水浴锅进行5h皂化。期间每隔30min振摇容量瓶，使油样造化完全。阜化完成后，取出容量瓶冷却至室温。依次加入8mL正己烧，轻轻振荡容量瓶，后静置分层lh。将上层液倒出，重复上述萃取过程两次，后将三次萃取液合并，用移液管吸取萃取液5mL置于小玻璃瓶中，用氮气将瓶中正己烷吹干，加入溶液AlOml进行荧光检测。
[0039]实施例2
[0040]用荧光光谱仪检测地沟油中胆固醇的方法，包括如下步骤:
[0041](I) CTAB (十六烷基三甲基溴化铵)溶液:称取0.5468CTAB加水溶解，摇匀配成质量浓度为3.0mmoI/L的CTAB溶液。
[0042](2)准确称取胆固醇0.0lOOg，溶于一定量的无水乙醇中，后置于1mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度线，即可得质量浓度为1.0g/L胆固醇标准溶液。将已配置好的溶液分别移取2.5mL，分别置于10mL的容量瓶中，待乙醇蒸干后，用配好的CTAB溶液A定容至刻度，配成0.025g/L的胆固醇溶液。
[0043](3)胆固醇标准系列溶液:用移液管分别移取上述配好的胆固醇0.2,0.4,1.2、2.0、2.8、3.6、4.4、5.2、6.0、8.0mL的上述配好的胆固醇溶液到1mL的试管中，用CTAB溶液定容，胆固醇溶液的浓度分别为 0.0005,0.001,0.003,0.005,0.007,0.009,0.011,0.013、0.015,0.02g/Lo
[0044]步骤B、样品处理
[0045]取来自小餐馆的地沟油2.0g于50mL容量瓶中，依次加入4mL0.5mol/lKOH溶液和1mL无水乙醇。轻轻摇匀后，置于60°C恒温水浴锅进行4h皂化。期间每隔20min振摇容量瓶，使油样造化完全。阜化完成后，取出容量瓶冷却至室温。依次加入1mL正己烧，轻轻振荡容量瓶，后静置分层1.5h。将上层液倒出，重复上述萃取过程两次，后将三次萃取液合并，用移液管吸取萃取液6mL置于小玻璃瓶中，用氮气将瓶中正己烷吹干，加入溶液AlOml进行荧光检测。
[0046]实施例3
[0047]用荧光光谱仪检测地沟油与植物油混合比例为1:1时中胆固醇的方法，包括如下步骤:
[0048](I) CTAB (十六烷基三甲基溴化铵)溶液:称取0.7290CTAB加水溶解，摇匀配成质量浓度为4.0mmoI/L的CTAB溶液。
[0049](2)准确称取胆固醇0.0lOOg，溶于一定量的无水乙醇中，后置于1mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度线，即可得质量浓度为1.0g/L胆固醇标准溶液。将已配置好的溶液分别移取2.5mL，分别置于10mL的容量瓶中，待乙醇蒸干后，用配好的CTAB溶液A定容至刻度，配成0.025g/L的胆固醇溶液。
[0050](3)胆固醇标准系列溶液:用移液管分别移取上述配好的胆固醇0.2,0.4,1.2、2.0,2.8,3.6,4.4,5.2,6.0,8.0mL的上述配好的胆固醇溶液到1mL的试管中，用CTAB溶液定容，胆固醇溶液的浓度分别为 0.0005,0.001,0.003,0.005,0.007,0.009,0.011,0.013、0.015,0.02g/Lo
[0051]步骤B、样品处理
[0052]取来自小餐馆的地沟油与金龙鱼植物油混合比例为1:1时3.0g于50mL容量瓶中，依次加入3mL0.5mol/lK0H溶液和8mL无水乙醇。轻轻摇匀后，置于50°C恒温水浴锅进行6h皂化。期间每隔25min振摇容量瓶，使油样皂化完全。皂化完成后，取出容量瓶冷却至室温。依次加入9mL正己烷，轻轻振荡容量瓶，后静置分层2h。将上层液倒出，重复上述萃取过程两次，后将三次萃取液合并，用移液管吸取萃取液SmL置于小玻璃瓶中，用氮气将瓶中正己烷吹干，加入溶液AlOml进行荧光检测。
[0053]实施例4
[0054]用荧光光谱仪检测地沟油与植物油混合比例为1:9时中胆固醇的方法，包括如下步骤:
[0055](I) CTAB (十六烷基三甲基溴化铵)溶液:称取0.7290CTAB加水溶解，摇匀配成质量浓度为4.0mmoI/L的CTAB溶液。
[0056](2)准确称取胆固醇0.0lOOg，溶于一定量的无水乙醇中，后置于1mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度线，即可得质量浓度为1.0g/L胆固醇标准溶液。将已配置好的溶液分别移取2.5mL，分别置于10mL的容量瓶中，待乙醇蒸干后，用配好的CTAB溶液A定容至刻度，配成0.025g/L的胆固醇溶液。
[0057](3)胆固醇标准系列溶液:用移液管分别移取上述配好的胆固醇0.2,0.4,1.2、2.0,2.8,3.6,4.4,5.2,6.0,8.0mL的上述配好的胆固醇溶液到1mL的试管中，用CTAB溶液定容，胆固醇溶液的浓度分别为 0.0005,0.001,0.003,0.005,0.007,0.009,0.011,0.013、0.015,0.02g/Lo
[0058]步骤B、样品处理
[0059]取来自小餐馆的地沟油与金龙鱼植物油混合比例为1:9时3.0g于50mL容量瓶中，依次加入3mL0.5mol/lKOH溶液和8mL无水乙醇。轻轻摇匀后，置于50°C恒温水浴锅进行6h皂化。期间每隔25min振摇容量瓶，使油样皂化完全。皂化完成后，取出容量瓶冷却至室温。依次加入9mL正己烷，轻轻振荡容量瓶，后静置分层2h。将上层液倒出，重复上述萃取过程两次，后将三次萃取液合并，用移液管吸取萃取液SmL置于小玻璃瓶中，用氮气将瓶中正己烷吹干，加入溶液AlOml进行荧光检测。
[0060]以上得到的不同浓度胆固醇的荧光光谱图如图1所示，进而得到图2胆固醇标准工作曲线；实施例1-4不同物质的处理后的荧光光谱图如图3所示。
[0061]以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
【主权项】
1.一种荧光光谱法测胆固醇含量鉴别地沟油的方法。其特征在于包括以下步骤: 标准曲线的绘制:取梯度体积的指定浓度的胆固醇-CTAB水溶液，再用等体积的CTAB水溶液稀释至不同浓度梯度的胆固醇-CTAB水溶液，测定不同浓度梯度胆固醇-CTAB水溶液的荧光光谱得到胆固醇的胆固醇溶液的标准曲线； 样品检测:取待测样品和合格植物油分别置于容量瓶中，于两容量瓶中并分别依次加入等量的KOH溶液和等量的无水乙醇，摇匀后，置于50°C?60°C恒温水浴锅进行4h?6h皂化，之后冷却至室温，加入等量的正己烷，轻轻振荡容量瓶，后静置分层I?2h，将上层液倒出，重复上述萃取过程两次以上，后将萃取液合并，用移液管吸取等量萃取液分别置于玻璃瓶中，用氮气将瓶中正己烷吹干，加入等量的所述CTAB溶液进行荧光检测； 待测样品和合格植物油测得的荧光光强通过与标准曲线对比得到待测样品和合格植物油的胆固醇含量； 待测样品和合格植物油胆固醇含量的比较:待测样品胆固醇含量高于合格植物油胆固醇含量时，则待测样品中含地沟油。
【专利摘要】本发明公开了一种荧光光谱法测胆固醇含量鉴别地沟油的方法，沟油中一般会混入动物油，动物油中含有油脂，会存在比普通植物油多的胆固醇，所以从胆固醇方面入手，也是检测地沟油的有效手段。胆固醇本身具有荧光，其中最大荧光激发波长λex＝266nm，最大荧光发射波长λem＝280nm，配置一系列浓度的标准胆固醇溶液，可以做出荧光强度随浓度变化的标准曲线，进行胆固醇定量测定。将地沟油加入KOH和乙醇进行皂化，然后加入正己烷萃取，通入N2气吹干后，采用荧光光谱法对样品进行定性和定量分析。
【IPC分类】G01N21-64
【公开号】CN104597013
【申请号】CN201510008801
【发明人】刘金彦, 郭小惠, 袁春华, 郝燕
【申请人】内蒙古科技大学
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2015年1月8日