粪便形态学质控品及其制备方法与流程

本发明涉及医学检验，具体涉及粪便形态学质控品及其制备方法。

背景技术：

1、粪便有形成份检查是临床检验常规项目，是粪便常规检验不可缺少的组成部分，其中红细胞、白细胞、脂肪球、真菌及寄生虫卵等有形成分的识别对疾病的鉴别诊断、疗效观察、预后判断及科研与临床教学有重要价值。粪便形态学质控品在自动粪便处理分析系统中检测时，能准确的监控自动粪便处理分析系统的状态。虽然粪便有形成分检查已经在临床应用多年，但市面上并没有找到粪便有形成分的质控品。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供粪便形态学质控品及其制备方法，能够解决现有的自动粪便处理分析系统没有形态学质控品的问题；从而达到了能准确的监控自动粪便处理分析系统状态的目的。

2、本发明通过下述技术方案实现：

3、粪便形态学质控品的制备方法，所述粪便形态学质控品包括红细胞质控品、白细胞质控品、霉菌质控品和脂肪球质控品；

4、所述红细胞质控品的制备过程为：将向抗凝全血依次进行离心、重悬后摇床混匀、正立静置、重悬混匀检测，当氯化钠镜检溶液高倍视野中红细胞数量为20～30个/视野，获得红细胞质控品；

5、所述白细胞质控品的制备过程为：将抗凝全血进行离心、裂解、离心、重悬后摇床混匀、重悬混匀检测；当氯化钠镜检溶液高倍视野中白细胞数量为20～30个/视野，获得白细胞质控品；

6、所述霉菌质控品的制备过程为：将霉菌培养基溶液依次进行高温蒸汽灭菌、培养基培养、离心、重悬混匀检测，当氯化钠镜检溶液高倍视野中霉菌数量为20～30个/视野，获得霉菌质控品；

7、所述脂肪球质控品的制备过程为：将菜籽油和脂肪球缓冲液混匀获得脂肪球质控品。

8、通过本发明所述制备方法分别成功制备红细胞质控品、白细胞质控品、霉菌质控品和脂肪球质控品，通过对粪便形态学质控品(红细胞质控品、白细胞质控品、霉菌质控品和脂肪球质控品)的检测能准确的监控自动粪便处理分析系统的状态，确保了自动粪便分析系统在对粪便有形成分检测时的准确性。

9、进一步地，红细胞质控品的制备过程包括以下步骤：

10、s1a、将抗凝全血加入5～10倍全血体积的0.85％氯化钠溶液稀释混匀，离心5-8min，去掉上清，保留红细胞沉淀；

11、s2a、将红细胞沉淀用5～10倍全血体积的0.85％氯化钠溶液稀释混匀、离心去掉上清，保留红细胞沉淀，重复5～10次，对红细胞沉淀进行纯化处理；

12、s3a、将纯化好的红细胞沉淀用细胞保护剂溶液重悬，摇床混匀过夜；

13、s4a、固定好的红细胞于2℃～8℃环境正立静置48～72小时，待红细胞沉降完全后去除上层浮末和上清，保留固定好的红细胞沉淀；

14、s5a、将红细胞沉淀用3～6倍体积的细胞保护剂溶液重悬混匀，取混匀后的红细胞加入氯化钠溶液混匀，转移至粪便采集管中放置于自动粪便处理分析系统中进行检测；根据高倍视野中红细胞数量调整氯化钠溶液稀释红细胞的稀释倍数，以确保稀释后的溶液镜检高倍视野中红细胞数量为20～30个/视野；当稀释后的溶液镜检高倍视野中红细胞数量为20～30个/视野，获得红细胞质控品。

15、本发明的高倍视野为显微镜400倍放大后视野。

16、本发明的红细胞质控品与血液中正常红细胞形态一致，使用含1％～4％甲醛，0.14％磷酸氢二钠，0.024％磷酸二氢钾，0.8％氯化钠，0.02％氯化钾，ph为7.4的溶液，该溶液为等渗溶液，固定过程中不会应为细胞膜内外渗透压不同导致红细胞涨破或缩小，使红细胞固定前后形态一致。

