一种霉酚酸均相酶免疫检测试剂及其制备和检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种霉酚酸检测试剂及其制备和检测方法，具体涉及一种霉酚酸均相 酶免疫检测试剂及其制备和检测方法。
【背景技术】
[0002] 霉酷酸（Mycophenolic acid)结构式如式（III)所示：
[0003]
【主权项】
1. 一种霉酪酸均相酶免疫检测试剂，包括；抗霉酪酸特异性抗体、用于检测抗霉酪酸 特异性抗体-霉酪酸复合物的指示试剂；上述抗霉酪酸特异性抗体由霉酪酸免疫原免疫动 物得到，霉酪酸免疫原的结构式如式（I)所示：
式中，载体为具有免疫原性的蛋白质；上述指示试剂选自酶试剂、放射性同位素试剂、 巧光试剂或化学发光试剂。
2. 根据权利要求1所述的一种霉酪酸均相酶免疫检测试剂，其特征在于，上述指示试 剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；上述酶标偶联物包括葡萄糖-6-磯酸脱氨 酶-半抗原酶标偶联物；上述酶的底物为葡萄糖-6-磯酸；所述葡萄糖-6-磯酸脱氨酶-半 抗原酶标偶联物由葡萄糖-6-磯酸脱氨酶与霉酪酸衍生物反应形成。
3. 根据权利要求2所述的霉酪酸均相酶免疫检测试剂，其特征在于，上述霉酪酸衍生 物的结构式如式（II )所示：
4. 霉酪酸衍生物，结构式如式（II )所示：
5.根据权利要求4所述的霉酪酸衍生物，其特征在于，合成路线为：
6. -种霉酪酸均相酶免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)权利要求3、4或5所述的霉酪酸衍生物的合成与纯化，并进行结构鉴定；
(2) 霉酪酸免疫原的合成：使霉酪酸的末端駿基与具有免疫原性的蛋白质载体连接； (3) 用霉酪酸免疫原免疫动物，制备并纯化抗霉酪酸特异性抗体； (4) 葡萄糖-6-磯酸脱氨酶-半抗原偶联物的制备：制备葡萄糖-6-磯酸脱氨酶溶液， 激活霉酪酸衍生物，使葡萄糖-6-磯酸脱氨酶与霉酪酸的末端駿基连接，纯化连接产物； (5) 霉酪酸均相酶免疫检测试剂的制备： 试剂A的制备；由抗霉酪酸特异性抗体和均相酶底物混合而成； 试剂B的制备：由葡萄糖-6-磯酸脱氨酶-半抗原偶联物与Tris缓冲液混合而成。
7. 根据权利要求6所述的一种霉酪酸均相酶免疫检测试剂的制备方法，其特征在于， 所述的步骤（2)中，蛋白质载体为BSA，具体合成步骤如下： a. 称取2. 72g磯酸二氨钟、4. 26g磯酸氨二钢、8. 5g氯化钢、0. 95g氯化儀，共同溶解于 1L去离子水中，调节抑至7. 4,制成缓冲溶液A ; b. 称取3mg BSA，室温下溶解于3mL上述缓冲溶液A中，制成BSA溶液； C.称取3mg霉酪酸衍生物，溶解于300ul上述缓冲溶液A中，制成霉酪酸衍生物溶液； d. 当上述霉酪酸衍生物溶液刚变澄清时，将其逐滴加入上述BSA溶液中，然后将此混 合溶液在2-8°C下揽拌1小时； e. 将反应后的上述混合溶液用上述缓冲溶液A进行透析，透析后所得溶液即为霉酪酸 免疫原溶液，在霉酪酸免疫原溶液中加入质量分数0. 1 %的NaNs，于-20°C下储存。
