一种荧光光谱法测胆固醇含量鉴别地沟油的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及地沟油检测技术，特别是涉及一种用荧光光谱仪检测胆固醇含量的来鉴别地沟油的方法。
【背景技术】
[0002]地沟油的鉴别方法也很多，气-质联用法和高效液相色谱法是将地沟油分解，与标准谱图进行对比，进行检测。此外还有测定电导率、粘度、介电常数检测地沟油的方法，或者测定地沟油在特定溶液中粒径分布的检验法，采用放射性测量检测地沟油的方法，各种生物检测法。这些方法的出现都因为地沟油的成分复杂，不同来源的地沟油性质不同造成的，目前还持续出现各种地沟油的检测方法。地沟油中一般会混入动物油，动物油中含有油脂，会存在比普通植物油多的胆固醇，所以从胆固醇方面入手，也是检测地沟油的有效手段。胆固醇的测定方法有液相色谱法、气相色谱法、薄层色谱法、紫外可见分光光度法等，也出现了化学发光法。以上方法各有优缺点，色谱法存在操作繁琐，需考虑的影响因素多等缺点，紫外可见分光光度法虽然可以简单测定，但定性分析困难，影响吸收光谱的形状和强度的因素多。
[0003]目前，国内尚未制定地沟油鉴别检测的国家标准方法，虽然国内外研宄人员进行了一些探索，鉴别地沟油在进行理化检测时，可分别检验诸如水分含量、比重、折光率、皂化值、酸值、羰基值、过氧化值、碘值重金属、脂肪酸相对不饱和度、胆固醇、残留检测、氧化产物检测等指标。但是对地沟油检测的报道并不多见，其主要原因是高酸值的地沟油成分比较复杂，其检测方法还处于实验研宄阶段，要准确性定量目前仍比较困难。由于地沟油具有外源性污染物质特性，所以针对餐具洗涤剂表面活性剂十二烷基苯磺酸钠混在地沟油里，而食用油不含这种人工合成化学物质的现象。荧光光谱法主要是检测地沟油中的十二烷基苯磺酸钠，地沟油中胆固醇的检测采用高效液相色谱或者气相色谱法。
【发明内容】
[0004]为了解决上述问题，本发明的目的之一在于提供了一种用荧光光谱仪检测地沟油中胆固醇的方法。
[0005]为达上述目的，本发明一种荧光光谱法测胆固醇含量鉴别地沟油的方法。包括以下步骤:
[0006]标准曲线的绘制:取梯度体积的指定浓度的胆固醇-CTAB水溶液，再用等体积的CTAB水溶液稀释至不同浓度梯度的胆固醇-CTAB水溶液，测定不同浓度梯度胆固醇-CTAB水溶液的荧光光谱得到胆固醇的胆固醇溶液的标准曲线；
[0007]样品检测:取待测样品和合格植物油分别置于容量瓶中，于两容量瓶中并分别依次加入等量的KOH溶液和等量的无水乙醇，摇匀后，置于50°C?60°C恒温水浴锅进行4h?6h皂化，之后冷却至室温，加入等量的正己烷，轻轻振荡容量瓶，后静置分层I?2h，将上层液倒出，重复上述萃取过程两次以上，后将萃取液合并，用移液管吸取等量萃取液分别置于玻璃瓶中，用氮气将瓶中正己烷吹干，加入等量的所述CTAB溶液进行荧光检测；
[0008]待测样品和合格植物油测得的荧光光强通过与标准曲线对比得到待测样品和合格植物油的胆固醇含量；
[0009]待测样品和合格植物油胆固醇含量的比较:待测样品胆固醇含量高于合格植物油胆固醇含量时，则待测样品中含地沟油。
[0010]本发明与现有技术不同之处在于本发明取得了如下技术效果:
[0011]本发明以胆固醇为鉴别地沟油的特异性指标，利用荧光光谱仪为主要检测工具，通过反复试验构建出完整的检测条件，本发明能快速、精确地检测出样品中是否含有地沟油，检出限为0.0094g/Lo
[0012]下面结合附图对本发明作进一步说明。
【附图说明】
[0013]图1为不同浓度胆固醇的荧光光谱图；
[0014]图2为胆固醇标准工作曲线；
[0015]图3不同物质的处理后的荧光光谱图。
【具体实施方式】
[0016]以下结合实施例，对本发明上述的和另外的技术特征和优点作更详细的说明。
[0017]步骤A、标准溶液的配置:
[0018](I)由于胆固醇在水中溶解度小，所以借助CTAB将其增溶，增加其溶解度。称取CTAB加水溶解，摇匀配成摩尔浓度为3.0?4.0mmoI/L的CTAB溶液。
[0019](2)胆固醇标准储备溶液:
[0020]取胆固醇加无水乙醇溶解，摇匀配成质量浓度为0.8?1.2g/L的胆固醇溶液。
[0021](3)将已配置好的溶液分别移取2.5mL，分别置于10mL的容量瓶中，待乙醇蒸干后，用配好的CTAB溶液A定容至刻度，配成0.025g/L的胆固醇溶液。胆固醇标准系列溶液:用移液管分别移取上述配好的胆固醇0.2,0.4、1.2,2.0,2.8,3.6,4.4,5.2,6.0,8.0mL的上述配好的胆固醇溶液到1mL的试管中，用CTAB溶液定容，胆固醇溶液的浓度分别为0.0005,0.001,0.003,0.005,0.007,0.009,0.011,0.013,0.015,0.02g/L。
[0022]步骤B、样品处理:
[0023]分别取植物油、猪油、地沟油、以及油食用油与地沟油混合后的油2.0?4.0g于50mL容量瓶中，依次加入3?5mL 0.5mol/L的KOH溶液和8?12mL无水乙醇。轻轻摇匀后，置于50°C?60°C恒温水浴锅进行4h?6h皂化。期间每隔20?30min振摇容量瓶，使油样造化完全。阜化完成后，取出容量瓶冷却至室温。依次加入8?1mL正己烧，轻轻振荡容量瓶，后静置分层I?2h。将上层液倒出，重复上述萃取过程两次，后将三次萃取液合并，用移液管吸取萃取液5?SmL置于小玻璃瓶中，用氮气将瓶中正己烷吹干，加入1ml溶液A进行荧光检测。
[0024]步骤C、荧光光谱仪条件的构建:
[0025]荧光光谱仪:F2500型，日本日立
[0026]狭缝宽度:EX= 5nm，EM = 5nm，λ ex = 266nm，λ em = 280nm
[0027]扫描速度:光电倍增管电压400V
[0028]步骤D、样品测定和结果判断:
[0029]在上述荧光光谱条件下，测定胆固醇标准系列溶液所得标准曲线计算待测溶液中胆固醇的含量。
[0030]如待测样品中在激发波长为266nm处，能检出280nm处的发射峰，则表明待测样品中存在胆固醇，与合格植物油相比，如果超过了合格植物油的峰值，则认为此油为地沟油或者是植物油中混有地沟油。
[0031]测定原理:常用合格的植物油一般不含或者含有少量的胆固醇，地沟油中由于混入了动物油或者动物脂肪，其中含有胆固醇。虽然经过一定的加工，但其胆固醇的含量会比较大，通过检测胆固醇的含量鉴别地沟油专属性强。
[0032]实施例1
[0033]用荧光光谱仪检测植物油中胆固醇的方法，包括如下步骤:
[0034](I) CTAB (十六烷基三甲基溴化铵)溶液:准确称取CTAB0.6380g，放入50mL烧杯中，用少量蒸馏水溶解，然后置于500mL容量瓶中定容，得到CTAB的浓度为3.5mmol/L的溶液，即为溶液A。
[0035](2)准确称取胆固醇0.0lOOg，溶于一定量的无水乙醇中，后置于1mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度线，即可得质量浓度为1.0g/L胆固醇标准溶液。将已配置好的溶液分别移取2.5mL，分别置于10mL的容量瓶中，待乙醇蒸干后，用配好的CTAB溶液A定容至刻度，配成0.025g/L的胆固醇溶液。
[0036](3)胆固醇标准系列溶液:用移液管分别移取上述配好的胆固醇0.2,0.4,1.2、2.0,2.8,3.6,4.4,5.2,6.0,8.0mL的上述配好的胆固醇溶液到1mL的试管中，用CTAB溶液定容，胆固醇溶液的浓度分别为 0.0005,0.001,0.003,0.005,0.007,0.009,0.011,0.013、0.015,0.02g/Lo
[0037]步骤B、样品处理
[0038]取来自金龙鱼植物油4.0g于50mL容量瓶中，依次加入5mL0.5mol/lK0H溶液和12mL无水乙醇。轻轻摇匀后，置于55°C恒温