一种叶下珠药材、颗粒及标煎液干粉的快速多信息薄层鉴别方法与流程

本发明涉及一种叶下珠药材、颗粒及标煎液干粉的快速多信息薄层鉴别方法。属于中药的薄层鉴别领域。即，采用薄层色谱鉴别，在同一块薄层板上，2种不同的检视条件下，共检视到叶下珠药材、颗粒及标煎液干粉的7种共有信息斑点。

背景技术：

所谓的快速多信息薄层鉴别方法，顾名思义就是薄层鉴别简便、快捷、高效，供试品溶液和对照药材溶液，不需要反复提纯处理，无蒸发、浓缩等污染环境的操作程序，用适宜的溶剂超声后，都不需滤过，上清液点样、展开、检视、即可，很快就能得到薄层结果。所谓的多信息系指一块薄层板，展开1次，可获得不同检视条件下的多种信息斑点。与常规的薄层鉴别相比，大幅度提高了被检测物的质量可控性，有利于市场质量监督，确保人民用药的安全与有效。

叶下珠为大戟科植物叶下珠phylanthusurinarial.的带根全草。具有清热解毒，利水消肿，明目，消积的功效。主治痢疾，泄泻，黄疸，水肿，热淋，石淋，目赤，夜盲，疳积，痈肿，毒蛇咬伤。目前从中分离得到的化合物主要是黄酮类、萜类、酚类、鞣质等多种成分。该药材未被收入中国药典，仅在2009年版湖南省中药材标准有收载，收载的功能是：清热，利湿，解毒，消肿。主治是：用于痢疾，腹泻，传染性肝炎，肾炎水肿，尿路感染，小儿疳积，疮疡，蛇虫咬伤，口疮，头疮，无名肿毒。其质量标准【1】只有常规检查和薄层鉴别，薄层鉴别的方法是：取本品粉末2g，加乙醇20ml，浸渍2小时，时时振摇，滤过，滤液浓缩至2ml，加硅胶(100～200目)2g，拌匀，挥干，装柱(内径10～15mm)中，以乙醚8ml洗脱，弃去乙醚液，再用乙醇8ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。再取叶下珠对照药材2g，同法制备对照药材溶液。吸取上述2种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(7.5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。还有报道是以没食子酸为对照，以聚酰胺薄膜为载体，进行鉴别的。目前还未收入中国药典，所以也就无叶下珠的法定国家标准。

为快速多信息控制叶下珠药材、颗粒及标煎液干粉质量，并为其制备工艺提供科学依据，本着简便、快捷、低成本、高效率、多信息的宗旨，对叶下珠药材、颗粒及标煎液干粉进行了专题薄层鉴别研究。获得了简便、快捷、无环境污染的叶下珠药材、颗粒及标煎液干粉的快速多信息薄层鉴别方法。下面就叶下珠药材、颗粒及标煎液干粉的制备工艺描述如下：

叶下珠药材系指将采集的叶下珠全草，除去杂质，切段，干燥，即得。

叶下珠颗粒系指将叶下珠药材，用水煎煮2次，每次1～2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩到适宜的相对密度，喷雾干燥，将干燥粉，加适量糊精，混合均匀，制成颗粒，即得。

叶下珠标煎液干粉系指将叶下珠药材，用水煎煮2次，每次1小时，滤过，合并滤液，常温浓缩到适宜相对密度，置60℃烘箱内，烘干，粉碎，即得。

技术实现要素：

首次创建了一种叶下珠药材、颗粒及标煎液干粉的快速多信息薄层鉴别方法。即，用简便、快捷的前处理方法得到供试品与药材溶液，分别点于同一块薄层板上，展开后，在2种不同的检视条件下，检视到叶下珠药材、颗粒及标煎液干粉的7种共有信息斑点，均是遇10％硫酸乙醇溶液，激发的荧光斑点和呈色的颜色斑点。它们相互交错，但互不干扰，发挥了不同检视条件下的信息斑点互补。与常规的薄层鉴别相比，不但大幅度提高了被鉴别物的质量可控性，有利于质量监督，而且方法简便、快捷，高效率、成本低、无环境污染。

本发明解决其技术问题所采用的方案为：

取叶下珠颗粒和标煎液干粉各0.5g，分别加甲醇3ml，超声处理10分钟，上清液作为供试品溶液。另叶下珠药材0.3g，加甲醇2ml,，超声处理15分钟，上清液作为药材溶液。吸取颗粒供试品溶液5μl、标煎液干粉溶液6μl、药材溶液8μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以体积比10∶3∶0.2∶0.2的乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点呈现，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与叶下珠药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝绿色荧光主斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与叶下珠药材色谱相应的位置上，至少显3个相同的棕色斑点。

