肺癌生物标志物及其用途

本发明涉及医学诊断领域，具体的说是，利用血清代谢组学筛选生物标志物并利用这些生物标志物对肺癌进行诊断或区分，尤其是进行良性肺结节和肺癌的区分。

背景技术：

1、肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，并且为死亡率最高的癌症之一。2018年我国发布的最新数据显示，我国新发肺癌病例210万，居恶性肿瘤首位，占所有肿瘤死亡病例的18.4％(排名第一)，死亡人数为180万(排名第一)，占恶性肿瘤死因四分之一以上。早期诊断对于提高肿瘤病人的治疗预后生存率有重要意义。目前，肺癌的确诊主要依赖于有创性的穿刺术以及支气管镜检查取得组织或细胞进行病理检查。而ct影像学检查则是主要的辅助诊断手段，而对于肺内小结节良性或者恶性病变的鉴别诊断，仍存在一定挑战。肺癌血清学检查，如癌胚抗原、角蛋白片段、鳞状上皮细胞癌抗原等可作为肺癌的辅助诊断或随访监测，但目前灵敏度和特异度仍待提高。

2、近年来，随着质谱技术的高速发展，代谢组学(metabolomics)在疾病诊断中的应用研究也逐渐被广泛关注。代谢组学是对机体中相对分子量小于1,000的小分子代谢产物进行定性和定量分析的一门新学科。代谢组(metabolome)是指某一生物或细胞在特定生理时期内所有的低分子量代谢产物，而细胞内许多生命活动是发生在代谢物层面的。因此，代谢组的检测与鉴定，可以判断机体的病理生理状态，并有可能找出与之发病机制相关的标志物。由此可见，代谢组学在临床医学领域具有广泛的应用前景。血清中的代谢物是稳定的并且可以量化的，这为临床应用提供了一种无创诊断的可能性。

3、目前，临床上还没有可用于诊断肺癌或者用于鉴别诊断肺部肿瘤与良性结节的代谢标志物，而对于显示肺部结节的病人是否就是肺癌患者的鉴别诊断在临床上具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明通过采集健康人、良性肺结节病人、肺癌(肺部恶性肿瘤)病人血清样本，利用液相色谱-高分辨质谱联用(lc-hrms)，对以上三类样本进行了代谢组学分析与代谢谱图(profiling)的分型，筛选出健康人、良性肺结节病人、肺癌病人之间的生物标志物。

2、本发明的目的：寻找健康人与肺癌病人之间、良性肺结节病人与肺癌病人之间的代谢生物标志物，以用于肺癌的诊断，特别是用于早期鉴别诊断有结节病人是否患有肺癌。

3、本发明一方面是提供一种方法，该方法基于血清代谢组学对肺癌生物标志物进行筛选，具体步骤如下：

4、(1)收集肺癌、良性肺结节和健康人血清样本；

5、(2)提取血清代谢物；

6、(3)采用液相-质谱联用对提取的血清代谢物进行检测及数据预处理；

7、(4)利用偏最小二乘判别分析对样本分群，根据倍数变化(fc)和显著性分析(fdr)，筛选不同分组的差异代谢物或者差异的生物标志物；

8、(5)根据筛选得到的差异代谢物，挖掘肺癌的生物标志物以及这些标志物的应用，例如：如何利用这些标记物来诊断或者预测肺癌患者，或者从健康人群或者结节人群中鉴别诊断出肺癌患者。

9、在一些方式中，所述步骤(1)的具体实现为：血清样本来自不同性别和年龄段的肺癌、良性肺结节和健康人。在这里所谓的肺癌、良性肺结节和健康人群是已经过诊断确认的，比如经过组织学或者后期症状确认肺癌患者、肺结节人群(良性)或者健康人群(无结节人群)。

10、在一些方式中，所述步骤(2)的具体实现为：血清代谢物的提取采用甲基叔丁基醚:甲醇:水(10:3:2.5，v/v/v)三相萃取，具体步骤为：向50μl血清中依次加入甲醇、甲基叔丁基醚，冰上震荡孵化1小时后，再加入水，涡旋震荡后离心，取下层清液到低温真空干燥仪中旋干，得到的血清代谢物干提物放置-80℃冰箱中保存。

