面粉或面粉改良剂中硬脂酰乳酸盐的检测方法与流程

本发明属于分析化学领域，特别涉及一种面粉或面粉改良剂中硬脂酰乳酸盐的检测方法。

背景技术：

硬脂酰乳酸钠，别名硬脂酰乳酰乳酸钠，简称ssl，是一种性能优越的多功能脂肪酰乳酸钠，常温下为粉末，在我国食品添加剂使用标准(gb2760-2014)中规定，可在调制乳等乳制品、装饰糖果、专用小麦粉、生湿面制品、面包和糕点中作为乳化剂和稳定剂使用。

现阶段无面粉或面粉改良剂中硬脂酰乳酸盐的含量检测方法，而现有的滴定法和分光光度法两种用于硬脂酰乳酸盐纯品纯度的测定方法，将其应用于面粉或面粉改良剂中的硬脂酰乳酸盐的检测，则容易因为面粉或面粉改良剂中基质的存在干扰检测的准确度，因此，有必要提供一种可有效降低基质干扰，具有高准确度的食品中硬脂酰乳酸盐的含量的检测方法。

技术实现要素：

基于此，本发明的目的在于提供一种可有效降低基质干扰，具有高准确度的面粉或面粉改良剂中硬脂酰乳酸盐的含量的检测方法。

为实现上述目的，本发明具体技术方案如下：

一种面粉或面粉改良剂中硬脂酰乳酸盐的检测方法，包括以下步骤：

前处理：向待测面粉或面粉改良剂样品中加入有机溶剂，提取，取上清，得供试品溶液；

检测：对所述供试品溶液采用高效液相色谱串联质谱仪进行检测；

所述检测中，色谱条件包括：

色谱柱选自hilic色谱柱、c18色谱柱或c8色谱柱；

流动相为流动相a与流动相b以体积比(3:97)-(10:90)混合，流速为0.1-0.5ml/min；

所述流动相a为氨水或乙酸铵溶液，所述流动相b为乙腈。

本发明还提供了一种如上所述硬脂酰乳酸盐的检测方法在食品中的硬脂酰乳酸盐的定性或定量检测中的应用。

基于上述技术方案，本发明具有以下有益效果：

本发明首次采用高效液相色谱串联质谱法，结合面粉或面粉改良剂的性质特点，针对待测化合物硬脂酰乳酸盐，选择了合适的色谱柱，在恰当的色谱条件的下，对样品中的硬脂酰乳酸盐进行富集、分离，获得良好的色谱峰型和保留时间、且响应灵敏，用于对面粉或面粉改良剂中的硬质先乳酸盐进行定性或定量检测，具有检出限和定量限低、回收率和精密度的特点。其检出限可低至0.03mg/l，定量限可低至0.5mg/l。而且，本发明所述的检测方法适用于食品或食品添加剂中的硬脂酰乳酸盐的定性或定量检测，能够有效排除食品样品中的其他物质的干扰。

附图说明

图1为实施例1所述的标准使用液的色谱图；

图2为实施例2中不含有硬脂酰乳酸盐的小麦粉试样(阴性样品)的色谱图；

图3为实施例3中添加了硬脂酰乳酸盐浓度为1.0mg/kg的阴性小麦粉样品色谱图；

图4为实施例4中不含有硬脂酰乳酸盐的小麦粉改良剂试样(阴性样品)的色谱图；

图5为实施例5中添加了硬脂酰乳酸盐浓度为1.0mg/kg的阴性小麦粉改良剂样品色谱图。

图6为实施例7中标准曲线图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将参照实施例对本发明进行更全面的描述，以下给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。应理解，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用试剂，均为市售产品。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明的一种面粉或面粉改良剂中硬脂酰乳酸盐的检测方法，包括以下步骤：

