一种用液相色谱法测盐酸文拉法辛片有关物质的方法与流程

1.本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种用液相色谱法测盐酸文拉法辛片有关物质的方法。


背景技术：

2.盐酸文拉法辛片为抗抑郁症药，主要成分为盐酸文拉法辛，文拉法辛通过抑制5-羟色胺(5-ht)、去甲肾上腺素(ne)的再摄取而增强中枢神经系统的5-ht、ne效应有关。盐酸文拉法辛化学名：(
±
)
–1–
[2
–
(二甲胺基)
–1–
(4
–
甲氧苯基)乙基]
–
环己醇盐酸盐；分子式：c17h27no2hcl。
[0003]
据悉，目前盐酸文拉法辛中含有8个已知杂质，如下表：
[0004]
[0005]


技术实现要素：

[0006]
本发明提供一种用液相色谱法测盐酸文拉法辛片有关物质的方法，可有效的分离分析盐酸文拉法辛及杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质g、杂质h。
[0007]
具体技术方案如下：
[0008]
一种用液相色谱法测盐酸文拉法辛片有关物质的方法，
[0009]
1)色谱条件：色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min；柱温30℃，检测波长226nm；以三乙胺-乙腈-水(1:20:80)，用磷酸调节ph至3.5，作为流动相a；以三乙胺-乙腈-水(1:50:50)，用磷酸调节ph至3.5，作为流动相b；按照下表梯度程序进行洗脱，进样体积20μl；
[0010][0011]
2)供试品溶液的制备：取样品加入流动相a，超声10min使溶解，放冷，用流动相a溶液稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；
[0012]
3)测定：将供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0013]
本发明的方法具有良好的进样精密度、重复性、中间精密度，准确度、回收率好，耐用性良好。
附图说明：
[0014]
图1-图6为盐酸文拉法辛杂质a、杂质c、杂质d、杂质f、杂质g、盐酸文拉法辛有关物质线性图。
具体实施方式：
[0015]
下面结合具体实施例对本发明所提供的一种用液相色谱法测盐酸文拉法辛片有关物质的方法进行详细说明。
[0016]
1、色谱条件筛选
[0017]
(1)检测波长的选择
[0018]
杂质对照品溶液储备液配制：分别精密称取杂质a10.84mg、杂质b10.47mg、杂质c10.20mg、杂质d10.43mg、杂质e10.43mg、杂质f10.13mg、杂质g10.18mg、杂质h10.15mg、盐酸文拉法辛10.20mg，分别置于20ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度作为对照品储备液。
[0019]
杂质对照品溶液的配制：分别精密量取上述各杂质对照品储备液加甲醇稀释制成每1ml约含10μg溶液。
[0020]
测定方法：取上述各杂质对照品溶液及盐酸文拉法辛对照品溶液适量，于紫外-可见分光光度计在190-400nm处进行全波长扫描，记录色谱图，检测结果见下表。
[0021]
检测波长的选择检测结果：
[0022]
名称浓度(μg/ml)最大吸收波长(nm)吸光度a杂质a10.77224.50.55664杂质b10.43229.00.38588杂质c10.16226.00.35838杂质d10.41226.00.37318杂质e10.21226.50.36197杂质f10.08228.00.38362杂质g10.15226.00.31368杂质h10.11225.50.48863盐酸文拉法辛10.19226.50.39043
[0023]
根据上述试验结果及盐酸文拉法辛片项下有关物质检测，最终选择检测波长为226nm。
[0024]
(2)色谱条件
[0025]
色谱柱：partisil ods 3 250
×
4.6mm sn:h82920；
[0026]
检测波长：226nm；
[0027]
流速：1.0ml/min；
[0028]
进样体积：20μl；
[0029]
混合杂质对照品溶液配制：精密量取“检测波长的选择”项下各杂质对照品储备液1ml，盐酸文拉法辛对照品储备液2ml，置同一25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