11、考虑到样本前处理的批次效应，本研究在每批实验样本处理的同时都随批处理一个参比血清样本(reference serum)，以用于后续数据校正。

12、所述步骤(3)的具体实现为：对血清代谢物干提物进行复溶，离心后取上清液制成待测样本，所有样本采用液相色谱-高分辨质谱联用(lc-hrms)进行检测。对原始数据提取m/z离子、保留时间和峰面积，并进行数据归一化，最后搜索数据库鉴定，得到的数据矩阵进行后续分析。

13、进一步地，所述步骤(4)的具体实现为：对液相色谱-高分辨质谱数据矩阵进行数据过滤，剩余数据利用偏最小二乘判别分析进行样本分群，肺癌、良性肺结节和健康组三组可得到明显的聚类分群。

14、在一些方式中，所述步骤(5)的具体实现为：筛选fdr值小于0.05同时fc值大于1or小于0.83的化合物作为差异代谢物。另外，结合生物学意义，挖掘肺癌、良性肺结节和健康人的差异代谢标志物，并利用二元逻辑回归建立肺癌鉴别模型。

15、本发明的第二方面，提供生物标志物在用于诊断肺癌检测试剂中的用途，所述生物标志物选择如下的一种或者几种：2-trans,4-cis-decadienoylcarnitine、octanoylcarnitine、decanoylcarnitine、2-octenoylcarnitine、hexanoylcarnitine、3-hydroxydodecanoylcarnitine、3-hydroxydecanoylcarnitine、3-hydroxyoctanoylcarnitine、ecgonine、trimethylamine n-oxide、1-methylnicotinamide、3-chlorotyrosine、homo-l-arginine、serotonin、alanine、alpha-eleostearic acid、ethyl 3-oxohexanoate、inosine、arabinosylhypoxanthine、hippuricacid、cyclohexaneacetic acid、lactic acid、2-ketobutyric acid、pyruvic acid、hypoxanthine、xanthine、n6,n6,n6-trimethylysine、kynurenine、cis-5-tetradecenoylcarnitine、docosahexaenoic acid、choline sulfate、dihydrothymine、17-hydroxypregnenolone sulfate、pregnenolone sulfate、tiglylcarnitine、propionylcarnitine、3-hydroxybutyrylcarnitine、oxindole、nicotine、ergothioneine、phenylacetylglutamine、citrulline、lysine、aminocaproic acid、methylimidazoleacetic acid。

16、在一些方式中，所述生物标志物选择如下的一种或者几种：decanoylcarnitine、17-hydroxypregnenolone sulfate、pregnenolone sulfate、tiglylcarnitine、oxindole、phenylacetylglutamine、aminocaproic acid、methylimidazoleacetic acid。

17、在一些方式中，所述生物标志物选择如下的一种或者几种：2-trans,4-cis-decadienoylcarnitine、octanoylcarnitine、decanoylcarnitine、2-octenoylcarnitine、hexanoylcarnitine、3-hydroxydodecanoylcarnitine、3-hydroxydecanoylcarnitine、3-hydroxyoctanoylcarnitine、ecgonine、trimethylamine n-oxide、1-methylnicotinamide、3-chlorotyrosine、homo-l-arginine、serotonin、alanine、alpha-eleostearic acid、ethyl 3-oxohexanoate、inosine、arabinosylhypoxanthine、hippuricacid、cyclohexaneacetic acid、lactic acid、2-ketobutyric acid、pyruvic acid、hypoxanthine、xanthine。这些生物标志物在肺癌与健康人群以及肺癌与良性肺结节人群中均存在显著性差异，说明其与肺癌的关系密切，不受是否有良性肺结节的影响，能用于鉴别诊断或区分肺癌与良性肺结节，也能用于鉴别诊断或区分肺癌与健康(无结节)个体。

