红外定量校正模型中，内部验证直线方程为y＝0.9541x+0.0010，外部验证直线方程为y＝0.9610x+0.0030，其中x为化验值，y为预测值，内部验证决定系数r2＝0.9768，外部验证决定系数r2＝0.9513，rmsec＝0.4721，rmsep＝0.2633；芍药苷近红外定量校正模型中，内部验证直线方程为y＝0.9297x+0.0433，外部验证直线方程为y＝0.8579x+0.0867，其中x为化验值，y为预测值，内部验证决定系数r2＝0.9642，外部验证决定系数r2＝0.9535，rmsec＝0.2885，rmsep＝0.6349；熊果酸近红外定量校正模型中，内部验证直线方程为y＝0.9755x+0.3777，外部验证直线方程为y＝0.7519x+3.8389，其中x为化验值，y为预测值，内部验证决定系数r2＝0.9877，外部验证决定系数r2＝0.9373，rmsec＝0.2934，rmsep＝0.1867；毛蕊花糖苷近红外定量校正模型中，内部验证直线方程为y＝0.9835x+0.0506，外部验证直线方程为y＝0.8188x+0.5525，其中x为化验值，y为预测值，内部验证决定系数r2＝0.9917，外部验证决定系数r2＝0.9656，rmsec＝0.1054，rmsep＝0.3115；水分近红外定量校正模型中，内部验证直线方程为y＝0.8326x+0.6958，外部验证直线方程为y＝0.9679x+0.9599，其中x为化验值，y为预测值，内部验证决定系数r2＝0.9124，外部验证决定系数r2＝0.9514，rmsec＝0.0377，rmsep＝0.2069。在上述技术方案的基础上，本发明还提供了一种六味地黄胶囊的检测方法，按照所述的构建方法获得六味地黄胶囊近红外定量校正模型，将六味地黄胶囊待测样品的近红外光谱数据导入所述六味地黄胶囊近红外定量校正模型，获得所述待测样品中马钱苷、莫诺苷、芍药苷、丹皮酚、毛蕊花糖苷、熊果酸和水分的含量。本发明构建的模型预测精度高，准确度高，满足实际生产中定量分析的要求；该方法与传统药典方法相比，在保证准确度的基础上，大大提高了分析效率，可以快速、高效地对产品质量进行控制，从而有利于保证产品质量的安全性、稳定性和有效性。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示六味地黄胶囊马钱苷、莫诺苷、丹皮酚、芍药苷对照品hplc图；图2示六味地黄胶囊马钱苷、莫诺苷、丹皮酚、芍药苷样品hplc图；图3示六味地黄胶囊熊果酸对照品hplc图；图4示六味地黄胶囊熊果酸样品hplc图；图5示六味地黄胶囊毛蕊花糖苷对照品hplc图；图6示六味地黄胶囊毛蕊花糖苷样品hplc图；图7示六味地黄胶囊样品nir原始光谱；图8示六味地黄胶囊样品预处理nir光谱；图9示六味地黄胶囊马钱苷含量nir建模结果；图10示六味地黄胶囊莫诺苷含量nir建模结果；图11示六味地黄胶囊丹皮酚含量nir建模结果；图12示六味地黄胶囊芍药苷含量nir建模结果；图13示六味地黄胶囊熊果酸含量nir建模结果；图14示六味地黄胶囊毛蕊花糖苷含量nir建模结果；图15示六味地黄胶囊水分含量nir建模结果。具体实施方式本发明公开了一种六味地黄胶囊近红外定量校正模型的构建方法及检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本发明提供了一种六味地黄胶囊快速检测方法，包括如下步骤：(1)采集不同生产批次的六味地黄胶囊内容物；(2)测定六味地黄胶囊中的关键质控指标：选取马钱苷、莫诺苷、芍药苷、丹皮酚、毛蕊花糖苷、熊果酸含量和水分含量作为六味地黄胶囊的关键质控指标；(3)采集六味地黄胶囊近红外光谱数据；(4)选择合适的近红外光谱建模波段和近红外原始光谱预处理方法；(5)建立六味地黄胶囊中各关键质控指标的近红外定量校正模型：应用化学计量学软件将所得到的近红外光谱信息和参比方法所测得的标准值进行关联，建立近红外光谱和关键质控指标之间的定量校正模型；(6)测定待测的六味地黄胶囊样品的近红外光谱数据，导入步骤(5)所述定量校正模型，经模型计算得到待测样品中马钱苷、莫诺苷、芍药苷、丹皮酚、毛蕊花糖苷、熊果酸含量和水分含量。作为优选，步骤(2)中所述马钱苷、莫诺苷、芍药苷、丹皮酚含量采用高效液相色谱法测定：其中液相色谱条件为：检测波长为210-300nm；流速为0.5-1.5ml/min；柱温为20-40℃；agilent-zobax(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱；以乙腈为流动相a，以0.05-0.5％磷酸溶液为流动相b，按如下梯度进行梯度洗脱。对照品溶液的制备：取马钱苷、莫诺苷、丹皮酚、芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含马钱苷、莫诺苷、芍药苷、丹皮酚的溶液，即得。供试品溶液的制备：精密称取本品内容物0.5-10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30-80％甲醇5-100ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率50khz)20-60分钟，放冷，再称定重量，用适当浓度甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。