[0030]
流动相a：三乙胺-乙腈-水(1:20:80)，用磷酸调节ph至3.5；
[0031]
流动相b：三乙胺-乙腈-水(1:50:50)，用磷酸调节ph至3.5；
[0032]
按下表进行梯度洗脱
[0033][0034]
取混合杂质对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，检测结果见下表。
[0035]
色谱条件结果：
[0036][0037]
实验结论：由上表可知，杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质g、杂质h的相对保留时间能较好分开，且各杂质及主成分的理论塔板数均大于2000，杂质之间的分离度均大于2.5，该色谱条件较适合盐酸文拉法辛片的有关物质检测。
[0038]
(3)单个杂质定位
[0039]
在上述色谱条件下进行。
[0040]
杂质单标溶液：分别精密量取“检测波长的选择”项下各杂质对照品储备液各1ml，分别置于25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；其中杂质e单标另外配制为：称取杂质e2.43mg置于100ml量瓶中加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
[0041]
取各对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，检测结果见下表。
[0042]
杂质定位结果：
[0043][0044]
实验结论：由上述试验结果可知，该色谱条件下，杂质与杂质之间，杂质与主峰之间的分离度较好、相对保留时间较合理，理论板数符合要求。
[0045]
2、供试品溶液制备考察
[0046]
(1)提取溶剂的考察
[0047]
色谱条件：色谱柱partisil ods-3250
×
4.6mm sn:h82920；流速1.0ml/min；柱温30℃，检测波长226nm；以三乙胺-乙腈-水(1:20:80)，用磷酸调节ph至3.5，作为流动相a；以三乙胺-乙腈-水(1:50:50)，用磷酸调节ph至3.5，作为流动相b；按照下表梯度程序进行洗脱，进样体积20μl。
[0048][0049]
供试品溶液的制备：分别称取本品细粉0.8g三份，分别置于100ml量瓶中，分别加入约80ml 2.4％磷酸溶液，水、流动相a，超声15分钟，取出放至室温，加入相应的溶剂至刻度，摇匀，滤过即得。
[0050]
自身对照溶液的制备：分别精密量取供试品溶液0.2ml至100ml量瓶中，加相应的溶剂至刻度，摇匀，即得。
[0051]
系统适用性溶液:称取盐酸文拉法辛杂质d10.43mg，置20ml量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。精密量取0.5ml置50ml量瓶中，再称取盐酸文拉法辛对照品10.42mg置
于同一量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。
[0052]
混合杂质对照品溶液：同“色谱条件筛选”项下混合杂质对照品溶液。
[0053]
取上述各溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，检测结果见下表。
[0054]
提取溶剂的考察结果(一)
[0055][0056]
提取溶剂的考察结果(二)
[0057][0058][0059]
实验结论：由试验结果可知，用流动相a作为提取溶剂时，杂质检出个数最多，杂质提取较为完全，因此选择流动相a作为提取溶剂。
[0060]
(2)滤膜吸附性考察
[0061]
色谱条件：同“提取溶剂的考察”。
[0062]
系统适用性溶液:检测波长的选择项下的盐酸文拉法辛对照品储备液10ml和盐酸文拉法辛杂质d的储备液1ml,置于同一25ml容量瓶中加甲醇稀释至刻度摇匀，即得。
[0063]
混合杂质对照品溶液：同“提取溶剂的考察”。
[0064]
供试品溶液制备：称取本品细粉0.8g，置于100ml量瓶中，加入约80ml流动相a，超声15分钟，取出放至室温，加流动相a定容至刻度，摇匀，分别采用0.45μm滤膜过滤、0.22μm滤膜过滤、离心的方式制得供试品溶液。
[0065]