18、在一些方式中，在进行诊断无肺结节个体是否患有肺癌时，所述生物标志物选自下述的一种或几种：2-trans,4-cis-decadienoylcarnitine、octanoylcarnitine、decanoylcarnitine、2-octenoylcarnitine、hexanoylcarnitine、3-hydroxydodecanoylcarnitine、3-hydroxydecanoylcarnitine、3-hydroxyoctanoylcarnitine、ecgonine、trimethylamine n-oxide、1-methylnicotinamide、3-chlorotyrosine、homo-l-arginine、serotonin、alanine、alpha-eleostearic acid、ethyl 3-oxohexanoate、inosine、arabinosylhypoxanthine、hippuricacid、cyclohexaneacetic acid、lactic acid、2-ketobutyric acid、pyruvic acid、hypoxanthine、xanthine、n6,n6,n6-trimethylysine、tiglylcarnitine、propionylcarnitine、3-hydroxybutyrylcarnitine、oxindole、nicotine、ergothioneine、phenylacetylglutamine、citrulline、lysine、aminocaproic acid、methylimidazoleacetic acid。其中，n6,n6,n6-trimethylysine、tiglylcarnitine、propionylcarnitine、3-hydroxybutyrylcarnitine、oxindole、nicotine、ergothioneine、phenylacetylglutamine、citrulline、lysine、aminocaproic acid、methylimidazoleacetic acid。这些生物标志物在肺癌和健康(无结节)人群间存在显著性差异，在肺癌与良性肺结节人群间无显著性差异，说明这些生物标志物是区分肺癌与健康(无结节)优选的、特有的生物标志物。

19、在一些方式中，在进行诊断有肺结节个体是否患有肺癌时，所述生物标志物选自下述的一种或几种：2-trans,4-cis-decadienoylcarnitine、octanoylcarnitine、decanoylcarnitine、2-octenoylcarnitine、hexanoylcarnitine、3-hydroxydodecanoylcarnitine、3-hydroxydecanoylcarnitine、3-hydroxyoctanoylcarnitine、ecgonine、trimethylamine n-oxide、1-methylnicotinamide、3-chlorotyrosine、homo-l-arginine、serotonin、alanine、alpha-eleostearic acid、ethyl 3-oxohexanoate、inosine、arabinosylhypoxanthine、hippuricacid、cyclohexaneacetic acid、lactic acid、2-ketobutyric acid、pyruvic acid、hypoxanthine、xanthine、kynurenine、cis-5-tetradecenoylcarnitine、docosahexaenoicacid、choline sulfate、dihydrothymine、17-hydroxypregnenolone sulfate、pregnenolone sulfate。其中，kynurenine、cis-5-tetradecenoylcarnitine、docosahexaenoic acid、choline sulfate、dihydrothymine、17-hydroxypregnenolonesulfate、pregnenolone sulfate。这些生物标志物在肺癌和良性肺结节人群间存在显著性差异，在肺癌与健康(无结节)人群间无显著性差异，说明这些生物标志物是区分肺癌与良性肺结节优选的、特有的生物标志物。这些生物标志物更有实际意义，当在进行体检或者诊断过程中，一般发现具有结节的时候，才有进一步检测是否具有癌变的可能性，这个时候，除了常规的穿刺活检之外，一个有效的初步筛选的方式就是检测血液样本中以上生物标志物的一种或者多种是否出现变化或者异常，例如显著变化来进行初步的筛查。

20、本发明的第三方面，建立了多种生物标志物联合鉴别肺癌与健康(无结节)或肺癌与良性肺结节的模型。

21、在一些方式中，所述模型用于区分或鉴别肺癌与良性肺结节患者时，或者鉴别肺结节患者是否患有肺癌时，所述模型包括如下的一种或多种：

22、模型a：ln[p/(1-p)]＝2.29×m1+1.02×m2+0.64×m3+0.62×m4+0.47×m5+0.42×m6+0.38×m7+0.26×m8+0.05×m9+0.03×m10-0.05×m11-0.12×m12-0.16×m13-0.17×m14-0.36×m15-0.4×m16-0.45×m17-0.46×m18-0.47×m19-0.53×m20-0.55×m21-0.79×m22-0.95×m23-1.02×m24-1.19×m25-1.52×m26-1.88×m27+4.01，m1～m27分别为hypoxanthine、alanine、2-ketobutyric acid、2-trans,4-cis-decadienoylcarnitine、xanthine、17-hydroxypregnenolone sulfate、dihydrothymine、octanoylcarnitine、lactic acid、pregnenolone sulfate、3-chlorotyrosine、cyclohexaneacetic acid、choline sulfate、trimethylamine n-oxide、2-octenoylcarnitine、1-methylnicotinamide、serotonin、docosahexaenoic acid、decanoylcarnitine、alpha-eleostearic acid、homo-l-arginine、pyruvic acid、3-hydroxydecanoylcarnitine、ecgonine、kynurenine、ethyl 3-oxohexanoate、arabinosylhypoxanthine的相对丰度；

