一种检测细菌源性囊泡的方法和试剂

文档序号:37223002发布日期:2024-03-05 15:22阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测细菌源性囊泡的方法,其特征在于:包括将待测囊泡样本溶液与荧光探针混合,恒温孵育,离心获得囊泡沉淀,用缓冲液将囊泡沉淀重悬;

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:每107-109颗粒的待测囊泡对应添加4-6μg荧光探针。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述恒温孵育的温度为35-40℃;

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述离心的条件为2-8℃,95000-160000g离心35-70min;

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述生物颗粒检测平台为纳米流式检测仪;

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述荧光标记可重复的选自alexa fluor488、二氢罗丹明123、四甲基罗丹明-6-马来酰亚胺、四甲基罗丹明-5-马来酰亚胺、5-吲哚乙酰氨基荧光素、6-羧基-2'4,7,7-四氯荧光素琥珀酰亚胺酯、双[nn-双(羧甲基)氢甲基]荧光素四钠盐、荧光素-5-马来酰亚胺、5-异硫氰酸荧光素尸胺、磺基罗丹明g、7-羟基-4-甲基香豆素、3-氰基-7-羟基香豆素、荧光素二钠盐fluorescein荧光素、6-荧光素氨基磷酸酯、四甲基罗丹明-6-异硫氰酸、6-羧基-x-罗丹明琥珀酰亚胺酯、5-羧基-x-罗丹明琥珀酰亚胺酯、6-羧基-x-罗丹明、5-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯、6-羧基四甲基罗丹明、5-羧基四甲基罗丹明、6-羧基罗丹明6g、异硫氰酸荧光素、6-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯、5-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯、5-羧基荧光素、6-羧基荧光素、罗丹明b、罗丹明6g、7-氨基-4-甲基香豆素、cy3或cy5。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法,其特征在于:所述待测囊泡样本溶液由血清、血浆、漱口液、脑脊液、胸腹水、尿液、肺泡灌洗液、脓液、宫颈拭子或粪便样本中分离获得;

8.一种检测细菌源性囊泡的试剂,其特征在于:包括荧光探针,所述荧光探针为荧光标记的脂多糖抗体和荧光标记的脂磷壁酸抗体。

9.根据权利要求8所述的试剂,其特征在于:所述荧光标记可重复的选自alexa fluor488、二氢罗丹明123、四甲基罗丹明-6-马来酰亚胺、四甲基罗丹明-5-马来酰亚胺、5-吲哚乙酰氨基荧光素、6-羧基-2'4,7,7-四氯荧光素琥珀酰亚胺酯、双[nn-双(羧甲基)氢甲基]荧光素四钠盐、荧光素-5-马来酰亚胺、5-异硫氰酸荧光素尸胺、磺基罗丹明g、7-羟基-4-甲基香豆素、3-氰基-7-羟基香豆素、荧光素二钠盐fluorescein荧光素、6-荧光素氨基磷酸酯、四甲基罗丹明-6-异硫氰酸、6-羧基-x-罗丹明琥珀酰亚胺酯、5-羧基-x-罗丹明琥珀酰亚胺酯、6-羧基-x-罗丹明、5-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯、6-羧基四甲基罗丹明、5-羧基四甲基罗丹明、6-羧基罗丹明6g、异硫氰酸荧光素、6-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯、5-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯、5-羧基荧光素、6-羧基荧光素、罗丹明b、罗丹明6g、7-氨基-4-甲基香豆素、cy3或cy5。

10.荧光标记的脂多糖抗体和荧光标记的脂磷壁酸抗体在制备细菌源性囊泡检测的试剂中的应用。


技术总结
本申请公开了一种检测细菌源性囊泡的方法和试剂。本申请检测细菌源性囊泡的方法,包括将待测囊泡样本溶液与荧光探针混合,恒温孵育,离心获得囊泡沉淀,用缓冲液将囊泡沉淀重悬;采用生物颗粒检测平台分析重悬囊泡溶液中与荧光探针结合的囊泡的数量和占比,即细菌源性囊泡的数量和占比;荧光探针为荧光标记的脂多糖抗体和荧光标记的脂磷壁酸抗体。本申请检测方法,采用特异性识别和结合细菌源性囊泡的荧光标记脂多糖抗体和荧光标记脂磷壁酸抗体,对细菌源性囊泡进行单颗粒精度的检测和分析,不仅检测灵敏度高、特异性强,而且检测方法简单、易操作,为探究生物体内细菌源性囊泡及其作用提供了一种新的方案和途径。

技术研发人员:郑磊,司徒博,欧子豪,李迁贝
受保护的技术使用者:南方医科大学南方医院
技术研发日:
技术公布日:2024/3/4
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