取上述各溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，检测结果见下表。
[0066]
滤膜吸附性考察结果(一)
[0067][0068]
滤膜吸附性考察结果(二)
[0069][0070][0071]
实验结论：由试验结果可知，通过滤膜过滤和离心制得的供试品溶液有关物质检测结果基本一致，无滤膜吸附性，从操作简便考虑，选择过滤方式处理样品。
[0072]
(3)提取时间考察
[0073]
色谱条件：同“提取溶剂的考察”。
[0074]
系统适用性溶液:同“滤膜吸附性的考察”。
[0075]
混合杂质对照品溶液：同“提取溶剂的考察”。
[0076]
供试品溶液制备：分别称取本品细粉0.8g三份，分别置于100ml量瓶中，加入约80ml流动相a，分别超声10分钟、15分钟、20分钟，取出放至室温，加流动相a定容至刻度，摇匀，滤过，即得。
[0077]
取上述各溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，检测结果见下表。
[0078]
提取时间考察结果(一)
[0079][0080]
提取时间考察结果(二)
[0081][0082][0083]
实验结论：由试验结果可知，样品制备时超声时间时间基本无影响，考虑节约时间，因此超声时间定为10分钟。
[0084]
总结：供试品溶液的制备为取本品细粉0.8g，置100ml量瓶中，加适量的流动相a，超声10min，放冷，用流动相a稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液供试品溶
液。
[0085]
3、系统适用性试验
[0086]
色谱条件：同“提取溶剂的考察”。
[0087]
系统适用性溶液:同“滤膜吸附性的考察”。
[0088]
混合杂质对照品溶液：同“提取溶剂的考察”。
[0089]
空白辅料溶液：取空白辅料0.6059g，置100ml量瓶中，加80ml流动相a，超声10min，放冷，用流动相a稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为空白辅料溶液。
[0090]
供试品溶液：取本品的细粉0.8043g，置100ml量瓶中，加80ml流动相a，超声10min，放冷，用流动相a稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
[0091]
对照溶液：精密量取对照溶液0.2ml，置100ml量瓶中，用流动相a稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
[0092]
分别精密量取灵敏度溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，试验结果见下表。
[0093]
系统适用性试验结果
[0094][0095][0096]
实验结论：由试验结果可知：空白溶剂、空白辅料无干扰，盐酸文拉法辛与杂质d分离度良好、理论塔板良好。已知杂质之间分离度良好、理论塔板良好，分离度均大于1.5。
[0097]
4、专属性(破坏试验)
[0098]
空白溶剂：即为流动相a。
[0099]
空白辅料储备液：取空白辅料6.0g，置100ml量瓶中，加流动相a溶液适量，超声，放冷，用流动相a溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为空白辅料储备液。
[0100]
供试品储备液：取本品的细粉8.0g，置100ml量瓶中，加流动相a溶液适量，超声10min，放冷，用流动相a溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品储备液。
[0101]
未破坏溶液：分别量取空白溶剂、空白辅料储备液、供试品储备液各1ml，分别放入10ml量瓶中，用流动相a溶液稀释至刻度摇匀，滤过，取续滤液即得未破坏溶液；
[0102]
液体热破坏：分别精密吸取空白溶剂、空白辅料储备液、供试品储备液各1ml分别置于10ml容量瓶中，沸水浴加热30min，取出放冷，加流动相a稀释至刻度摇匀，过滤，取续虑液分别制得液体热破坏，空白溶剂溶液、空白辅料溶液、供试品溶液。
[0103]
固体热破坏：精密称取供试品80mg置于容器中，置于烘箱中120℃放置1h，取出放冷，加流动相a适量超声10min，放冷，稀释制成10ml，过滤，取续虑液作为固体热破坏溶液；精密称取空白辅料60mg同法配制空白辅料破坏溶液；