前处理：向待测面粉或面粉改良剂样品中加入有机溶剂，提取，取上清，得供试品溶液；

检测：对所述供试品溶液采用高效液相色谱串联质谱仪进行检测。

优选地，所述检测中，所述高效液相色谱串联质谱仪中采用的色谱柱选自：hilic色谱柱、c18色谱柱和c8色谱柱。更优选为hilic色谱柱。进一步优选地，所述hilic色谱柱的型号为50mm×4.6mm×2.6μm。在采用c18色谱柱和c8色谱柱时，目标物保留时间较短在0.7min以内，仅适用于定性检测，而采用hilic色谱柱，可采用高比例有机相(如94％-96％)的情况下，获得较好的色谱峰型和保留时间，可用于定性检测，也适用于定量检测且检测结果准确度高。

优选地，所述检测中，色谱条件包括：流动相a与流动相b以体积比(3:97)-(10:90)混合，流动相的流速为0.1-0.5ml/min。更优选地，流动相a与流动相b以体积比(4:96)-(6:94)混合，流动相的流速为0.1-0.3ml/min。进一步优选地，流动相a与流动相b以体积比5:95，流动相的流速为0.2ml/min。

优选地，所述流动相a为氨水或乙酸铵溶液；所述流动相b为乙腈。优选地，流动相a为氨水。更优选地，所述流动相a为0.05％-0.15％的氨水。更优选为0.1±0.01％氨水。发明人发现在流动相a与流动相b的在合适的比例配合下，流动相a选用氨水，可促进硬脂酰乳酸钠电离，增强负离子源模式下硬脂酰乳酸根的响应强度，有利于定量检测，并提高检测灵敏度。而本发明所述检测方法中，加入乙酸铵溶液的检测效果不如氨水，因为在加入乙酸铵的情况下，发现乙酸铵在液质下会抑制分子离子峰的响应。

优选地，所述检测中，质谱条件包括：

离子源：电喷雾离子，负离子模式；

离子源温度：450-550℃；

雾化气：18-22psi；辅助气：3-7psi；气帘气：18-22psi；

扫描方式：多反应监测模式。

更优选地，所述多反应监测模式中，监测离子对为：m/z355.4＞283，m/z355.4＞89；定量离子对为：m/z355.4＞283。采用上述质谱条件和选择合适的监测离子对、定量离子对，使得液相色谱串联质谱通过带有结构信息的离子碎片实现化合物的定性和定量，离子碎片通过转化为质荷比为仪器所监测。干扰物由于不含特定的质荷比而被排除。从而有利于进一步消除干扰，保证检测的准确度。

优选地，样品前处理中，所述有机溶剂为乙腈。乙腈与流动相b组分相同，对改善所检测的硬脂酰乳酸钠的化合物色谱峰型有帮助。

可选地，所述的硬脂酰乳酸盐的检测方法，还包括：配制系列浓度的标准品溶液，对所述系列浓度的标准品溶液采用高效液相色谱串联质谱仪进行检测；绘制标准曲线，根据标准曲线计算所述待测样品中的硬脂酰乳酸盐的浓度。

优选地，所述系列浓度的标准品溶液的制备方法包括：精密称取硬脂酰乳酸钠标准品，以丙酮溶解，再以乙腈稀释定容，配制得标准品储备液；以乙腈对所述标准品储备液稀释并定容，得系列浓度的标准品溶液。

本发明还提供如上所述的硬脂酰乳酸盐的检测方法在食品中的硬脂酰乳酸盐的定性或定量检测中的应用。

在该的应用中，可选地，所述食品包括：面粉、面粉改良剂、小麦粉或小麦粉改良剂。

本发明实施例中使用的试剂具体信息如下：

硬脂酰乳酸盐标准品：纯度均大于99％，购自alfaaesar公司；

小麦粉：购于当地市场；

面粉改良剂：包括但不限于复配专用小麦粉面粉处理剂、面包改良剂、面包柔软改良剂等，其中，本发明实施例4和实施例5中为复配专用小麦粉面粉处理剂、面包改良剂，购于当地市场。

实施例1硬脂酰乳酸盐标准溶液的测定

1)硬脂酰乳酸盐标准溶液配制：称取适量硬脂酰乳酸盐标准品，用丙酮溶解，在用乙腈定容至10ml，配制成浓度为500mg/l的硬脂酰乳酸盐(以硬脂酰乳酸盐酸根浓度计)的标准储备液。吸取储备溶液20μl于10ml容量品中，已经定容至10ml，配制成浓度为1mg/kg的硬脂酰乳酸盐标准使用液。

