技术特征：
1.一种无酶循环放大核酸适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：将分子信标mb和cdna分别溶于超纯水中进行激活，静置1h后，按比例混合置于恒温摇床孵育8h，即得无酶循环放大核酸适配体传感器的工作溶液。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述分子信标mb的序列为5
’‑
fam
‑
(ch2)6‑
cccgggttagttggggttcagttggcccggg
‑
bhq
‑1‑3’
；cdna的序列为5
’‑
ccaactgaaccccaactaa
‑3’
。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述分子信标mb和cdna的混合比例为1：0.5，分子信标mb的浓度为166nm，cdna的浓度为83nm。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述恒温摇床孵育的温度为37℃、ph为9。5.权利要求1
‑
4任一项方法所制备的无酶循环放大核酸适配体传感器，其特征在于：所述适配体传感器主要由分子信标mb和cdna制备而成，其中分子信标mb为茎
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环结构，分子信标mb与cdna杂交后会形成mb
‑
cdna复合结构。6.权利要求5所述的无酶循环放大核酸适配体传感器的工作原理，其特征在于，所述分子信标mb为茎
−
环结构，在没有cdna时荧光团和淬灭剂非常接近，当加入cdna后杂交形成mb
‑
cdna复合结构，此时分子信标mb被打开，并将荧光基团从猝灭剂中分离出来，恢复荧光，当加入靶目标amp时，靶目标amp与分子信标mb特异性结合，并释放cdna；被释放的cdna会触发一个新的循环，与游离的分子信标mb杂交重新形成mb
‑
cdna复合结构；在动态组装下，cdna被循环释放，实现无酶扩增，使荧光信号得到循环放大，荧光信号增强的程度与amp的浓度有关。7.权利要求5所述的无酶循环放大核酸适配体传感器在高灵敏检测氨苄西林（amp）中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤为：将待测溶液加入到无酶循环放大核酸适配体传感器的工作溶液中，所用缓冲液为20mm tris
‑
hcl (ph=9.0)、50 mm nacl、5 mm kcl、5 mm mgcl2、工作溶液体积为600μl，利用荧光分光光度计对工作溶液进行荧光检测，记录该待测溶液的荧光强度值，代入线性方程，即可计算待测物溶液中amp的浓度。9.根据权利要求8的应用，其特征在于：所述线性方程为分段式线性方程，当amp浓度在0.1
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10nmol/l范围对数坐标化求出lgc与y的线性回归方程，线性拟合曲线l1为y=138.9616+14.30674
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lgc，r2=0.99227；当amp浓度在10
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150nmol/l线性拟合曲线l2为y=93.42218+58.50019
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lgc，r2=0.99991，其中y为荧光强度，c为amp浓度。10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述无酶循环放大核酸适配体传感器的检测范围为0.05
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200nmol/l，检出限为50pmol/l。
技术总结
本发明属于传感器领域，涉及氨苄西林的检测，特别是指一种无酶循环放大核酸适配体传感器及其制备方法和应用。步骤如下：将分子信标MB和cDNA分别溶于超纯水中进行激活，静置1h后，按比例混合置于恒温摇床孵育8h，即得无酶循环放大核酸适配体传感器的工作溶液。通过适配体实现对氨苄西林的特异性捕获，利用猝灭基团和荧光基团间的距离变化实现荧光信号检测，并凭借互补链作为媒介参与反应循环，最终实现荧光信号的放大。其中，为了提高传感器的灵敏性和稳定性，实验优化了传感器的各项制备参数，并对氨苄西林的浓度进行了检测，检出限为50pmol/L，具有一定的抗干扰能力。该方法为水环境中氨苄西林的浓度检测提供研究基础。环境中氨苄西林的浓度检测提供研究基础。环境中氨苄西林的浓度检测提供研究基础。
技术研发人员：任林娇 姜利英 张培 秦自瑞 常凌乾 齐汝宾 彭政 陈青华 陈凤华 闫艳霞
受保护的技术使用者：郑州轻工业大学
技术研发日：2021.06.07
技术公布日：2021/9/3