液1.0ml，加入0.6g/L的硫酸亚铁铵2ml，静置30min后加入0.4g/L盐酸左氧氟沙星溶液2ml，静置15min，用荧光光谱仪检测样品溶液的荧光强度，由线性回归方程计算出待测面粉中过氧化苯甲酰的浓度。
[0035]实施例1
[0036]添加过氧化苯甲酰的面粉试样的测定
[0037]1、配制过氧化苯甲酰储备液
[0038]准确称取0.1OOOg过氧化苯甲酰于IL容量瓶中，加入无水乙醇溶解，用无水乙醇定容至刻度线处，摇匀，配制成质量浓度为0.lg/L的过氧化苯甲酰乙醇溶液；置于4°C冰箱中，备用。
[0039]2、在100g没有加入过氧化苯甲酰的空白面粉中加入过氧化苯甲酰0.0040g，混匀。准确称取加入过氧化苯甲酰的面粉l.0OOg，置于盛有10.0Og无水乙醇的25ml锥形瓶中，密封锥型瓶，在恒温磁力搅拌器上搅拌I小时，使待测面粉中的过氧化苯甲酰充分溶解，将混合液转移至离心管中，1500转/分钟离心分离10分钟，吸出上清液置于25ml容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度线处，配成待测样品溶液，放入4°C冰箱中，待检。(BPO浓度为
0.0016g/L)(测定浓度，稀释 5 倍 0.00032g/L)。
[0040]3、制备 Fe(II)溶液
[0041]精确同时精密称取六水合硫酸亚铁铵0.4140g于500ml容量瓶中，用蒸馏水溶解并定容到至刻度线处，摇匀，配成浓度为0.6g/L的储备液，置于4°C冰箱中，备用。
[0042]制备盐酸左氧氟沙星溶液
[0043]精密称取盐酸左氧氟沙星0.2000于5ml容量瓶中，用蒸馏水溶解并定容到至刻度线处，摇匀，配成浓度为0.4g/L的储备液，置于4°C冰箱中，备用。
[0044]样品测定
[0045]配制标准溶液:
[0046]准确移取质量浓度为0.lg/L的过氧化苯甲酰储备液1、2、4、6、8、10、20、40、60、80、100ml，分别置于11个10ml容量瓶中，用乙醇定容至刻度线处，摇匀，分别配制成质量浓度为 0.001,0.002,0.004,0.006,0.008,0.01,0.02,0.04,0.06,0.08,0.lg/L 的过氧化苯甲酰乙醇标准溶液；
[0047]制作标准曲线:准确移取0.6g/L的硫酸亚铁铵2.0ml共12份，其中I份加入
1.0ml 乙醇，其余 11 份质量浓度为 0.001,0.002,0.004,0.006,0.008,0.01,0.02,0.04、
0.06,0.08,0.lg/L的过氧化苯甲酰乙醇标准溶液1.0ml (静置30min)，再向12份中均加入质量浓度为0.4g/L的盐酸左氧氟沙星溶液2.0ml，此时过氧化苯甲酰的浓度为0.0002、
0.0004,0.0008,0.0012,0.0016,0.005,0.004,0.008,0.012,0.016,0.02g/L。硫酸亚铁铵溶液的浓度为0.24g/L，盐酸左氧氟沙星的浓度为0.16g/Lo
[0048]将上述12份溶液混合均匀，室温静置15min，用F-2500型荧光光谱仪测定标准溶液的荧光强度，荧光光谱图如图1所示，图中只显示了 5个不同BPO浓度下荧光光谱，荧光光谱仪的激发波长λθχ = 410nm、发射波长λ em = 500nm、激发波长和发射波长狭缝宽度均为5nm、负高压为400V，以过氧化苯甲酰乙醇溶液的质量浓度为横坐标，F0/F为纵坐标，由Origin软件绘制曲线，如图2，并得出标准曲线的线性回归方程:
[0049]In (FcZF) = 0.2669C
[0050]式中H)为空白溶液中盐酸左氧氟沙星的荧光强度，F为不同浓度的过氧化苯甲酰乙醇溶液中，盐酸左氧氟沙星的荧光强度。单位为g/L，线性相关系数为0.9876。按3σ/Κ计算，检出限为2.25X 10VLo
[0051]检测面粉中过氧化苯甲酰的含量:准确移取待测样品lml，0.6g/L的硫酸亚铁铵
2.0ml于试管中(静置30min)，加入质量浓度为0.4g/L的盐酸左氧氟沙星溶液2.0ml (静置15min)。用荧光光谱仪检测样品溶液的荧光强度，按线性回归方程(I)计算出待测试样中过氧化苯甲酰的浓度。按此方法平行测定三遍，取平均值。经计算，待测样品中过氧化苯甲酰的质量浓度为3.2X 10_4g/L，即面粉中过氧化苯甲酰的含量为40mg/kg。
[0052]实施例2
[0053]面粉中过氧化苯甲酰含量的测定
[0054]在本实施例中步骤2中测定一般面粉中过氧化苯甲酰的含量，不在面粉中加入过氧化苯甲酰，其它步骤与实施例一致，经测定和计算得，待测样品中过氧化苯甲酰的质量浓度为4.0X 10_4g/L，即面粉中过氧化苯甲酰的含量为50mg/kg。
[0055]以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
【主权项】
1.一种基于荧光猝灭法检测小麦粉中过氧化苯甲酰的方法，其特征在于包括以下步骤: 标准曲线的绘制:配置η个成梯度浓度的过氧化苯甲酰乙醇溶液和η+1个等浓度等量的硫酸亚铁铵水溶液，取等量的η个过氧化苯甲酰乙醇溶液和I个空白乙醇加入等量的η+1个等浓度等量的硫酸亚铁铵水溶液中，之后继续分别加入等浓度等量的盐酸左氧氟沙星水溶液混合均匀后，静置并分别检测荧光强度，绘制标准曲线，进一步得线性回归方程:In (F0/F) = 0.2669C 式中Ftl为空白乙醇溶液中盐酸左氧氟沙星的荧光强度，F为不同浓度的过氧化苯甲酰乙醇溶液中，盐酸左氧氟沙星的荧光强度； 样品检测:取待测样品面粉乙醇溶液，加入硫酸亚铁铵，静置后加入0.4g/L盐酸左氧氟沙星水溶液，静置后检测样品溶液的荧光强度，由线性回归方程计算出待测面粉中过氧化苯甲酰的浓度。
2.根据权利要求1所述的基于荧光猝灭法检测小麦粉中过氧化苯甲酰的方法，其特征在于:所述标准曲线绘制步骤中加入盐酸左氧氟沙星水溶液后的静置时间为15min。
3.根据权利要求1所述的基于荧光猝灭法检测小麦粉中过氧化苯甲酰的方法，其特征在于:所述样品检测步骤中加入硫酸亚铁铵后的静置时间为30min，加入盐酸左氧氟沙星水溶液后的静置时间为15min。
【专利摘要】本发明公开了一种基于荧光猝灭法检测小麦粉中过氧化苯甲酰的方法，面粉中过氧化苯甲酰(BPO)，BPO具有氧化性，对一般物质均产生荧光猝灭，一般不能用荧光方法进行直接测定。本发明利用BPO具有氧化性这一性质，将Fe(Ⅱ)氧化为Fe(Ⅲ)，Fe(Ⅲ)能够猝灭盐酸左氧氟沙星的荧光，据此建立BPO的浓度随盐酸左氧氟沙星的荧光强度变化关系，做出标准曲线，对小麦面粉进行样品测定。本发明的方法具有简便、快捷、检出限低、准确性好等特点。
【IPC分类】G01N21-64
【公开号】CN104597012
【申请号】CN201510008418
【发明人】刘金彦, 杨卉, 赵文玉, 周建梅
【申请人】内蒙古科技大学
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2015年1月8日