毛蕊花糖苷含量测定：色谱条件：：检测波长为280～350nm；流速为0.5～1.5ml/min；柱温为20～40℃；优选的，检测波长为334nm；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；色谱柱(c18)为ace-c18-hl(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈-0.2％磷酸溶液(16：84)为流动相。对照品溶液的制备：取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加30～80％甲醇(优选70％甲醇)制成每1ml含毛蕊花糖苷50μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：精密称取本品内容物0.5-10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30-80％甲醇5-100ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率50khz)20-60分钟，放冷，再称定重量，用适当浓度甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。优选的，精密称取本品内容物2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇10ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率50khz)30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20(优选10)μl，注入液相色谱仪，测定，即得。熊果酸含量测定色谱条件：检测波长为200～260nm；流速为0.5～1.5ml/min；柱温为20～40℃；优选的，检测波长为215nm；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；色谱柱(c18)为ace-c18-hl(250mm×4.6mm，5μm)；以甲醇-0.2％磷酸溶液(89:11)为流动相。对照品溶液的制备：取熊果酸对照品适量，精密称定，加30～80％甲醇(优选70％甲醇)制成每1ml含熊果酸60μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：精密称取本品内容物0.5-10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30-80％甲醇5-100ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率50khz)20-60分钟，放冷，再称定重量，用适当浓度甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。优选的，精密称取本品内容物2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇10ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率50khz)30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20(优选10μl)，注入液相色谱仪，测定，即得。水分含量测定：采用烘干法(参照2015版《中国药典》四部通则0832第二法)进行水分含量测定。作为优选，所述步骤(3)和(4)通过以下步骤采集近红外光谱数据：称取六味地黄胶囊粉末，在室温条件下，采用漫反射内置光源采集近红外光谱，以空气为参比背景，扫描次数为200～400，扫描光谱范围为1100～2300nm，波长增量1nm-2nm。作为优选，所述步骤(5)通过以下步骤建立近红外光谱模型：将经过预处理后的光谱数据与样品hplc含量数据关联，采用pls(偏最小二乘法)进行模型计算，验证方式为交叉-验证，模型经过异常值的剔除进行逐步优化，最后得到了较为理想的校正模型。本发明所建立的模型预测精度高，准确度高，满足实际生产中定量分析的要求；该方法与传统药典方法相比，在保证准确度的基础上，大大提高了分析效率，可以快速、高效地对产品质量进行控制，从而有利于保证产品质量的安全性、稳定性和有效性。仪器与试药：仪器：高效液相色谱仪(戴安ultimate3000)；声光可调近红外光谱分析仪(brimroseluminar-5030)；电热鼓风干燥箱(上海市仪器总厂101a-2)；色谱柱：acec18(250mm×4.6mm，5μm)、agilentc18(250mm×4.6mm，5μm)；万分之一电子天平(梅特勒me204e)；十万分之一电子天平(梅特勒ab135-s)，超声清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司sb-1200d)。试药：乙腈、甲醇(色谱级，fisher)；水(娃哈哈纯净水)；甲醇(批号20160402)、乙醇(批号20160326)、磷酸(批号20160508)，均购自北京化工厂；对照品：毛蕊花糖苷(批号111530-201512)、马钱苷(批号111640-201606)、莫诺苷(批号111998-201602)、熊果酸(批号110742-201421)、丹皮酚(批号110708-201407)、芍药苷(110736-201640)均购于中国食品药品检定研究。