[0104]
液体酸破坏：分别精密吸取空白溶剂、空白辅料储备液、供试品储备液各1ml分别置于10ml容量瓶中，加1mol/l的盐酸溶液1ml，沸水浴加热0.5h，取出，放冷，加1mol/l的氢氧化钠溶液1ml中和，加流动相a稀释至刻度，摇匀，过滤，取续虑液制得液体酸破坏破坏，空白溶剂溶液、空白辅料溶液、供试品溶液。
[0105]
固体酸破坏：精密称取供试品80mg、分别置于10ml容量瓶中，加1mol/l的盐酸溶液1ml，80℃水浴加热1h，取出放冷，加1mol/l的氢氧化钠溶液1ml中和，加流动相a适量超声10min，取出，放冷，稀释至刻度摇匀，过滤，取续虑液作为酸固体破坏溶液；精密称取空白辅料60mg同法配制空白辅料破坏溶液；精密量取空白溶剂1ml，同法配制空白溶剂破坏溶液。
[0106]
液体碱破坏：分别精密吸取空白溶剂、空白辅料储备液、供试品储备液各1ml分别置于10ml容量瓶中，加2mol/l的氢氧化钠溶液1ml，沸水浴1h，取出放冷，加2mol/l的盐酸溶液1ml中和，加流动相a稀释至刻度摇匀，过滤，取续虑液制得液体碱破坏空白溶剂溶液、空白辅料溶液、供试品溶液。
[0107]
固体碱破坏：精密称取供试品80mg、置于10ml容量瓶中，加2mol/l的氢氧化钠溶液1ml，沸水浴加热1h，取出放冷，加2mol/l的盐酸溶液1ml中和，加流动相a适量超声10min，取出，放冷，稀释至刻度摇匀，过滤，取续虑液作为碱固体破坏溶液；精密称取空白辅料60mg同法配制空白辅料破坏溶液；精密量取空白溶剂1ml，同法配制空白溶剂破坏溶液。
[0108]
光破坏：分别精密吸取空白溶剂、空白辅料储备液、供试品储备液各1ml分别置于10ml容量瓶中，在照度4500lx的光照试验箱放置5天取出，加流动相a稀释至刻度摇匀，过滤，取续虑液制得光照液体破坏空白溶剂溶液、空白辅料溶液、供试品溶液。
[0109]
液体氧化破坏：分别精密吸取空白溶剂、空白辅料储备液、供试品储备液各1ml分别置于10ml容量瓶中，10％h2o2溶液1ml，置于80℃水浴1.5h，加流动相a稀释至刻度摇匀，过滤，取续虑液，分别制得碱液体破坏的空白溶剂溶液、空白辅料溶液，和供试品溶液。
[0110]
固体氧化破坏：精密称取供试品80mg、置于10ml容量瓶中，分别置于10ml容量瓶中，10％h2o2溶液1ml，置于70℃水浴1.5h，加流动相a稀释至刻度摇匀，过滤，取续虑液作为碱液体破坏供试品溶液；空白溶剂1ml，同法配制空白溶剂破坏溶液；空白辅料60mg、同法配制空白辅料破坏溶液。量取空白溶剂1ml，同法配制空白溶剂破坏溶液。
[0111]
原料药储备液：取盐酸文拉法辛原料药200mg置于10ml的容量瓶中，加流动相a适量，超声10min，取出，放冷用流动相稀释至刻度摇匀，过滤，取续虑液即得；
[0112]
原料药未破坏：取分别精密量取空白溶剂、原料药储备液各1ml，分分别置于10ml的容量瓶中加流动相a稀释至刻度摇匀，滤过，取续虑液即得未破坏溶液；
[0113]
原料药氧化破坏：精密吸取空白溶剂、原料药储备液各1ml，置于10ml的容量瓶中加10％h2o2溶液1ml，置于沸水浴0.5h，取出，放冷加流动相a稀释至刻度摇匀，滤过，取续虑液即得；
[0114]
分别精密量取上述各溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，试验结果见下表。
[0115]
破坏试验结果(一)
[0116][0117][0118]
破坏试验结果(二)
[0119][0120]
破坏试验结论：本品经酸、碱、氧化、高温、光照破坏以后，均有所降解，主成分峰能与降解产物良好分离；各杂质峰之间分离度符合规定，其中氧化破坏、酸破坏降解产生的杂质较大。物料平衡范围(95.0％～103.2％)表明物料经降解试验后基本平衡。
[0121]
5、溶液稳定性
[0122]
系统适用性溶液：精密称取盐酸文拉法辛对照品和盐酸文拉法辛杂质d对照品适量加流动相a制成每1ml含盐酸文拉法辛对照品0.2mg和盐酸文拉法辛杂质d对照品20μg的混合对照。
[0123]
混合对照溶液：精密称取盐酸文拉法辛对照品和盐酸文拉法辛杂质a、b、c、d、f、g、h对照品适量加流动相a制成每1ml含盐酸文拉法辛对照品0.2mg和盐酸文拉法辛杂质a、b、c、d、f、g、h对照品20μg的混合对照。
[0124]
