一种兽用帕伐醌注射液中帕伐醌的含量测定方法与流程

本发明涉及分析化学领域，尤其是一种兽用帕伐醌注射液中帕伐醌的含量测定方法。
背景技术：
帕伐醌的化学名称为2-环已基-3羟基-1，4-萘醌，是一种新型的抗牛的焦虫病的药物，牛泰勒焦虫病是泰勒科泰勒属的各种梨形虫寄生于牛红细胞、巨噬细胞和淋巴细胞中，引起牛贫血和淋巴肿大的一种病。流行于我国西北、华北、东北一些省区，是一种季节性流行病，多呈急性过程，发病率、病死率高。我国北方发病多在6～8月，7月为高峰期。帕伐醌注射液是一种新型的药物，但目前文献对帕伐醌注射液中的帕伐醌含量的检测方法无报道。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是提供测定兽用帕伐醌注射液中帕伐醌的含量测定方法，本发明可以准确测出帕伐醌注射液中的帕伐醌含量。为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种兽用帕伐醌注射液中帕伐醌的含量测定方法，其特征在于，对含有帕伐醌的兽用帕伐醌注射液用高效液相色谱进行成分分析，所述高效液相色谱：采用十八烷基硅烷键合硅胶作为固定相填充到液相色谱仪的色谱柱内；采用甲醇-0.05mol/l醋酸钠溶液作为流动相并调节其ph值至3.6，甲醇和0.05mol/l醋酸钠溶液的体积比为85：15；检测波长为252nm；色谱柱的柱温保持在30℃。进一步的技术方案在于，理论板数按帕伐醌计算不低于2000。进一步的技术方案还在于，取兽用帕伐醌注射液1ml，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中含0.15mg帕伐醌的溶液，作为供试品溶液。进一步的技术方案还在于，所述供试品溶液的进样体积为20μl。进一步的技术方案还在于，流速为1.0ml/min。采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本发明与现有技术相比，所取得的技术进步在于：本发明采用高效液相的方法测定帕伐醌注射液中帕伐醌的含量，操作简单，快速、重复性好，稳定性好、专属性强，具有较高的检测灵敏度和准确度。并在生产实际中得到验证，成为判定产品是否合格的重要的技术性文件和依据，适用于质量控制标准中采用，有利于大面积推广应用。本发明将85：15甲醇-0.05mol/l醋酸钠溶液用ph值调节至3.6，很好的改善了出峰的时间和峰形，不仅缩短了出峰时间，节省了溶剂，同时有效改善了液相色谱图中帕伐醌的峰形，使液相色谱图中得到的帕伐醌的峰面积更加准确，更有利于对帕伐醌含量的精确测定。本发明用甲醇溶解对照品和制剂，具有良好的稳定性，因此本发明方法适用于连续多个样品的含量测定，侍测溶液不用现用现配，待测溶液放置一段时间之后仍可以用本方法进行测定，节省了实验人员的劳动强度。附图说明下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。图1是浓度-峰面积曲线图；图2是帕伐醌注射液高效液相色谱图；具体实施方式下面结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。本实施例属于高效液相色谱法，其色谱条件为：(1)用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/l醋酸钠溶液(调节ph值至3.6)(85：15)为流动相；(2)检测波长252nm；(3)柱温：30℃(4)流速：1.0ml/min(5)进样体积：20μl(6)理论板数按帕伐醌计算不低于2000。溶液的配制(1)对照品溶液的制备：取对照品适量，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.15mg的溶液；(2)供试品溶液的制备：取供试品1ml，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.15mg的溶液；测定：精密量取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算，即得供试品溶液中帕伐醌的含量。波长的选择根据帕伐醌的紫外光吸收特性，测定了其甲醇溶液在紫外光下的吸收图谱，帕伐醌要波长为252nm波长下有最大吸收，因此确定252nm作为其检测波长。稀释剂与空白辅料的干扰性试验为了确定测定方法的准确性，稀释剂与空白辅料应不影响主峰帕伐醌的出峰，现通过对稀释剂和空白辅料的专属性试验，以增加检测定准确性。稀释剂的干扰性试验：取甲醇过0.45μm滤膜，进样20μl。空白辅料的干扰性试验：按照制剂配方中规定的比例，除帕伐醌外，加入其它辅料制成样品，取1ml置100ml的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，再精密量取10ml，置100ml的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，进样20μl。表1专属性试验结果从表1的测定结果可以看出：稀释剂与空白辅料不影响主峰的测定。系统适用性：取对照品溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，重复测定6次，可接受标准峰面积rsd值不得大于2％表2系统适用性的测定结果从表2可以看出，本标准的系统适用性良好溶液稳定性：取供试品溶液和对照品溶液按上述色谱方法，记录色谱图。从样品和对照品配后开始，于日内测定，考察溶液的稳定性。时间帕伐醌样品峰面积帕伐醌对照品峰面积0h260.4934263.5582h261.2513265.0094h260.852264.3476h260.924264.3398h261.639264.55710h261.649264.90012h262.024265.17614h262.997265.34616h263.177265.20918h263.693265.38920h264.187265.44622h265.065264.52624h264.754265.032rsd值0.59％0.21％表3帕伐醌注射液溶液稳定性测定结果从表3可以看出，配制而成的帕伐醌溶液在24小时时的rsd值≤2.0％，说明配制而成的帕伐醌溶液至少在24小时之内是稳定的线性关系及范围的考察：取帕伐醌对照品30mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度(0.30mg/ml)。分别精密量取上述溶液3ml、4ml、5ml、6ml、7ml置10ml量瓶中，制成0.09mg/ml(60％)、0.12mg/ml(80％)、0.15mg/ml(100％)、0.18mg/ml(120％)、0.21mg/ml(140％)的溶液。作为线性测试溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪。表4帕伐醌线性测定结果从表4，图1可以看出，在0.0934mg/ml～0.2180mg/ml范围内，线性关系良好。重复性试验：重复性是通过配置6份供试品溶液，照样品含量测定项下方法进行测定，每样进样2针，取平均值计算含量，可接受标准6次结果的rsd值不得大于2.0％。表5帕伐醌注射液重复性测定结果从表5可以看出，重复性良好。中间精密度试验：照帕伐醌含量测定方法，通过配置6份供试品溶液，由两个不同的分析人员使用不同的仪器依法进行测定。每样进2针，取平均值计算含量，可接受标准6次结果的rsd值≤2.0％，与重复性数据的rsd值≤2.0％。表6帕伐醌注射液中间精密度测定结果从表6可以看出，中间精密度良好。准确度试验(回收率)：准确度是通过测定80％、100％、120％三个不同浓度的帕伐醌溶液结果与理论值之间的比值，以百分率表示，要求回收率在98.0％～102.0％之间，9个回收率数据的相对标准偏差(rsd)应不大于2.0％。表7帕伐醌注射液收率测定结果从表7可以看出，回收率均在98.0％～102.0％之间，9个回收率数据的相对标准偏差(rsd)应不大于2.0％，符合验证条件。耐用性：将通过改变不同的流速、不同的柱温、不同波长、流动相比例及不同批次色谱柱来评估测定条件参数有微小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，要求各个变动的色谱条件参数下，混合溶液的分离度符合规定，主峰的拖尾因子不得大于2.0，各条件下的含量数据的相对标准差应不大于2.0％表8帕伐醌注射液耐用性测定结果从表8可以看出，色谱条件发生微小变化时依然很好的测定含量。测定结果：依据验证的含量的测定方法，对生产的样品进行含量测定，五批的含量分别为100.9％、98.2％、99.3％、101.1％、99.6％。。当前第1页12