一种美沙拉秦肠溶缓释片释放度HPLC检测方法与流程

本发明属于药物释放度的检测方法，具体涉及一种美沙拉秦肠溶缓释片释放度的测定方法。
背景技术：
：随着人们生活水平的提高和生活节奏的加快，慢性结肠炎的发病率在逐渐攀升。目前临床上针对这类疾病的药物治疗存在长期疗效差，副作用多的不足，所以临床上迫切需要治疗效果确切、在病变部位局部缓慢释药的药物制剂来提高疗效，降低副作用。美沙拉秦肠溶缓释片是结肠定位长效制剂，通过抑制血小板激活因子的活性和结肠黏膜脂肪酸氧化，达到改善结肠黏膜炎症的作用，主要用于诱导缓解轻、中度活动期溃疡性结肠炎及其维持治疗。国内目前尚无美沙拉秦缓释制剂上市，与上市的普通制剂相比，该药给药次数由一日三次减少为一日一次，有效提高了患者用药依从性。同时，由于本品仅在结肠部位释药，减少了药物在其它部位的释放和吸收，对于溃疡性结肠炎具有更好的疗效和安全性。技术实现要素：本发明的目的是提供一种美沙拉秦肠溶缓释片释放度的检测方法，采用高效液相色谱法，简便快捷，准确性高，省时省力。为实现上诉目的，本发明的技术方案是这样设计的：所述方法采用的色谱条件为：色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶柱；以磷酸盐缓冲液(取无水磷酸氢二钠7.1g，加磷酸二氢钠6.9g，加500ml水溶解，加7.5ml四丁基氢氧化铵甲醇溶液，加水至1000ml)—甲醇(70:30)为流动相；流速为1.0ml/min；柱温为室温；检测波长为254nm；进样体积为15ul，洗脱方式为等度。本发明有益效果本发明提供的方法能准确有效的测定美沙拉秦肠溶缓释片的释放度，误差小，可作为监控美沙拉秦肠溶缓释片的质量指标，确保美沙拉秦肠溶缓释片的质量和临床效果，适用于实验室及工业生产。附图说明图1为采用本发明的美沙拉秦肠溶缓释片释放度测定方法的色谱条件的优化中确定的色谱条件的色谱图(本发明标准色谱图)；图2为采用本发明的美沙拉秦肠溶缓释片释放度测定方法的验证内容中专属性试验空白辅料溶液的色谱图；图3为采用本发明的美沙拉秦肠溶缓释片释放度测定方法的验证内容中专属性试验供试品溶液的色谱图；具体实施方案1、试验试剂与试药试剂名称级别批号来源磷酸二氢钠ar20150801川东化工磷酸氢二钠ar20160301川东化工甲醇hplc18095055tedia四丁基氢氧化铵甲醇溶液ar2018052401成都科隆2、主要仪器设备设备名称设备型号设备厂家电子天平ms205du梅特勒电子天平auw220d岛津高效液相色谱仪安捷伦1260安捷伦溶出仪rc12ad天大天发3、样品信息2、溶液的配制2.1供试品溶液的制备取去包衣的美沙拉秦肠溶缓释片参比制剂，照溶出度测定法(《中国药典》第四部通则0931第二法)，以960mlph7.2的磷酸盐缓冲液为介质，转速50r/min，依法操作。经10h时，取溶液适量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。2.2对照品溶液的制备精密称取美沙拉秦对照品120mg，置50ml容量瓶中，用溶出介质溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液。精密量取4.2ml对照品储备溶液置25ml容量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。2.3空白辅料溶液的制备依处方取不含美沙拉秦的空白辅料适量(约相当于1.2g的美沙拉秦处方量)置于溶出杯中，照“3.1”项下供试品溶液制备方法配制。3、色谱条件的优化usp41美沙拉秦含量测定色谱条件：以磷酸盐缓冲液(取无水磷酸氢二钠7.1g，加磷酸二氢钠6.9g，加500ml水溶解，加7.5ml四丁基氢氧化铵甲醇溶液，加水至1000ml)—甲醇(85-15)为流动相；色谱柱为ods，4.0*300mm；流速为2.0ml/min；柱温为室温；检测波长为254nm；进样体积为15ul，洗脱方式为等度。由于上述色谱条件的保留时间约为16min，保留时间较长，且流速为2ml/min，柱压较高，所以色谱条件需优化，见下表：综上所述，暂选色谱条件优化3为本品的色谱条件。确定的色谱条件色谱柱选用c18，5um，4.6*250mm；以磷酸盐缓冲液(取无水磷酸氢二钠7.1g，加磷酸二氢钠6.9g，加500ml水溶解，加7.5ml四丁基氢氧化铵甲醇溶液，加水至1000ml)—甲醇(70:30)为流动相；流速为1.0ml/min；柱温为室温；检测波长为254nm；进样体积为15ul，洗脱方式为等度，色谱图见附图1。4验证内容4.1专属性试验分别吸取空白辅料溶液、对照品溶液、供试品溶液依上述色谱条件进行分析，色谱图见附图2、3、4，可见空白辅料不会干扰美沙拉秦的测定。4.2线性试验取“2.2”项下对照品储备溶液，分别精密量取0.05、0.25、0.5、1.0、2.5、4.0、5.0、6.0ml，分别置于10ml容量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，依法测定，以浓度(mg/ml)为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，结果显示美沙拉秦在0.012mg/ml～1.44mg/ml范围内线性关系良好，相关系数为0.9996。4.3精密度试验取“2.2”项下对照品溶液，依法连续进样6次，结果美沙拉秦峰面积的rsd为0.094％(n＝6)，说明进样精密度良好。4.4溶液稳定性试验取“2.1”项下供试品溶液1份，依法分别于0、2、4、6、8、12、24小时后进样分析，结果美沙拉秦峰面积的rsd为0.15％(n＝7)，表明美沙拉秦溶液在24小时内稳定。4.5回收率试验按处方量的80％、100％、120％精密称取美沙拉秦对照品45mg、60mg、75mg各3份，加入处方量辅料，溶出介质溶解并稀释至50ml，摇匀，滤过，取续滤液15ul注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，计算回收率，见下表:4.6定量限与检测限试验精密称取美沙拉秦对照品适量，用溶出介质溶解并逐级稀释，精密量取稀释液15μl，注入液相色谱仪，当稀释液在色谱图中主峰信噪比约为10时，美沙拉秦的浓度为0.014mg/ml，美沙拉秦的定量限为0.21ng；当稀释液在色谱图中主峰信噪比为3时，美沙拉秦的浓度为0.005mg/ml，美沙拉秦的定量限为0.075ng。当前第1页12