23、模型b：ln[p/(1-p)]＝1.11×m1+0.25×m2+0.13×m3+0.09×m4+0.05×m5-0.01×m6-0.02×m7-0.02×m8-0.04×m9-0.11×m10-0.12×m11-0.19×m12-0.3×m13-0.34×m14-0.45×m15-0.46×m16-0.64×m17-0.68×m18-0.95×m19+2.17，m1～m19分别为hypoxanthine、alanine、2-ketobutyric acid、17-hydroxypregnenolone sulfate、dihydrothymine、trimethylamine n-oxide、serotonin、3-chlorotyrosine、hippuricacid、docosahexaenoic acid、2-octenoylcarnitine、1-methylnicotinamide、homo-l-arginine、alpha-eleostearic acid、kynurenine、3-hydroxydecanoyl carnitine、ecgonine、ethyl 3-oxohexanoate、arabinosylhypoxanthine的相对丰度；

24、模型c：ln[p/(1-p)]＝1.73×m1+0.72×m2+0.31×m3+0.29×m4+0.23×m5+0.15×m6-0.05×m7-0.07×m8-0.07×m9-0.09×m10-0.09×m11-0.16×m12-0.26×m13-0.26×m14-0.27×m15-0.29×m16-0.43×m17-0.45×m18-0.56×m19-0.75×m20-0.87×m21-1.15×m22-1.41×m23+3.07，m1～m23分别为hypoxanthine、alanine、2-ketobutyricacid、17-hydroxypregnenolone sulfate、dihydrothymine、xanthine、3-chlorotyrosine、cyclohexaneacetic acid、choline sulfate、decanoylcarnitine、trimethylamine n-oxide、2-octenoylcarnitine、pyrumic acid、docosahexaenoic acid、1-methylnicotinamide、serotonin、homo-l-arginine、alpha-eleostearic acid、3-hydroxydecanoyl carnitine、ecgonine、kynurenine、ethyl 3-oxohexanoate、arabinosylhypoxanthine的相对丰度；

25、模型d：ln[p/(1-p)]＝2.35×m1+1.03×m2+0.71×m3+0.68×m4+0.48×m5+0.45×m6+0.42×m7+0.39×m8+0.16×m9+0.03×m10-0.05×m11-0.12×m12-0.17×m13-0.17×m14-0.22×m15-0.39×m16-0.43×m17-0.46×m18-0.49×m19-0.54×m20-0.54×m21-0.57×m22-0.89×m23-0.97×m24-1.07×m25-1.23×m26-1.56×m27-1.93×m28+4.16，m1～m28分别为hypoxanthine、alanine、2-ketobutyric acid、2-trans,4-cis-decadienoylcarnitine、xanthine、octanoylcarnitine、17-hydroxypregnenolonesulfate、dihydrothymine、lactic acid、pregnenolone sulfate、3-chlorotyrosine、cyclohexaneacetic acid、choline sulfate、trimethylamine n-oxide、hexanoylcarnitine、2-octenoylcarnitine、1-methylnicotinamide、serotonin、docosahexaenoic acid、decanoylcarnitine、alpha-eleostearic acid、homo-l-arginine、pyruvic acid、3-hydroxydecanoyl carnitine、ecgonine、kynurenine、ethyl3-oxohexanoate、arabinosylhypoxanthine的相对丰度；

26、其中，模型a至d的临界值分别为0.455、0.511、0.452、0.458。将测得血液样本中各生物标志物的相对丰度带入模型方程，计算p值。当p值大于临界值时，则说明所测血液样本来自肺癌患者的可能性高，当p值小于临界值时，则说明所测血液样本来自良性肺结节个体的可能性高。

27、在一些方式中，所述模型用于区分或鉴别肺癌与健康(无结节)个体时，其模型包括如下的一种或多种：

28、模型e：ln[p/(1-p)]＝1.41×v1+0.26×v2+0.04×v3-0.01×v4-0.05×v5-0.09×v6-0.19×v7-0.2×v8-0.32×v9-0.34×v10-0.4×v11-0.48×v12-0.55×v13-0.64×v14-1.07×v15-1.58×v16+3.44，v1～v16分别为hypoxanthine、alanine、2-ketobutyricacid、3-hydroxybutyrylcarnitine、nicotine、hippuric acid、citrulline、trimethylamine n-oxide、alpha-eleostearic acid、1-methylnicotinamide、3-hydroxydecanoylcarnitine、ecgonine、ethyl 3-oxohexanoate、2-trans,4-cis-decadienoylcarnitine、arabinosylhypoxanthine、lysine的相对丰度；