六味地黄胶囊成品：近三年内生产的六味地黄胶囊成品(留样)80批次，均由修正药业集团股份有限公司提供。本发明提供的六味地黄胶囊近红外定量校正模型的构建方法及检测方法中所用原料及试剂均可由市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本发明：实施例1马钱苷、莫诺苷、芍药苷、丹皮酚含量测定色谱条件与系统适用性试验：检测波长为240nm；流速为1.0ml/min；柱温为35℃；agilent-zobax(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱；以乙腈为流动相a，以0.2％磷酸溶液为流动相b，按下表中的规定进行梯度洗脱。表1梯度程序表时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0～155→1095→9015～2510→2090→8025～3520→3580→6535～5535→7565→2555～6575→525→95对照品溶液的制备：取马钱苷、莫诺苷、丹皮酚、芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含马钱苷200μg、莫诺苷60μg、芍药苷20μg、丹皮酚500μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：精密称取本品内容物2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇10ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率50khz)30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。实施例2毛蕊花糖苷含量测定色谱条件与系统适用性试验检测波长为334nm；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；色谱柱(c18)为ace-c18-hl(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈-0.2％磷酸溶液(16：84)为流动相。对照品溶液的制备：取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成每1ml含毛蕊花糖苷50μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：精密称取本品内容物2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇10ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率50khz)30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注人液相色谱仪，测定，即得。实施例3熊果酸含量测定色谱条件与系统适用性试验检测波长为215nm；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；色谱柱(c18)为ace-c18-hl(250mm×4.6mm，5μm)；以甲醇-0.2％磷酸溶液(89:11)为流动相。对照品溶液的制备：取熊果酸对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成每1ml含熊果酸60μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：精密称取本品内容物2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇10ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率50khz)30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注人液相色谱仪，测定，即得。实施例4水分含量测定采用烘干法(参照2015版《中国药典》四部通则0832第二法)进行水分含量测定。实施例5nir光谱采集、预处理将所收集的80批次六味地黄胶囊分别取约10g，置于光谱采集皿中，在1100～2300nm范围内扫描，波长增量2.0nm，每批次样品扫描3次。得到nir原始光谱图。近红外光谱区主要的信号由c-h、n-h、o-h等含氢基团的倍频和合频吸收峰组成，虽然其吸收峰的特性强，受分子内外环境影响较小，但该谱区由于吸收系数较低，且官能团易重叠，容易形成宽峰等原因，故需选用合适的处理方法对光谱进行预处理，用来消除噪音和基线漂移等因素对光谱采集的影响。实施例6nir校正模型的建立采用偏最小二乘法、交叉-验证法，利用unscrambler定量分析软件，将预处理后光谱数据与样品含量数据关联，建立各指标的定量校正模型。采用光谱影响值leverage和化学值误差residual等统计量检验，剔除nir光谱与各指标测定结果的异常值，并根据模型主要参数：内外部验证决定系数(r2)、校正均方根偏差(rmsec)、预测均方根偏差(rmsep)等，进行筛选选优化，确定各指标nir校正模型。各指标含量检测结果六味地黄胶囊各指标含量测定结果见表2，hplc图见图1-6。