供试品溶液：样品制备方法为取本品细粉0.8g，置100ml量瓶中，加适量的流动相a，超声10min，放冷，用流动相a稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液供试品溶液。
[0125]
自身对照溶液：精密量取供试品溶液0.2ml，置100ml量瓶中，用流动相a溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
[0126]
在室温下放置，分别在0h、4h、8h、12h、24h、56h时分别精密量取上述各溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，根据峰面积计算rsd值。
[0127]
检测结果见下表。
[0128]
混合杂质对照品溶液稳定性结果
[0129][0130]
系统适用性溶液、供试品溶液、自身对照溶液稳定性结果
[0131][0132]
由结果可知，系统适用性溶液、混合对照溶液、供试品溶液、自身对照溶液室温放置0h、4h、8h、12h、24h、56h小时，杂质谱基本一致，杂质峰面积和自身对照溶液峰面积无明显变化，rsd值均小于2.0％，说明供试品溶液和自身对照溶液在室温下放置56h稳定。
[0133]
6、限度
[0134]
(1)定量限
[0135]
储备液的制备：
[0136]
取盐酸文拉法辛对照品10.61mg，置100ml容量瓶中，用流动相a溶解并定容，作为盐酸文拉法辛对照品储备液；
[0137]
取盐酸文拉法辛杂质杂质a对照品10.20mg，置100ml容量瓶中，用流动相a溶解并定容，作为盐酸文拉法辛杂质a对照品储备液；
[0138]
取盐酸文拉法辛杂质杂质b对照品10.27mg，置100ml容量瓶中，用流动相a溶解并定容，作为盐酸文拉法辛杂质b对照品储备液；
[0139]
取盐酸文拉法辛杂质杂质c对照品10.23mg，置100ml容量瓶中，用流动相a溶解并定容，作为盐酸文拉法辛杂质c对照品储备液；
[0140]
取盐酸文拉法辛杂质杂质d对照品10.16mg，置100ml容量瓶中，用流动相a溶解并定容，作为盐酸文拉法辛杂质d对照品储备液；
[0141]
取盐酸文拉法辛杂质杂质f对照品10.32mg，置100ml容量瓶中，用流动相a溶解并定容，作为盐酸文拉法辛杂质f对照品储备液；
[0142]
取盐酸文拉法辛杂质杂质g对照品10.60mg，置100ml容量瓶中，用流动相a溶解并定容，作为盐酸文拉法辛杂质g对照品储备液；
[0143]
取盐酸文拉法辛杂质杂质h对照品10.15mg，置100ml容量瓶中，用流动相a溶解并定容，作为盐酸文拉法辛杂质h对照品储备液。
[0144]
定量限溶液的配制：
[0145]
盐酸文拉法辛对照品定量限溶液的配制：精密量取盐酸文拉法辛对照品储备液0.65ml，置100ml容量瓶中，用流动相a稀释至刻度，摇匀，即得。精密吸取20μl注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图，计算信噪比s/n；
[0146]
盐酸文拉法辛杂质a、b、c、d、f、g、h混合对照品定量限溶液的配制：分别精密量取盐酸文拉法辛杂质a、b、c、d、f、g、h对照品储备液0.5ml，0.8ml，1.0ml，1.0ml，1.0ml，1.8ml，1.6ml置于同一200ml容容量瓶中用流动相a稀释至刻度，摇匀，即得。精密吸取20μl注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图，计算信噪比s/n；
[0147]
试验结果见下表。
[0148]
定量限结果：
[0149]
[0150][0151]
由结果可知，盐酸文拉法辛的定量限为13.8ng，盐酸文拉法辛杂质a定量限为5.1ng，盐酸文拉法辛杂质b定量限为8.2ng，盐酸文拉法辛杂质c定量限为10.2ng，盐酸文拉法辛杂质d定量限为10.1ng，盐酸文拉法辛杂质f定量限为10.3ng，盐酸文拉法辛杂质g定量限为19.0ng，盐酸文拉法辛杂质h定量限为16.2ng。
[0152]
(2)检测限
[0153]
盐酸文拉法辛检测限溶液的配制：取盐酸文拉法辛定量限溶液3.0ml至10ml容量瓶中，用流动相a定容至刻度，摇匀，作为盐酸文拉法辛检测限溶液；
[0154]