17、进一步地，白细胞质控品的制备过程包括以下步骤：

18、s1b、将抗凝全血离心去上清；

19、s2b、加入5～10倍细胞沉淀体积tris-nh4cl溶液混匀，裂解5～8min后，300rpm离心2min，重复本步骤，直到红细胞裂解完全；

20、s3b、离心后的细胞沉淀用生理盐水重悬、离心去上清；

21、s4b、加入细胞保护剂重悬摇床混匀过夜；

22、s5b、取混匀后的白细胞加入氯化钠溶液混匀，转移至粪便采集管中放置于自动粪便处理分析系统中进行检测；根据高倍视野中白细胞数量调整氯化钠溶液稀释白细胞的稀释倍数，以确保稀释后的溶液镜检高倍视野中白细胞数量为20～30个/视野；当稀释后的溶液镜检高倍视野中白细胞数量为20～30个/视野，获得白细胞质控品。

23、本发明的白细胞质控品通过控制裂解时间，使全血中的红细胞充分裂解，而白细胞保持其原有的形态不变。

24、所述细胞保护剂溶液包括以下重量百分比组分：

25、1％～4％甲醛，0.14％磷酸氢二钠，0.024％磷酸二氢钾，0.8％氯化钠，0.02％氯化钾，ph为7.4。

26、进一步地，霉菌质控品的制备过程包括以下步骤：

27、s1c、将配制好的霉菌培养基溶液进行121℃高温蒸汽灭菌20-30min；

28、s2c、将霉菌菌种液接入灭菌后的培养基中，混匀后置于恒温摇床中28℃培养48小时；

29、s3c、将培养好的菌液离心后弃去上清，收集沉淀；

30、s4c、将过夜后的霉菌沉淀，用细胞保护剂溶液重悬后摇床混匀过夜；

31、s5c、取混匀后的霉菌菌液加入氯化钠溶液混匀，转移至粪便采集管中放置于自动粪便处理分析系统中进行检测；根据高倍视野中霉菌数量调整氯化钠溶液稀释霉菌的稀释倍数，以确保稀释后的溶液镜检高倍视野中霉菌数量为20～30个/视野；当稀释后的溶液镜检高倍视野中霉菌数量为20～30个/视野，获得霉菌质控品。

32、本发明的霉菌质控品通过控制霉菌培养时间，使霉菌处于对数生长期，此时固定的霉菌质控品形态较好，既有分裂后单个的霉菌，也有正在出芽的霉菌。

33、进一步地，白细胞质控品和红细胞质控品制备时离心条件为8℃，300～500rpm，5-8min。

34、进一步地，霉菌质控品制备时离心条件为8℃，3000～5000rpm，5-8min。

35、进一步地，白细胞质控品制备时裂解采用tris-nh4cl溶液，ph为7.2～8.0。

36、进一步地，脂肪球缓冲液为磷酸盐，并且不含有与脂肪反应的成分。

37、所述脂肪球缓冲液包括以下重量百分比组分：0.12％磷酸氢二钠，0.05％磷酸二氢钠，0.8％氯化钠，0.02％叠氮化钠，ph为7.4。

38、进一步地，红细胞质控品、白细胞质控品、霉菌质控品中使用的细胞保护剂为等渗液体，首次细胞保护剂重悬后需重悬摇床混匀过夜，摇床混匀过夜时间不得少于16小时。

39、如上述制备方法所制备的粪便形态学质控品。

40、本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：

41、本发明通过对粪便形态学质控品(红细胞质控品、白细胞质控品、霉菌质控品和脂肪球质控品)的检测能准确的监控自动粪便处理分析系统的状态，确保了自动粪便分析系统在对粪便有形成分检测时的准确性，能够解决现有的自动粪便处理分析系统没有形态学质控品的问题；从而达到了能准确的监控自动粪便处理分析系统状态的目的。