一种测定复杂组分中维生素C的高效液相色谱分析方法与流程

一种测定复杂组分中维生素c的高效液相色谱分析方法
技术领域
[0001]
本发明涉及一种高效快速测定复杂组分中维生素c含量的液相色谱分析方法。具体通过对样品前处理和色谱条件的优化，可简单、方便且准确快速检测出复杂组分中维生素c的含量。


背景技术：

[0002]
维生素c(c6h8o6)是一种水溶性维生素，含有6个碳原子的酸性多羟基化合物，维生素c的结构如下：
[0003][0004]
维生素c分子中第2及第3位上两个相邻的烯醇式羟基极易解离而释出h
+
，故具有酸的性质，又称抗坏血酸。维生素c具有很强的还原性，很容易被氧化成脱氢维生素c，但其反应是可逆的，并且抗坏血酸和脱氢抗坏血酸具有同样的生理功能，但脱氢坑坏血酸若继续氧化，生成二酮古乐糖酸，则反应不可逆而完全失去生理效能。
[0005]
由于多种维生素矿物质片中含有多种成分，某种成分可能会对维生素c造成降解，故有必要研究出一种能专属检测维生素c且其与杂质峰能很好的分离开的高效液相色谱分析方法。


技术实现要素：

[0006]
为避免复杂组分中的成分对维生素c造成降解，且能高效分离杂质峰，本发明提供一种提取率高、稳定性好、准确度高、重复性好的专属维生素c的高效液相色谱方法，所述方法包括以下步骤：
[0007]
一种用于测定片剂、粉剂、胶囊剂型等复杂组合物产品中维生素c含量的高效液相色谱分析方法，供试品的提取溶剂为草酸溶液，提取方法为室温超声提取；流动相a为磷酸盐缓冲液，流动相b为乙腈，流动相a与流动相b的混合比例为 100～70:0～30，梯度洗脱；紫外检测波长为250～270nm。
[0008]
本发明中，所述草酸溶液配制步骤：称取20～35g草酸，加水稀释至1000ml，搅拌使溶解。
[0009]
本发明中，进样盘温度为10～20；优选温度为10
[0010]
本发明中，所述流动相a的磷酸盐缓释液是0.1m磷酸二氢钾和0.01m磷酸氢二钾的混合溶液。
[0011]
本发明中，所述流动相a与流动相b混合溶液的ph值是3.00～5.00，优选3.00～ 4.00，更加优选4.00。
[0012]
在一个实施方案中，进行上述色谱分析的色谱仪器及条件为：
[0013]
检测仪器：高效液相色谱仪(thermo fisher，u3000)，配备紫外检测器；
[0014]
色谱条件：色谱柱：welch-c18，4.6*150mm，5um；检测波长：250～270nm；流速：0.8～1.5ml/min；柱温：20～30；最佳柱温：25；进样体积：10ul；运行时间：12min。流动相：磷酸盐缓冲液-乙腈；洗脱方式：梯度洗脱如表1；
[0015]
表1洗脱梯度
[0016]
时间(min)a(％)b(％)0.0099.50.53.0099.50.53.0175257.007525
[0017]
本发明中，采用高效液相色谱对多种维生素矿物质片溶液中的维生素c进行定量检测，需要对该方法进行专属性、准确度等多方面的确认，具体为：
[0018]
专属性：配制多种维生素矿物质片溶液和不含维生素c的空白辅料溶液，分别进样，结果显示空白溶剂、空白辅料对供试品溶液的主峰出峰无干扰，且能与相邻峰有效地分离开，说明本发明提供的方法能够准确测定多种维生素矿物质片功效成分维生素c的含量。
[0019]
准确度：采用本发明的高效液相色谱方法对多种维生素矿物质片溶液中的维生素 c进行检测，结果显示其回收率在合格标准范围，准确度良好。
[0020]
线性：采用本发明的高效液相色谱方法对多种维生素矿物质片中的维生素c对照品溶液进行检测，在线性范围60％～150％内，结果显示其主成分线性相关系数不小于0.998，表明检测结果与维生素c的浓度具有良好的线性关系。
[0021]
本发明中，采用高效液相色谱对不同规格样品配制成的样品溶液中的维生素c 进行定量检测，实施例会说明。
[0022]
本发明中，采用高效液相色谱对不同片剂样品配制成的样品溶液中的维生素c 进行定量检测，实施例会说明。
[0023]
本发明中，采用高效液相色谱对胶囊样品配制成的样品溶液中的维生素c进行定量检测，实施例会说明。
附图说明
[0024]
图1示供试品溶液的hplc检测的色谱图；
[0025]
图2、3、4示实施例1的色谱条件下hplc检测的色谱图；
[0026]
图5示实施例2的色谱条件下hplc检测的色谱图；
[0027]
图6示实施例3的色谱条件下hplc检测的色谱图；
[0028]
图7示实施例4的色谱条件下hplc检测的色谱图；
具体实施方式
[0029]
下面通过实施例对本发明作进一步详细地说明，分别以片剂、片剂不同规格、胶囊为例。
[0030]
试剂：乙腈(sinence，批号180/a0683)，磷酸二氢钾、磷酸氢二钾(天津市大茂化学试剂厂，ar)，磷酸(天津市富宇精细化工有限公司，ar)，二水合草酸(上海凌峰化学试剂有限公司)，维生素c对照品(中国食品药品检定研究院)，样品(深圳芙莱特营养与健康有限公司提供)
[0031]
实施例1：
[0032]
深圳芙莱特营养与健康有限公司生产的a1111-a2131-a3333号牌多种维生素矿物质片(含有维生素a、维生素e、维生素b1、维生素b2、烟酸、泛酸、维生素b6、生物素、维生素c、维生素d、叶酸、维生素b12、铁、锌、硒、镁、铜、钙、铬、钾等20种成分)样品中维生素c含量的测定。第一实施例的具体步骤如下：
[0033]
第一步：提取溶剂，称取30g草酸，加水稀释至1000ml，搅拌使溶解。