2)色谱条件

色谱柱：hilic色谱柱(50mm×4.6mm×2.6μm)

柱温40℃；

进样量：1.0μl；

流速：0.2ml/min；

流动相：a为0.1％氨水，b为乙腈；流动相比例a：b＝5：95。

3)质谱条件

离子源：电喷雾离子，负离子(esi-)模式；

毛细管电压4.0kv；

离子源温度500℃，

雾化气：20psi；辅助气：5psi；气帘气：20psi；

扫描方式：多反应监测(mrm)模式，监测离子对m/z355.4＞283；m/z355.4＞89，定量离子对m/z355.4＞283。

4)1.0mg/l的硬脂酰乳酸盐标准使用液的色谱图如附图1所示，可见，在2.63分钟时，色谱出峰。

本发明还分别采用了常规的c18色谱柱和c8色谱柱对硬脂酰乳酸盐标准溶液进行检测，其余色谱质谱条件与上述相同。采用c18色谱柱和c8色谱柱均能出峰，出峰时间(保留时间)均小于0.7min，其保留时间较短、峰形与采用hilic色谱柱检测出峰的峰形相比较差，无法满足定量检测的要求。

实施例2阴性样品(不含有硬脂酰乳酸盐的小麦粉试样)中硬脂酰乳酸盐含量的测定

1)供试样液的制备

称取不含有硬脂酰乳酸盐的小麦粉试样1.0g(阴性样品)于15ml具塞塑料离心管中，加入5.0ml乙腈溶液，用于提取试样中的待测物，涡旋振荡2min，超声波提取10min，静置后取1ml上清液15000r/min离心5min。吸取上清液，待测定。

2)色谱条件

同实施实例1。

3)质谱条件

同实施实例1。

4)阴性样品的色谱图如图2所示，可见，阴性样品中由于不含有硬脂酰乳酸盐，因此色谱图中不出峰。

实施例3：添加了硬脂酰乳酸盐标准品的阴性样品(不含有硬脂酰乳酸盐的小麦粉试样)中硬脂酰乳酸盐含量的测定

1)供试样液的制备

称取不含有硬脂酰乳酸盐的小麦粉试样1.0g于15ml具塞塑料离心管中，加入浓度为10mg/l的硬脂酰乳酸盐标准品溶液100μl，使试样中含有硬脂酰乳酸盐1mg/kg。再加入5.0ml乙腈提取液，涡旋振荡2min，超声波提取10min，静置后取1ml上清液15000r/min离心5min。吸取上清液，待测定。

2)色谱条件

同实施实例1。

3)质谱条件

同实施实例1。

4)添加硬脂酰乳酸盐浓度为1.0mg/kg的阴性小麦粉样品色谱图如图3所示，可见，添加了硬脂酰乳酸盐标准品的阴性样品在2.62分钟时出峰，其保留时间及峰强度与实施例1基本相同，能够检测到试样中的硬脂酰乳酸盐，且不受小麦粉干扰。

实施例4：阴性样品(不含有硬脂酰乳酸盐的阴性小麦粉改良剂)中硬脂酰乳酸盐含量的测定

1)供试样液的制备

称取不含有硬脂酰乳酸盐的阴性小麦粉改良剂试样1.0g(阴性样品)于15ml具塞塑料离心管中，加入5.0ml乙腈提取液，涡旋振荡2min，超声波提取10min，静置后取1ml上清液15000r/min离心5min。吸取上清液，待测定。

2)色谱条件

同实施实例1。

3)质谱条件

同实施实例1。

4)阴性样品色谱图如图4所示，可见，阴性样品中由于不含有硬脂酰乳酸盐，因此色谱图中不出峰。

实施例5：添加了硬脂酰乳酸盐标准品溶液的阴性样品(不含有硬脂酰乳酸盐的阴性小麦粉改良剂)中硬脂酰乳酸盐含量的测定

1)供试样液的制备

称取不含有硬脂酰乳酸盐的阴性小麦粉改良剂试样1.0g(阴性样品)于15ml具塞塑料离心管中，加入浓度为10mg/l的硬脂酰乳酸盐标准品溶液100μl，使试样中含有硬脂酰乳酸盐1mg/kg。再加入5.0ml乙腈提取液，涡旋振荡2min，超声波提取10min，静置后取1ml上清液15000r/min离心5min。吸取上清液，待测定。

