葎草药材hplc指纹图谱的建立方法及其指纹图谱的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药药材的质量控制方法，具体涉及潷草药材高效液相色谱法指纹图 谱的构建方法和标准指纹图谱。
【背景技术】
[0002] 薄草为桑科薄草属植物薄草Humulusscandens(Lour. )Merr.的全草。甘、苦，寒。 功效清热解毒，利尿消肿。用于肺结核潮热，肠胃炎，痢疾，感冒发热，小便不利，肾盂肾炎， 急性肾炎，膀胱炎，泌尿系结石；外用治痈疖肿毒，湿瘆，毒蛇咬伤。用潷草外洗方法治疗婴 幼儿腹泻86例，痊愈85例（症状和体征消失，大便1次，质成形）。此外，潷草口服可以治 疗痢疾，沐足可以治疗慢性结肠炎。潷草目前的研宄与开发，在化学成分主要集中黄酮类成 分及多糖类成分的提取、分离方面，在开发方面主要集中在饲料添加剂的开发方面。为保证 和提高药材质量，促进中药标准化，应该对质量标准进行提高，建立多成分控制的指纹图谱 技术控制药材质量，为临床用药的安全、有效提供准确可靠的依据。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种潷草药材HPLC指纹图谱的建立方法，为潷草药材的 质量控制和真伪鉴别提供一个新的方法，通过建立潷草药材指纹图谱的方法，并由此方法 得到潷草药材共有模式的指纹图谱。
[0004] 为达到本发明的目的所采用的技术方案是：一种潷草药材HPLC指纹图谱的建立 方法，其特征在于包括如下步骤：
[0005] ①对照品溶液的制备取大波斯菊苷对照品、牡荆素对照品、木犀草素对照品、芹菜 素对照品，精密称定，加甲醇制成各对照品的混合溶液；
[0006] ②供试品溶液的制备精密称定潷草药材粉末，精密加入70%乙醇，摇匀，滤过，作 为供试品溶液；
[0007] ③测定精密吸取供试品溶液、对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照高效液 相色谱法测定，得到指纹图谱，其中测定使色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶 为填料，采用梯度洗脱，流动相为甲醇-磷酸组成的梯度洗脱液，紫外检测波长为300? 370nm〇
[0008] 所述的步骤①中，取大波斯菊苷对照品、牡荆素对照品、木犀草素对照品、芹菜素 对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lmL含大波斯菊苷对照品0. 0169mg、牡荆素对照品 0. 00836mg、木庫草素对照品0. 01032mg、序菜素对照品0. 00904mg的混合溶液。
[0009] 所述的步骤②中，取潷草药材粉末1. 0g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加 入70%乙醇20mL，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重 量，摇匀，滤过，用0. 22ym微孔滤膜滤过，作为样品溶液；
[0010] 所述的步骤③中，色谱条件为：AgilentHCC18(250_X4. 6mm，5ym)色谱柱；流 动相A为甲醇，流动相B为0. 2%磷酸溶液，进行梯度洗脱条件；检测波长为340nm，流速为 1.OmL?mirT1，柱温为 35°C，进样量 10yL。
[0011] 所述的梯度洗脱条件为：
[0012] Omin时，流动相A:流动相B= 10:90
[0013] 5min时，流动相A:流动相B= 25:75
[0014] 15min时，流动相A:流动相B= 30:70
[0015] 20min时，流动相A:流动相B= 33:67
[0016] 28min时，流动相A:流动相B= 35:65
[0017] 30min时，流动相A:流动相B= 40:60
[0018] 42min时，流动相A:流动相B= 42:68
[0019] 47min时，流动相A:流动相B= 45:55
[0020] 80min时，流动相A:流动相B= 45:55。
[0021] 所述的指纹图谱标记出15个峰，其中7号峰为牡荆素峰，11号峰为大波斯菊苷峰 并记为参照峰（S)，14号峰为木庫草素峰，15号峰为序菜素峰。
[0022] 由上述建立方法得到的潷草药材HPLC标准指纹图谱。
[0023] 所述的潷草药材HPLC标准指纹图谱应用于潷草药材的真伪鉴别、基源鉴别。
[0024] 本发明的有益效果如下：
[0025] (1)用本发明所提供的方法所建立的HPLC指纹图谱，能有效地表征潷草药材的质 量，有利于全面监控药材的质量。同时本发明具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等优 点。
[0026] (2)综合运用了指纹图谱的共有峰比较、聚类分析和特有峰分析等方法对三个品 种潷草HPLC指纹图谱进行鉴别，实现对潷草药材的基源鉴别，为潷草药材的质量控制、临 床正确使用提供依据，为建立规范化的潷草种植基地提供有效的质量控制和品种选育手 段。
【附图说明】
[0027] 图1是本发明潷草的HPLC指纹图谱；
[0028] 图2是本发明对照品溶液HPLC色谱图；
[0029] 图3是本发明10批潷草药材的指纹图谱；
[0030]图4是本发明潷草药材指纹图谱共有模式。
【具体实施方式】
[0031] 为能进一步了解本发明的特征、技术手段以及所达到的具体目的、功能，解析本发 明的优点与精神，藉由以下结合附图与【具体实施方式】对本发明的详述得到进一步的了解。
[0032] 本发明是一种潷草药材HPLC指纹图谱的建立方法，其包括如下步骤：
[0033] ①对照品溶液的制备取大波斯菊苷对照品、牡荆素对照品、木犀草素对照品、芹菜 素对照品，精密称定，加甲醇制成各对照品的混合溶液。优选的，加甲醇制成每lmL含大波 斯菊苷对照品0. 〇169mg、牡荆素对照品0. 00836mg、木庫草素对照品0. 01032mg、序菜素对 照品0. 00904mg的混合溶液。
[0034]②供试品溶液的制备精密称定潷草药材粉末，精密加入70%乙醇，摇匀，滤过，作 为供试品溶液。优选的，取潷草药材粉末1. 〇g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入 70%乙醇20mL，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用70 %乙醇补足减失的重 量，摇匀，滤过，用0. 22ym微孔滤膜滤过，作为样品溶液；
[0035] ③测定精密吸取供试品溶液、对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照高效液 相色谱法测定，得到指纹图谱，其中测定使色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶 为填料，采用梯度洗脱，流动相为甲醇-磷酸组成的梯度洗脱液，紫外检测波长为300? 370nm。优选的色谱条件为：AgilentHCC18(250mmX4.6mm，5iim)色谱柱；流动相A为甲醇， 流动相8为0.2%磷酸溶液，