[0034]
第二步：对照品溶液的配制，取维生素c对照品，精密称定，加入草酸溶液适量，室温超声1min使溶解，加草酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；稀释到需要浓度的对照品溶液，即可。
[0035]
第三步：样品溶液配制，取本品研磨成细粉，精密称定，加草酸溶液，室温超声溶解，得到维生素c溶液。a1111-a2131-a3333牌号多种维生素矿物质片各配制两份。
[0036]
第四步：液相色谱条件的具体内容如下：
[0037]
色谱柱：welch-c18，4.6*150mm，5um
[0038]
流动相：磷酸盐缓冲液-乙腈(梯度洗脱如表1)
[0039]
检测波长：262nm
[0040]
流速：1.0ml/min
[0041]
柱温：25℃
[0042]
进样体积：10ul
[0043]
运行时间：12min
[0044]
检测色谱图如2、3、4图，检测结果如表2
[0045]
表2检测结果
[0046][0047]
实施例2：
[0048]
深圳芙莱特营养与健康有限公司生产维生素c片样品中维生素c含量的测定。具体步骤：
[0049]
第一步：提取溶剂，称取30g草酸，加水稀释至1000ml，搅拌使溶解。
[0050]
第二步：对照品溶液的配制，取维生素c对照品，精密称定，加入草酸溶液适量，室温超声1min使溶解，加草酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；稀释到需要浓度的
对照品溶液，即可。
[0051]
第三步：样品溶液配制，取维生素c片研磨成细粉，精密称定，加草酸溶液，室温超声溶解，得到维生素c溶液。
[0052]
第四步：液相色谱条件的具体内容如下：
[0053]
色谱柱：welch-c18，4.6*150mm，5um
[0054]
流动相：磷酸盐缓冲液-乙腈(梯度洗脱如表1)
[0055]
检测波长：262nm
[0056]
流速：1.0ml/min
[0057]
柱温：25℃
[0058]
进样体积：10ul
[0059]
运行时间：12min
[0060]
样品检测色谱图如图5，检测结果如表3。
[0061]
表3检测结果
[0062][0063]
实施例3：
[0064]
深圳芙莱特营养与健康有限公司生产维生素c矿物质片样品中维生素c含量的测定。具体步骤：
[0065]
第一步：提取溶剂，称取30g草酸，加水稀释至1000ml，搅拌使溶解。
[0066]
第二步：对照品溶液的配制，取维生素c对照品，精密称定，加入草酸溶液适量，室温超声1min使溶解，加草酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；稀释到需要浓度的对照品溶液，即可。
[0067]
第三步：样品溶液配制，取维生素c矿物质片研磨成细粉，精密称定，加草酸溶液，室温超声溶解，得到维生素c溶液。
[0068]
第四步：液相色谱条件的具体内容如下：
[0069]
色谱柱：welch-c18，4.6*150mm，5um
[0070]
流动相：磷酸盐缓冲液-乙腈(梯度洗脱如表1)
[0071]
检测波长：262nm
[0072]
流速：1.0ml/min
[0073]
柱温：25℃
[0074]
进样体积：10ul
[0075]
运行时间：12min
[0076]
样品检测色谱图如图6，检测结果如表4。
[0077]
表4检测结果
[0078][0079][0080]
实施例4：
[0081]
深圳芙莱特营养与健康有限公司生产的多种维生素胶囊(含维生素a、维生素e、维生素b1、维生素b2、烟酸、泛酸、维生素b6、生物素、维生素c、维生素d、叶酸、维生素b12、铁、锌、硒、镁、铜、钙、铬、钾等20种成分)样品中维生素c 含量的测定。具体步骤如下：
[0082]
第一步：提取溶剂，称取30g草酸，加水稀释至1000ml，搅拌使溶解。
[0083]
第二步：对照品溶液的配制，取维生素c对照品，精密称定，加入草酸溶液适量，室温超声1min使溶解，加草酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；稀释到需要浓度的对照品溶液，即可。
[0084]
第三步：样品溶液配制，取本品胶囊20粒，除去胶囊壳倒出内容物，精密称取内容物适量，加草酸溶液，室温超声溶解，得到维生素c溶液。
[0085]
第四步：液相色谱条件的具体内容如下：
[0086]
色谱柱：welch-c18，4.6*150mm，5um
[0087]
流动相：磷酸盐缓冲液-乙腈(梯度洗脱如表1)
[0088]
检测波长：262nm
[0089]
流速：1.0ml/min
[0090]
柱温：25℃
[0091]
进样体积：10ul
[0092]
运行时间：12min
[0093]
样品检测色谱图如图7，检测结果如表5。
[0094]
表5检测结果
[0095][0096]
本发明对含有多种维生素矿物质片、维生素c片、维生素c矿物质片、多种维生素矿物质胶囊样品进行检测，维生素c均能在3min左右出峰，且均可以避免其他杂质的干扰，使得峰型美观、分离度良好。说明本发明适用于不同剂型的复杂组分中维生素c的检测。
[0097]
以上所述的具体实施例，对本发明的解决的技术问题、技术方案以及有益效果作了一系列的详细说明。但该说明仅仅是针对本发明的具体实施例而已，凡没有脱离本发明技术基础、原则和精神而作的等效实施例或变更，均应包括在本发明的保护范围之内。