盐酸文拉法辛杂质a、b、c、d、f、g、h混合对照品检测限溶液的配制：分别精密量取盐酸文拉法辛杂质a、b、c、d、f、g、h对照品储备液0.4ml，0.8ml，1.0ml，1.0ml，1.0ml，1.8ml，1.6ml置于同一200ml容容量瓶中用流动相a稀释至刻度，摇匀，再精密量取3.0ml至10ml容
量瓶中，用流动相a定容至刻度，摇匀即得。
[0155]
精密量取20μl注入液相色谱仪，连续进样3次，记录色谱图，计算信噪比s/n；试验结果见下表。
[0156]
检测限结果
[0157][0158]
由结果可知，盐酸文拉法辛的检测限为4.1ng，盐酸文拉法辛杂质a检测限为1.2ng，盐酸文拉法辛杂质b检测限为2.5ng，盐酸文拉法辛杂质c检测限为3.1ng，盐酸文拉法辛杂质d检测限为3.0ng，盐酸文拉法辛杂质f检测限为3.1ng，盐酸文拉法辛杂质g检测限为5.7ng，盐酸文拉法辛杂质h检测限为4.8ng。
[0159]
7、线性与范围
[0160]
取限度项下盐酸文拉法辛对照品储备液、盐酸文拉法辛杂质a对照品储备液、盐酸文拉法辛杂质c对照品储备液、盐酸文拉法辛杂质d对照品储备液、盐酸文拉法辛杂质f对照品储备液、盐酸文拉法辛杂质g对照品储备液稀释制成不同浓度的溶液，各精密量取20μl注入液相色谱仪，平行进样2次，记录色谱图。并以浓度为x轴，平均峰面积为y轴，作线性图，用最小二乘法计算回归方程。试验结果见下表。盐酸文拉法辛杂质a、杂质c、杂质d、杂质f、杂质g、盐酸文拉法辛有关物质线性图见附图1-6。线性与范围：
[0161][0162]
[0163]
实验结论：盐酸文拉法辛杂质a线性回归方程为y＝40095x+571.25，相关系数r＝0.99990，进样量为20μl时，在0.25μg/ml～6.08μg/ml范围内呈良好的线性关系；
[0164]
盐酸文拉法辛杂质c线性回归方程为y＝35593x-419.19，相关系数r＝0.99990，进样量为20μl时，在0.51μg/ml～6.11μg/ml范围内呈良好的线性关系；
[0165]
盐酸文拉法辛杂质d线性回归方程为y＝35120x-324.08，相关系数r＝1.00000，进样量为20μl时，在0.51μg/ml～6.08μg/ml范围内呈良好的线性关系；
[0166]
盐酸文拉法辛杂质f线性回归方程为y＝40682x-2268.9，相关系数r＝0.99990，进样量为20μl时，在0.51μg/ml～6.18μg/ml范围内呈良好的线性关系；
[0167]
盐酸文拉法辛杂质g线性回归方程为y＝30005x-3858.9，相关系数r＝0.99985，进样量为20μl时，在0.95μg/ml～6.34μg/ml范围内呈良好的线性关系；
[0168]
盐酸文拉法辛线性回归方程为y＝35466x-2630，相关系数为r＝0.99995，进样量为20μl时，在0.69μg/ml～42.40μg/ml范围内呈良好的线性关系。
[0169]
同时根据盐酸文拉法辛与杂质a的线性方程斜率，计算出校正因子为0.9；盐酸文拉法辛与杂质c的线性方程斜率，计算出校正因子为1.0；盐酸文拉法辛与杂质d的线性方程斜率，计算出校正因子为1.0；盐酸文拉法辛与杂质f的线性方程斜率，计算出校正因子为0.9；盐酸文拉法辛与杂质g的线性方程斜率，计算出校正因子为1.2；参考usp42-nf37色谱法及中国药典校正因子在0.9-1.2之间可采用不加校正因子的主成分自身对照法进行定量分析。
[0170]
8、精密度
[0171]
(1)进样精密度
[0172]
精密称取盐酸文拉法辛对照适量，配制成每1ml含4μg的溶液作为盐酸文拉法辛对照品溶液；
[0173]
分别精密称取盐酸文拉法辛杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质f、杂质g、杂质h对照适量，配制成每1ml含4μg的溶液作为盐酸文拉法辛对照品混合溶液；
[0174]
称取盐酸文拉法辛片细粉0.8g，置100ml量瓶中，加流动相a适量，超声10min，取出、放冷，用流动相a稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
[0175]
精密量取供试品溶液0.2ml置100ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度，摇匀，即得自身对照溶液；
[0176]
精密量取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。连续进样6次，计算保留时间和峰面积rsd值，试验结果见下表。
