一种同时测定多种维生素注射液中3种脂溶性维生素含量的方法与流程

本发明涉及分析化学领域，尤其是一种同时测定多种维生素注射液中3种脂溶性维生素含量的方法。

背景技术

维生素是维护人体健康、促进生长发育和调节生理机能所必需的一类有机化合物。随着社会的发展，市场上出现了越来越多的多种维生素产品。那么，产品中维生素的测定方法显得尤为重要。

维生素a、维生素d3与维生素e是脂溶性维生素，容易在体内蓄积，摄入过量会导致中毒，这就需要一种对脂溶性维生素进行快速检测的方法，现在采用较多的是高效液相色谱法。维生素a、d、e在食品、乳品、血清以及注射液中的检测均有报道，但是在技术方面却存在众多的难题：采用三个不同检测波长，梯度洗脱、流动相复杂，样品处理过程繁琐费时等，这样测出的结果就有可能导致样品中脂溶性维生素的含量下降，降低了检测的准确度。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是提供一种同时测定多种维生素注射液中3种脂溶性维生素含量的方法，本发明解决了现有技术采用三个不同检测波长，梯度洗脱、流动相复杂，样品处理过程繁琐费时的问题。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种同时测定多种维生素注射液中3种脂溶性维生素含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.将十八烷基硅烷键合硅胶作为固定相填充到液相色谱仪的色谱柱内；

b.制备甲醇-乙腈-乙酸乙酯作为流动相；

c精密称取维生素a、维生素d3与维生素e对照品适量，加异丙醇稀释制成每1ml含维生素a5000单位、维生素d32500单位、维生素e0.4mg的对照品溶液；

d.精密量取待测的多种维生素注射液，用异丙醇稀释，配制成供试品溶液；

e.分别取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪进行等度洗脱，记录色谱图；

f.按按外标法以峰面积计算供试品溶液的浓度。

步骤b中，甲醇、乙腈、乙酸乙酯的体积比为46.5：46.5:7。

进一步的技术方案在于，所述液相色谱仪紫外线检测器检测维生素a、维生素d3与维生素e时的检测波长均为265nm。

进一步的技术方案还在于，所述色谱柱的柱温保持在30℃。

进一步的技术方案还在于，所述流动相在色谱柱内的流速为1.0ml/min。

进一步的技术方案还在于，所述步骤d的具体制备过程为：精密量取待测的多种维生素注射液5ml，置50ml量瓶中，用异丙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本发明中，流动相采用甲醇-乙腈-乙酸乙酯，并将比例调至46.5:46.5:7，与现有文献资料相比，有效改善了液相色谱图中维生素a、维生素d3与维生素e的峰形，使液相色谱图中得到的各维生素的峰面积更加准确，更有利于对脂溶性维生素含量的精确测定；采用高效液相色谱仪，检测3种脂溶性维生素时，与现有文献资料相比，本发明能同时满足以下几个条件：采用同一紫外检测波长同时测定、等度洗脱、样品前处理简便，在保证所得结果符合检测要求的同时节省了试验耗材；用异丙醇溶解对照品和供试品，无需萃取处理等繁琐过程，直接进样分析，缩短了时间和操作步骤，提高了检测效率。因此本发明方法适用于快速连续检测多个样品的含量测定，节省了实验人员的劳动强度。本发明方法具有良好的专属性，为多种维生素注射液中3种脂溶性维生素含量测定的专属方法，已在实际生产中得到验证，成为判定产品是否合格的重要技术性文件和依据，适于在质量控制标准中采用，有利于大面积推广使用。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1是对照品溶液色谱图；

图2是供试品溶液色谱图；

图3是维生素a标准曲线图；

图4是维生素d3标准曲线图；

图5是维生素e标准曲线图。

具体实施方式

下面结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。

本实施例属于高效液相色谱法，其色谱条件为：

色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶柱；

以甲醇-乙腈-乙酸乙酯为流动相，比例为46.5：46.5：7(v/v)；

检测器的检测波长254nm；

柱温：30℃；

流速：1.0ml/min；

进样体积：20μl；

对于流动相的选择，我们进行了数次摸索试验，最后确定同时使用甲醇-乙腈-乙酸乙酯进行试验，比例为46.5：46.5：7(v/v)，维生素a、维生素d3与维生素e的峰形良好，维生素e的保留时间为7.295min、维生素d3的保留时间为9.939min，维生素a的保留时间为25.066min，试验结果理想。