29、模型f：ln[p/(1-p)]＝1.51×v1+0.29×v2+0.06×v3-0.03×v4-0.03×v5-0.03×v6-0.07×v7-0.1×v8-0.21×v9-0.22×v10-0.33×v11-0.35×v12-0.39×v13-0.51×v14-0.59×v15-0.63×v16-1.12×v17-1.69×v18+3.65，v1～v18分别为hypoxanthine、alanine、2-ketobutyric acid、3-hydroxybutyryl carnitine、decanoylcarnitine、ergothioneine、nicotine、hippuric acid、trimethylamine n-oxide、citrulline、alpha-eleostearic acid、1-methylnicotinamide、3-hydroxydecanoyl carnitine、ecgonine、ethyl 3-oxohexanoate、2-trans,4-cis-decadienoylcarnitine、arabinosylhypoxanthine、lysine的相对丰度；

30、模型g：ln[p/(1-p)]＝1.67×v1+0.34×v2+0.1×v3+0.01×v4-0.08×v5-0.08×v6-0.09×v7-0.1×v8-0.12×v9-0.23×v10-0.27×v11-0.36×v12-0.36×v13-0.38×v14-0.56×v15-0.61×v16-0.66×v17-1.2×v18-1.89×v19+4，v1～v19分别为hypoxanthine、alanine、2-ketobutyric acid、aminocaproic acid、3-hydroxybutyrylcarnitine、ergothioneine、decanoylcarnitine、nicotine、hippuric acid、trimethylamine n-oxide、citrulline、3-hydroxydecanoyl carnitine、alpha-eleostearic acid、1-methylnicotinamide、ecgonine、2-trans,4-cis-decadienoylcarnitine、ethyl 3-oxohexanoate、arabinosylhypoxanthine、lysine的相对丰度；

31、模型h：ln[p/(1-p)]＝2.03×v1+0.47×v2+0.15×v3+0.09×v4+0.04×v5+0.03×v6+0.01×v7-0.12×v8-0.12×v9-0.13×v10-0.14×v11-0.14×v12-0.27×v13-0.36×v14-0.37×v15-0.37×v16-0.4×v17-0.43×v18-0.59×v19-0.63×v20-0.75×v21-1.37×v22-2.18×v23+4.56，v1～v22分别为hypoxanthine、alanine、2-ketobutyricacid、tiglylcarnitine、n6,n6,n6-trimethylysine、aminocaproic acid、oxindole、decanoylcarnitine、nicotine、ergothioneine、3-hydroxybutyryl carnitine、hippuricacid、trimethylamine n-oxide、lactic acid、citrulline、alpha-eleostearic acid、3-hydroxydecanoyl carnitine、1-methylnicotinamide、2-trans,4-cis-decadienoylcarnitine、ecgonine、ethyl 3-oxohexanoate、arabinosylhypoxanthine、lysine的相对丰度；

32、模型i：ln[p/(1-p)]＝3.08×v1+1.26×v2+0.7×v3+0.64×v4+0.41×v5+0.4×v6+0.38×v7+0.31×v8+0.31×v9+0.1×v10+0.09×v11+0.09×v12+0.04×v13-0.04×v14-0.04×v15-0.07×v16-0.12×v17-0.17×v18-0.24×v19-0.24×v20-0.26×v21-0.31×v22-0.32×v23-0.44×v24-0.44×v25-0.49×v26-0.53×v27-0.63×v28-0.73×v29-0.79×v30-0.81×v31-0.81×v32-0.85×v33-1.2×v34-1.62×v35-1.72×v36-3.68×v37+7.11，v1～v37分别为hypoxanthine、octanoylcarnitine、alanine、3-hydroxydodecanoyl carnitine、xanthine、2-ketobutyric acid、oxindole、tiglylcarnitine、n6,n6,n6-trimethylysine、cyclohexaneacetic acid、aminocaproicacid、methylimidazoleacetic acid、homo-l-arginine、pyruvic acid、2-octenoylcarnitine、propionylcarnitine、nicotine、serotonin、phenylacetylglutamine、hippuric acid、ergothioneine、3-hydroxybutyryl carnitine、alpha-eleostearic acid、inosine、citrulline、trimethylamine n-oxide、3-hydroxyoctanoyl carnitine、1-methylnicotinamide、3-hydroxydecanoyl carnitine、hexanoylcarnitine、decanoylcarnitine、ecgonine、2-trans,4-cis-decadienoylcarnitine、ethyl 3-oxohexanoate、lactic acid、arabinosylhypoxanthine、lysine的相对丰度。