本发明的原理如下：

依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再采用适宜的展开剂，进行展开，各种化学成分就会随着选用的展开剂，依据吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的能力不同，而在薄层板上得以良好分离。再借助各种极性近似的有效成分，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，虽然重叠，但在不同的层次上，互不干扰，呈现出各自不同的颜色斑点，获得多信息的薄层色谱图。

本发明的创新点及有益效果如下：

1.首次创建了一种叶下珠药材、颗粒及标煎液干粉的快速多信息薄层鉴别方法。即，用简便、快捷的前处理方法得到供试品与药材溶液，分别点于同一块薄层板上，展开后，在2种不同的检视条件下，检视到叶下珠药材、颗粒及标煎液干粉的7种共有信息斑点。均是遇10％硫酸乙醇溶液，激发的荧光斑点和呈色的颜色斑点，它们相互交错，但互不干扰，发挥了不同检视条件下的信息斑点互补。与常规的薄层鉴别相比，不但大幅度提高了被鉴别物的质量可控性，有利于质量监督，而且方法简便、快捷，高效率、成本低、无环境污染。

2.以体积比10∶3∶0.2∶0.2的乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水为展开剂，展开叶下珠药材、颗粒及标煎液干粉后，薄层板在紫外光灯365nm、254nm和日光下都是无清晰的斑点呈现的，只有喷雾了10％硫酸乙醇溶液显色后，部分成分被激发了荧光，部分成分呈现了颜色斑点，所以置紫外光灯365nm下检视，药材和供试品都呈现了4个相同的亮蓝绿色荧光斑点(图1)，再置暗室内透过灯光检视，在薄层板呈现了3个棕色的颜色斑点，对比荧光点的rf值位置，3个颜色斑点都不与荧光点重合，说明是不同的化合物。这样，在2种检视条件下，共检出7个信息斑点，4个荧光斑点，3个呈色斑点，共计7种成分的信息斑点，相互交错，互不干扰，发挥了不同检视条件下的信息斑点互补作用。

本方法创新还在于：被鉴别的对象是全草和全草的水煎煮物，全草含大量的脂溶性叶绿素，而水煎煮物因相似相容的提取原理，不再含叶绿素，在不加任何处理操作的情况下，如何能使全草中的叶绿素不干扰鉴别，就只能依托展开剂的组分与比例，即选择的展开剂，要能将叶绿素等脂溶性杂质，推到薄层板的前沿，使其不落在规定的rf值0.2～0.8范围内，不影响薄层鉴别的结果判断，又能使展开的信息斑点尽可能多，成为了本鉴别的关键技术。本发明正是解决了这一难题，做到了药材不经任何除叶绿素操作，直接采用甲醇超声的全草药材和水煎煮提取的供试品，就获得了药材与供试品一致的薄层色谱图。

3.本鉴别方法只需叶下珠药材0.3g、颗粒和标煎液干粉各0.5g、甲醇共8ml、时间20分钟，即可获得供试品和药材溶液，加上展开剂12ml，展开时间30分钟，总花费1小时，即可对样品质量做出多指标评价，简便、快捷，具有很高的实用价值。

附图说明

图1为叶下珠药材、颗粒及标煎液干粉用10％硫酸乙醇溶液显色后，在紫外光灯365nm下的薄层tlc图。

图2为叶下珠药材、颗粒及标煎液干粉用10％硫酸乙醇溶液显色后，置暗室内透过灯光检视的薄层tlc图。

图1、2为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.2.3.为叶下珠药材；4.为叶下珠标煎液干粉；5.6.为叶下珠颗粒；

本发明具体实施方式如下：

取叶下珠颗粒和标煎液干粉各0.5g，分别加甲醇3ml，超声处理10分钟，上清液作为供试品溶液。另叶下珠药材0.3g，加甲醇2ml,，超声处理15分钟，上清液作为药材溶液。吸取颗粒供试品溶液5μl、标煎液干粉溶液6μl、药材溶液8μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以体积比10∶3∶0.2∶0.2的乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点呈现，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与叶下珠药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝绿色荧光主斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与叶下珠药材色谱相应的位置上，至少显3个相同的棕色斑点。

参考文献

【1】湖南省中药材标准，2009年版。