2)色谱条件

同实施实例1。

3)质谱条件

同实施实例1。

4)添加硬脂酰乳酸盐浓度为1.0mg/kg的阴性小麦粉改良剂样品色谱图如图5所示，可见，添加了硬脂酰乳酸盐标准品的阴性样品在2.62分钟时出峰，其保留时间及峰强度与实施例1基本相同，能够检测到试样中的硬脂酰乳酸盐，且不受小麦粉改良剂的干扰。

实施例6方法的线性范围、线性方程、线性关系、检出限、回收率、精密度

取阴性样品(不含有硬脂酰乳酸盐的小麦粉、小麦粉改良剂)，根据实施实例1制备得阴性样品基质液，取硬脂酰乳酸盐标准品储备液溶液，用阴性样品基质液配制浓度分别为0.5mg/kg、2.5mg/kg、5.0mg/kg和10.0mg/kg的基质匹配标准溶液。浓度由低到高依次进行高效液相色谱串联质谱检测，以ssl的色谱响应值(y)为纵坐标，相应的浓度为(x)绘制线性回归曲线，ssl的线性回归方程，分别按信噪比(s/n)为3和10计算检出限(mdl)和定量(mloq)限，相关系数、线性范围、检出限和定量下限见表1。

表1线性范围、线性方程、线性关系、检出限和方法定量下限

选取阴性小麦粉、小麦粉改良剂，按本方法进行3个水平(1×mloq，2×mloq和10×mloq)的加标回收实验，每个水平平行测定6次，回收率和标准偏差(rsd)见表2。

表2回收率和精密度

实施例7

一、硬脂酰乳酸盐标准溶液配制

硬脂酰乳酸盐标准贮备液：以硬脂酰乳酸根阴离子浓度计，准确称取适量硬脂酰乳酸钠准品于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，配制成浓度为500mg/l的标准贮备液。

二.供试品溶液的制备

称取试样1.0g于15ml具塞塑料离心管中，加入5.0ml乙腈提取液，涡旋振荡2min，超声波提取10min，静置后取1ml上清液15000r/min离心5min。吸取上清液，待测定。

三、仪器条件

色谱条件

3.1色谱柱：hilic色谱柱(50mm×4.6mm×2.6μm)

3.2柱温40℃；

3.2进样量：1.0μl；

3.4流速：0.2ml/min；

3.5流动相：a为0.1％氨水，b为乙腈；流动相比例a：b＝5：95。

质谱条件

3.6离子源：电喷雾离子，负离子(esi-)模式；

3.7毛细管电压4.0kv；

3.8离子源温度500℃，

3.9雾化气：20psi；辅助气：5psi；气帘气：20psi；

3.10扫描方式：多反应监测(mrm)模式，监测离子对m/z355.4＞283；m/z355.4＞89，定量离子对m/z355.4＞283

四、绘制标准曲线

准确移取硬脂酰乳酸盐标准贮备液，用乙腈稀释，配制成浓度为0.5mg/l、1mg/l、2mg/l和5mg/l的系列标准工作液。浓度由低到高依次进行高效液相色谱-串联质谱仪检测，以硬脂酰乳酸盐色谱峰面积为横坐标，以硬脂酰乳酸盐浓度为纵坐标，绘制标准曲线。

五、测定

精密吸取供试品溶液1μl注入高效液相色谱-串联质谱仪，按照高效液相色谱-串联质谱法测定，得到高效液相色谱-串联质谱图，从标准曲线查得测定液中硬脂酰乳酰乳酸根的含量，根据每1ml供试品溶液所代表的样品质量，计算得到供试品中次硬脂酰乳酸盐的含量。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对以上实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。