[0177]
进样精密度1-混合对照品：
[0178]
[0179][0180]
进样精密度2-自身对照溶液及供试品溶液
[0181][0182]
实验结论：由试验结果可知，供试品溶液连续进样6次，已知杂质个数、已知杂质、其他单个最大杂质、自身对照溶液峰面积基本一致；混合对照溶液及盐酸文拉法辛对照品溶液连续进样6次的各成分的峰面积的rsd值均小于2.0％，各组分保留时间的rsd值均小于1.0％。说明进样精密度良好。
[0183]
(2)重复性
[0184]
取本品的细粉0.8g(约相当于盐酸文拉法辛200mg)，置100ml量瓶中，加流动相a溶液适量，超声10min使盐酸文拉法辛溶解，放冷，用流动相a溶液稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，同法配制6份样品；精密量取0.2ml，置100ml量瓶中，用流动相a稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。精密量取上述各溶液20μl，注入液相色谱
仪，记录色谱图，试验结果见下表。
[0185]
重复性结果
[0186][0187]
实验结论：由结果可知，6次测定结果的各杂质峰数一致，已知杂质含量、其他杂质含量及杂质之和的含量基本一致，均小于0.1％，说明该方法具有良好的重复性。
[0188]
(3)中间精密度
[0189]
由不同操作者、在不同日期、不同仪器进行试验。
[0190]
取本品的细粉0.8g(约相当于盐酸文拉法辛200mg)，置100ml量瓶中，加流动相a溶液适量，超声10min使盐酸文拉法辛溶解，放冷，用流动相a溶液稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，同法配制6份样品；精密量取0.2ml，置100ml量瓶中，用流动相a稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液，平行配制6份。精密量取上述各溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，试验结果见下表。
[0191]
中间精密度结果
[0192][0193]
实验结论：由结果可知，与重复性试验结果进行比较，12次测定已知杂质的含量基本一致，单杂和总杂含量均小于0.1％，说明该方法具有良好的中间精密度。
[0194]
9、准确度(回收率)
[0195]
取盐酸文拉法辛杂质a对照品适量，用流动相a溶液制成每1ml约含0.1mg的溶液，
作为盐酸文拉法辛杂质a对照品储备液；
[0196]
取盐酸文拉法辛杂质c对照品适量，用流动相a溶液制成每1ml约含0.1mg的溶液，作为盐酸文拉法辛杂质c对照品储备液；
[0197]
取盐酸文拉法辛杂质d对照品适量，用流动相a溶液制成每1ml约含0.1mg的溶液，作为盐酸文拉法辛杂质d对照品储备液；
[0198]
取盐酸文拉法辛杂质f对照品适量，用流动相a溶液制成每1ml约含0.1mg的溶液，作为盐酸文拉法辛杂质f对照品储备液；
[0199]
取盐酸文拉法辛杂质g对照品适量，用流动相a溶液制成每1ml约含0.1mg的溶液，作为盐酸文拉法辛杂质g对照品储备液；
[0200]
50％浓度水平供试品溶液：取空白辅料0.6g，置100ml量瓶中，分别精密量取2ml的上述对照品储备液于同一量瓶中，加流动相a适量，超声10min，取出放冷，用流动相a稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得，平行制备三份。
[0201]
100％浓度水平供试品溶液：取空白辅料0.6g，置100ml量瓶中，分别精密量取4ml的上述对照品储备液于同一量瓶中，加流动相a适量，超声10min，取出放冷，用流动相a稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得，平行制备三份。
[0202]
150％浓度水平供试品溶液：取空白辅料0.6g，置100ml量瓶中，分别精密量取6ml的上述对照品储备液于同一量瓶中，加流动相a适量，超声10min，取出放冷，用流动相a稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得，平行制备三份。
[0203]
精密量取上述各溶液10μl，注入液相色谱仪，每份样品连续进样2次；试验结果见下表。