样品中3种脂溶性维生素的含量检测

(1)对照品溶液的制备：精密称取维生素a(棕榈酸酯)、维生素d3与维生素e对照品适量，加异丙醇稀释制成每1ml含维生素a(棕榈酸酯)、维生素d3与维生素e分别为3.0mg(约5000单位)、0.6mg(约2500单位)、0.4mg的对照溶液。

(2)供试品溶液的制备：精密量取待测的多种维生素注射液5ml，置50ml量瓶中，用异丙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

(3)将对照品溶液与供试品溶液分别量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图(见附图1、附图2)，经分析计算得出样品中维生素a(棕榈酸酯)、维生素d3与维生素e的含量，再计算得出维生素a棕榈酸酯、维生素d3与维生素e的标示含量分别为97.17％、98.08％、101.42％。

试验结果表明，本方法对多种维生素注射液中维生素a(棕榈酸酯)、维生素d3与维生素e分离良好，方法操作简单，分析结果真实、准确。

线性范围考察精密称取维生素a(棕榈酸酯)、维生素d3与维生素e适量，置100ml量瓶中，加异丙醇稀释至刻度，制成每1ml含维生素a(棕榈酸酯)、维生素d3与维生素e分别为8.0mg(约13600单位)、1.6mg(约6400单位)、1.2mg的标准溶液。精密量取标准溶液适量，加异丙醇分别稀释成含维生素a(棕榈酸酯)2.0mg/ml、2.5mg/ml、3.0mg/ml、3.5mg/ml、4.0mg/ml；维生素d30.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.7mg/ml、0.8mg/ml；维生素e0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml的对照溶液。经0.22μm微孔滤膜过滤后注入液相色谱仪，根据本发明所述方法测定，记录色谱图，以对照品浓度c(mg/ml)为横坐标，峰面积a为纵坐标进行回归，得维生素a(棕榈酸酯)的线性回归方程a＝6e+06c+357.49，r＝0.9999，维生素a(棕榈酸酯)在2.0mg/ml～4.0mg/ml范围内线性关系良好；维生素d3的线性回归方程a＝897793c+2024.6，r＝0.9991，维生素d3在0.4mg/ml～0.8mg/ml范围内线性关系良好；维生素e的线性回归方程a＝4e+06c+8745.2，r＝0.9999，维生素e在0.2mg/ml～0.6mg/ml范围内线性关系良好(见附图3、附图4、附图5)。

精密度考察按照供试品溶液的制备方法，平行配制6份供试品溶液，考察此方法的中间精密度。为考察随机变动因素对精密度的影响，另一名分析员独立建立系统，重新配置6份供试品溶液进行检测，需使用不同的仪器，在不同的日期进行。维生素a的中间精密度试验的rsd＝0.26％，重复性试验rsd＝0.28％，维生素d3的中间精密度试验的rsd＝0.82％，重复性试验rsd＝1.16％，维生素e的中间精密度试验的rsd＝0.14％，重复性试验rsd＝0.20％，表明本发明所述方法测定维生素a(棕榈酸酯)、维生素d3与维生素e的含量精密度高，重现性好，相对标准偏差小。

维生素a(棕榈酸酯)的精密度试验结果

维生素d3的精密度试验结果

维生素e的精密度试验结果

回收率考察

配制低、中、高三种不同浓度的供试液，根据本发明所述方法测定，得各组分的平均回收率分别如下表所示。

维生素a(棕榈酸酯)回收率试验结果

维生素d3回收率试验结果

维生素e回收率试验结果

溶液的稳定性考察

按照所述的方法制备供试品溶液，放置，分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h进样测定。根据本发明所述方法测定，记录色谱图。结果表明：本发明供试品溶液在室温下放置10小时维生素a、维生素d3与维生素e的峰面积未见明显变化，对日常检测不会造成影响。

样品中维生素a(棕榈酸酯)稳定性试验结果

样品中维生素d3稳定性试验结果

样品中维生素e稳定性试验结果

本发明经与对照品溶液进样结果对比，保留时间、分离度、拖尾因子、对称因子、理论塔板数各项评价指标符合药典规定要求，测定结果能反映出的多种维生素注射液中维生素a(棕榈酸酯)、维生素d3、维生素e的含量。本发明方法简单，含量测定准确可靠，检测结果良好，能够用于该含量项目的检验控制。