33、其中，模型e至i的临界值分别为0.520、0.527、0.450、0.466、0.456。将测得血液样本中各生物标志物的相对丰度带入模型方程，计算p值。当p值大于临界值时，则说明所测血液样本来自肺癌患者的可能性高，当p值小于临界值时，则说明所测血液样本来自健康无结节健康个体的可能性高。

34、优选地，上述模型中生物标志物的相对丰度为测得的血清中生物标志物的相对丰度，如通过精密分析仪器，包括lc-uv、lc-ms、gc-ms等测定的血清中这些生物标志物的相对丰度值；通过免疫试剂盒测定的血清中这些生物标志物的相对丰度值等。

35、在一些方式中，这些模型可以被提前输入电脑系统，当获得生物标志物检测值的时候，通过电脑系统自动计算，从而获得诊断结果。因此，本发明可以提供用于区分肺癌与良性肺结节或健康无结节的系统，该系统包括运算模块，其中运算或者计算模块包括所述生物标志物中的一种或多种组合构建的模型或模型方程。

36、在一些方式中，所述系统还包括输出模块，用于输出计算结果的输出。

37、在一些方式中，所述系统还包括输入模块，输入模块用来输入前述生物标志物的一种或者多种检测结果，这种检测结果可以是定量检测结果或者定性结果。这里的模型建立并不是本发明列举的有限模型，只要应用本发明的范围内的生物标志物来建立模型进行肺癌诊断的，都是本发明所保护的范围。在一些方式中，还包括阴性对照或者参考数据模块。

38、在一些方式中，对每个生物标志物进行roc曲线分析，可以发现那些曲线下面积(auc值)大的标志物，从而挑选出来一个或多个生物标志物来建立诊断模型，获得更为可靠的诊断结果。一般可以理解，选择的生物标志物越多，建立的模型的可靠性可能越高，例如准确性越高和特异性越强，灵敏度越高，然而，也可以选择单一的或者几种重要的生物标志物来进行诊断，或者进行初步的筛查检测，其也能在一定程度上为诊断提供参考。特别地，单一生物标志物的诊断价值可能较低，但本技术新发现的多个生物标志物或新的生物标志物与已知生物标志物组合构建的模型的诊断价值可能是极高的。同时，也不是单个生物标志物的诊断价值越低，使用其构建多个生物标志物的组合模型时，其在模型中的权重就越低，例如，在肺癌与健康人鉴别中，单个丙氨酸auc值为0.591，单个2,4-癸二烯酰肉碱的auc值为0.746，说明单个2,4-癸二烯酰肉碱诊断价值高于单个丙氨酸，但是在多个生物标志物联合建立的模型a中，丙氨酸和2,4-癸二烯酰肉碱的权重系数分别为1.02(比值比2.77)和0.62(比值比1.86)，则说明模型a中丙氨酸的价值大于2,4-癸二烯酰肉碱，即以模型a区分肺癌与健康人时，丙氨酸对结果的影响反而大于2,4-癸二烯酰肉碱。同理，血清素、2-丁酮酸等单个auc值较小的生物标志物在多个生物标志物组合构建的模型中的权重系数(或比值比)都有可能高于单个auc值大的生物标志物，再此就不一一列举了。这进一步说明：即使是auc值很小的生物标志物，也不能否认其诊断价值，特别是其能与其他生物标志物组合使用，在组合模型中可能发挥着主要作用。

39、本发明的第四方面，提供一种用于肺癌筛查的试剂盒。该试剂盒中含有可以检测前述生物标志物中的一种或者多种的试剂，这种试剂可以是血液处理试剂，例如过滤、提取前述生物标志物的试剂，也包括直接用来直接或者检测生物标志物是否存在或者存在的量的试剂，例如抗体、抗原或者标记物质。

40、本发明的优势在于：公开了肺癌生物标记物的筛选方法，提供了用于区分或鉴别肺癌与健康(无结节)或良性肺结节的生物标记物，并建立了用于肺癌鉴别或区分的模型。特别地，对于在肺部有结节病人是否患有肺癌的鉴别诊断上，本发明提供的生物标志物及模型具有重要的临床诊断意义。