[0204]
回收率结果
[0205]
[0206][0207]
由结果可知，本品杂质a、杂质c、杂质d、杂质f、杂质g的回收率均在92％～105％范围内，回收率rsd≤2.0％，说明本方法准确度良好。
[0208]
10、耐用性
[0209]
系统适用性溶液的配制：取盐酸文拉法辛及盐酸文拉法辛杂质d对照品适量，制成每1ml含盐酸文拉法辛0.2mg和盐酸文拉法辛杂质d20μg的溶液作为系统适用性溶液。
[0210]
混合对照溶液配制：取盐酸文拉法辛对照品，盐酸文拉法辛杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质f、杂质g、杂质h对照品适量，配成每1ml含盐酸文拉法辛0.2mg，盐酸文拉法辛杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质f、杂质g、杂质h 20μg的溶液作为混合对照溶液。
[0211]
空白溶剂：即为流动相a。
[0212]
空白辅料溶液的配制：精密称取空白辅料600mg，同法配制空白辅料溶液。
[0213]
供试品溶液的配制：取本品的细粉适量(约相当于文拉法辛200mg)，置100ml量瓶中，加流动相a溶液适量，超声10min使溶解，放冷，用流动相a溶液稀释至刻度，摇匀，经0.45
μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
[0214]
自身对照溶液的配制：精密量取供试品溶液0.2ml置100ml量瓶中，用流动相a溶液稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液。
[0215]
①
正常条件
[0216]
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以三乙胺-乙腈-水(1:20:80)，用磷酸调节ph至3.5，作为流动相a；以三乙胺-乙腈-水(1:50:50)，用磷酸调节ph至3.5，作为流动相b；按照下表梯度程序进行洗脱。检测波长为226nm，流速为1.0ml/min，进样体积20μl。柱温30℃。
[0217][0218]
②
不同检测波长
[0219]
分别设置检测波长226nm
±
2nm，其他按照正常条件色谱条件，精密吸取系统适用性溶液、空白溶剂、空白辅料、混合对照溶液、供试品溶液、自身溶液各溶液20μl，注入液相色谱仪。
[0220]
③
不同流速
[0221]
分别设置流速1.0
±
0.1ml/min，其他按照正常条件色谱条件，精密吸取系统适用性溶液、空白溶剂、空白辅料、混合对照溶液、供试品溶液、自身溶液各溶液20μl，注入液相色谱仪。
[0222]
④
不同柱温
[0223]
分别设置柱温30℃
±
5℃，其他按照正常条件色谱条件，精密吸取系统适用性溶液、空白溶剂、空白辅料、混合对照溶液、供试品溶液、自身溶液各溶液20μl，注入液相色谱仪。
[0224]
⑤
流动相a不同ph值
[0225]
分别设置流动相a ph值为3.5
±
0.2，其他按照正常条件色谱条件，精密吸取系统适用性溶液、空白溶剂、空白辅料、混合对照溶液、供试品溶液、自身溶液各溶液20μl，注入液相色谱仪。
[0226]
⑥
流动相b不同ph值
[0227]
分别设置流动相b ph值为3.5
±
0.2，其他按照正常条件色谱条件，精密吸取系统适用性溶液、空白溶剂、空白辅料、混合对照溶液、供试品溶液、自身溶液各溶液20μl，注入液相色谱仪。
[0228]
⑦
不同色谱柱
[0229]
分别采用不同批号色谱柱、不同品牌的色谱柱，其他按照正常条件色谱条件，精密吸取系统适用性溶液、空白溶剂、空白辅料、混合对照溶液、供试品溶液、自身溶液各溶液20μl，注入液相色谱仪。
[0230]
记录色谱图，检测结果见下表。
[0231]
耐用性结果(一)
[0232][0233]
耐用性结果(二)
[0234][0235][0236]
耐用性结果(三)
[0237][0238][0239]
实验结论：由结果可知，色谱条件中的参数：柱温、流速、波长、流动相的ph值、色谱柱等参数作适度调整，系统适用性溶液中各成分的分离度均符合要求，各杂质相对保留时间没有显著改变，有关物质的检测结果基本没有显著性影响，检出杂质个数基本一致，杂质含量基本一致，相对保留时间rsd％均小于6％，系统适用性溶液中各成分的分离度均符合要求，说明该方法的耐用性是可接受的。