表2六味地黄胶囊各指标检测结果注：鉴于企业留样产品保密性，仅以序号编排各批次样品光谱采集及预处理：取建模样品，平行采集3次光谱，得到六味地黄胶囊样品nir原始总光谱图，见图7。采用一阶导数九点平滑法对原始光谱进行预处理，消除噪音和基线漂移等对光谱信息的影响，预处理光谱见图8。模型建立：随机抽取10批次样品，作为验证样品备用，其余批次样品进行建模研究。采用六味地黄胶囊样品各指标测定结果与预处理后的nir光谱相结合，unscrambler定量分析软件，以偏最小二乘法(pls)和交叉-验证法(cross-validation)建立各指标校正模型。采用光谱影响值leverage和化学值误差residual等统计量检验，剔除nir光谱与各指标测定结果的异常值，并根据模型主要参数：内外部验证决定系数(r2)、校正标准偏差(rmsec)、预测标准偏差(rmsep)等，进行模型质量评价。具体计算公式如下：式中，yi,actual为第i样本参考方法的测定值；为校正集或验证集所有样本参考方法测定值的平均值；yi,predicted为校正集或验证集预测过程中第i样本的预测值；n为校正集或验证集的样本数。r越接近1，回归应越好。式中，yi,actual为第i样本参考方法的测定值；yi,predicted为用所建立模型对校正集中第i样本的预测值；n为校正集的样本数。rmsec值越小越好。式中，yi,actual为第i样本参考方法的测定值；yi,predicted为验证集预测过程中第i样本的光谱方法预测值；m为验证集的样本数。rmsep值越小越好，rmsec应小于rmsep值。所建立的六味地黄胶囊样品各指标nir模型，见图9-图15。实验结果：nir光谱模型显示，六味地黄胶囊马钱苷nir模型中，内部验证直线方程为y＝0.9127x+0.0107，外部验证直线方程为y＝0.9021x+0.0120，其中x为化验值，y为预测值，内部验证决定系数r2＝0.9553，外部验证决定系数r2＝0.9453，rmsec＝0.4622，rmsep＝0.3728；六味地黄胶囊莫诺苷nir模型中，内部验证直线方程为y＝0.9716x+0.0040，外部验证直线方程为y＝0.8949x+0.0144，其中x为化验值，y为预测值，内部验证决定系数r2＝0.9857，外部验证决定系数r2＝0.9540，rmsec＝0.5378，rmsep＝0.5822；六味地黄胶囊丹皮酚nir模型中，内部验证直线方程为y＝0.9541x+0.0010，外部验证直线方程为y＝0.9610x+0.0030，其中x为化验值，y为预测值，内部验证决定系数r2＝0.9768，外部验证决定系数r2＝0.9513，rmsec＝0.4721，rmsep＝0.2633；六味地黄胶囊芍药苷nir模型中，内部验证直线方程为y＝0.9297x+0.0433，外部验证直线方程为y＝0.8579x+0.0867，其中x为化验值，y为预测值，内部验证决定系数r2＝0.9642，外部验证决定系数r2＝0.9535，rmsec＝0.2885，rmsep＝0.6349；六味地黄胶囊熊果酸nir模型中，内部验证直线方程为y＝0.9755x+0.3777，外部验证直线方程为y＝0.7519x+3.8389，其中x为化验值，y为预测值，内部验证决定系数r2＝0.9877，外部验证决定系数r2＝0.9373，rmsec＝0.2934，rmsep＝0.1867；六味地黄胶囊毛蕊花糖苷nir模型中，内部验证直线方程为y＝0.9835x+0.0506，外部验证直线方程为y＝0.8188x+0.5525，其中x为化验值，y为预测值，内部验证决定系数r2＝0.9917，外部验证决定系数r2＝0.9656，rmsec＝0.1054，rmsep＝0.3115；六味地黄胶囊水分nir模型中，内部验证直线方程为y＝0.8326x+0.6958，外部验证直线方程为y＝0.9679x+0.9599，其中x为化验值，y为预测值，内部验证决定系数r2＝0.9124，外部验证决定系数r2＝0.9514，rmsec＝0.0377，rmsep＝0.2069。上述参数表明，参与建模的六味地黄胶囊样品各指标含量与其nir光谱相关性较好，所建立的nir检测模型性能良好。实施例7nir校正模型的验证利用已建立的各指标模型，随机抽取已参与建模的样品和未参与建模的验证集样品进行分析，获得各指标的预测结果(外部验证)，计算预测值与实测值偏差，验证模型准确性。偏差值计算公式如下：利用各指标nir检测模型，对未参与建模的10批次样品进行分析，各指标的预测结果见表3。表3六味地黄胶囊nir模型验证结果结果可知，10批次验证样品中马钱苷、莫诺苷、丹皮酚、芍药苷、熊果酸、毛蕊花糖苷的预测值与hplc实测值偏差平均值分别为6.04％、7.14％、5.87％、6.97％、6.25％，各指标偏差均值小于10％；水分的预测值与实测值分别偏差平均值为4.83％，偏差值小于5％。由此可见，各指标nir检测模型预侧值与常规检测方法测定值之间相关性良好，测定准确性较高，可以采用nir光谱模型快速检测分析六味地黄胶囊成品制剂中的马钱苷、莫诺苷、丹皮酚、芍药苷、熊果酸、毛蕊花糖苷、水分的含量。实施例8传统高效液相色谱法检测(耗时耗力、样品处理复杂、成本高)与nir快速测定对比表如下：表4注：*示与传统方法相比具有显著差异(p＜0.05)，#示与传统方法相比具有极显著差异(p＜0.01)。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12