8. 根据权利要求6所述的一种霉酪酸均相酶免疫检测试剂的制备方法，其特征在于， 所述的步骤（4)具体过程为： a. 称取1. 09g磯酸二氨钟、1. 70g磯酸氨二钢、8. 5g氯化钢、0. 95g氯化儀，共同溶解于 1L去离子水中，调节抑至7. 4,制成缓冲溶液B ; b. 称取3mg葡萄糖-6-磯酸脱氨酶，室温下溶解于3mL上述缓冲溶液B中，制成葡萄 糖-6-磯酸脱氨酶溶液； C.称取3mg霉酪酸衍生物，溶解于300ul上述缓冲溶液B中，制成霉酪酸衍生物溶液； d. 当上述霉酪酸衍生物溶液刚变澄清时，将其逐滴加入上述葡萄糖-6-磯酸脱氨酶溶 液中，然后将此混合溶液在2-8°C下揽拌1小时； e. 将反应后的上述混合溶液用上述缓冲溶液B进行透析，透析后所得溶液即为葡萄 糖-6-磯酸脱氨酶-半抗原偶联物溶液，在葡萄糖-6-磯酸脱氨酶-半抗原偶联物溶液中 加入质量分数0. 5%的BSA和质量分数0. 1 %的化Ns，于2-8°C下储存。
9. 根据权利要求6所述的一种霉酪酸均相酶免疫检测试剂的制备方法，其特征在于， 步骤巧）的具体过程如下； 试剂A的制备：将4. 036g 11. 25mM的氧化态的烟酷胺腺嚷岭二核巧酸、1. 71 Ig 11. 25mM的葡萄糖-6-磯酸用1L 55mM、抑=8. 0的Tris缓冲液溶解制成均相酶底物；将制 备的抗霉酪酸特异性抗体加到上述均相酶底物中，抗体与均相酶底物的体积比为1:100? 1:10000 ； 试剂B的制备：将制备的葡萄糖-6-磯酸脱氨酶-半抗原偶联物加到120mM、pH = 8. 2 的Tris缓冲液中，上述偶联物与Tris缓冲液的体积比为1:100?1:10000。
10. 利用权利要求1至3任意一项所述的霉酪酸均相酶免疫检测试剂的检测方法，其特 征在于，包括W下步骤： (1)将待测样本与抗霉酪酸特异性抗体接触； 似根据待测样本中霉酪酸与抗霉酪酸特异性抗体的结合情况，利用指示试剂判断样 本中霉酪酸的含量； 所述待测样本为血清、血浆、唾液或尿液； 所述的指示试剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；上述酶标偶联物包括葡 萄糖-6-磯酸脱氨酶-半抗原酶标偶联物；上述酶的底物为葡萄糖-6-磯酸；所述葡萄 糖-6-磯酸脱氨酶-半抗原酶标偶联物由葡萄糖-6-磯酸脱氨酶与霉酪酸衍生物反应形 成。
【专利摘要】本发明涉及一种霉酚酸检测试剂及其制备和检测方法，具体涉及一种霉酚酸均相酶免疫检测试剂及其制备和检测方法，包括：抗霉酚酸特异性抗体、用于检测抗霉酚酸特异性抗体-霉酚酸复合物的指示试剂；上述抗霉酚酸特异性抗体由霉酚酸免疫原免疫动物得到。本发明的有益之处在于：本发明的霉酚酸免疫原特异性强、免疫原性高，制备出的抗霉酚酸特异性抗体特异性强、效价高，并且与常见的62种药物无任何交叉反应；含有上述抗霉酚酸特异性抗体的均相酶免疫检测试剂可以方便、快速、准确地确定样品中的霉酚酸含量，并且可以在全自动生化分析仪上同时测定多个样品，实现霉酚酸的高通量快速化测定，准确度高，特异性强，精确度和检测效率有了较大的提高。
【IPC分类】G01N33-544, C07K16-44
【公开号】CN104597238
【申请号】CN201510039618
【发明人】虞留明, 伍勇, 邓拥军, 封飒飒, 成志鹏
【申请人】苏州博源医疗科技有限公司
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2015年1月27日