专利名称：无水结晶霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯(mycophenolate mofetil)及其静脉用制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及E-6-(1，3-二氢-4-羟基-6-甲氧基-7-甲基-3-氧-5-异苯并呋喃基)-4-甲基-4-己烯酸2-(4-吗啉代)乙酯(以下简称“MM”)，具体而言是无水盐结晶形式的MM。
本发明还涉及MM的静脉用制剂，以及用MM的无水结晶盐制备静脉用制剂的方法，其中所说的盐是就地形成并冻干的。本发明还涉及用这些制剂治疗自身免疫疾病，牛皮癣，炎症(特别是包括风湿性关节炎)，肿瘤和病毒中，以及免疫抑制，特别是同种移植排斥，尤其包括心脏移植排斥，胰腺移植排斥和肾脏移植排斥，和治疗自身免疫疾病(包括糖尿病)。与本发明相关的背景技术美国专利4,753,935，授权于1988年6月28日，名称为“霉酚酸吗啉代乙酯和药物组合物”，公开了霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯，霉酚酸吗啉代乙酯，以及它们的某些简单酯衍生物。
美国专利4,808,592，授权于1989年2月28日，名称为“用霉酚酸吗啉代乙酯及其衍生物治疗疾病的方法”，公开了使用有疗效量的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯，霉酚酸吗啉代乙酯，或它们的某些简单酯衍生物治疗哺乳动物炎症和牛皮癣的方法。
美国专利4,952,579，授权于1990年8月28日，名称为“用霉酚酸吗啉代乙酯及其衍生物治疗疾病的方法”，公开了使用有疗效量的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯，霉酚酸吗啉代乙酯，或它们的某些简单酯衍生物治疗哺乳动物恶性肿瘤的方法。
美国专利4,786,637，授权于1988年11月22日，名称为“用霉酚酸吗啉代乙酯及其衍生物治疗同种移植排斥的方法”，公开了使用有疗效量的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯，霉酚酸吗啉代乙酯，或它们的某些简单酯衍生物治疗哺乳动物同种移植排斥的方法。
美国专利4,948,793，授权于1990年8月14日，名称为“用霉酚酸吗啉代乙酯及其衍生物治疗自身免疫疾病的方法”，公开了使用有疗效量的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯，霉酚酸吗啉代乙酯，或它们的某些简单酯衍生物治疗自身免疫疾病的方法。
美国专利4,992,467，授权于1991年2月12日，名称为“用霉酚酸及其衍生物和制剂治疗自身免疫疾病的方法”，公开了使用有疗效量的某些简单霉酚酸酚酯治疗哺乳动物自身免疫疾病的方法。
所有上述美国专利在此引作参考。
霉酚酸是弱活性抗生素，这一点是在青霉菌(Penicillium brevi-compactum)的发酵培养基中发现的。已经发现，霉酚酸衍生物，尤其是霉酚酸吗啉代乙酯[即(E)-6-(1，3-二氢-4-羟基-6-甲氧基-7-甲基-3-氧-5-异苯并呋喃基)-4-甲基-4-己烯酸2-(4-吗啉代)乙酯盐酸盐]和苯酚羟基的某些简单酯衍生物对于治疗自身免疫疾病，牛皮癣，炎症(尤其包括风湿性关节炎)，肿瘤，病毒，同种移植排斥，特别是心脏移植排斥，胰腺移植排斥和肾脏移植排斥，以及自身免疫疾病(包括糖尿病)是有效的。与霉酚酸相比，这些酯衍生物表现出优越的药物动力学性能，该性质能提高霉酚酸的全面引入，例如，在传输环境(如胃)中的可溶性，血浆峰浓度，最大血浆浓度，以及改善活性如消炎活性。
静脉内进行治疗剂给药是药物工业熟知的方法。静脉用制剂除了是一种治疗剂在其中是可溶的组合物外，还应该具备某些特性。比如，该制剂应该促进活性成分的全面稳定性，此外，该制剂的生产成本应该是合理的。所有这些因素最终决定了静脉用制剂的全面成功和应用。
单水合物盐形式的MM比非结晶盐形式的MM更稳定，但非结晶盐形式有更好的溶解性。令人惊奇的是，最新发现MM的无水结晶盐形式的溶解性超过其单水合物盐形式约两倍，却具有与单水合物盐形式相同的稳定性。
发明概述本发明一方面涉及下式无水结晶化合物(即MM)， 其中MM为与选自氯离子、硫酸根、磷酸根和乙酸根的阴离子复合的盐。
本发明另一方面涉及无水结晶形式的MM HCl，即(E)-6-(1，3-二氢-4-羟基-6-甲氧基-7-甲基-3-氧-5-异苯并呋喃基)-4-甲基-4-己烯酸2-(4-吗啉代)乙酯盐酸盐。
本发明另一方面涉及适合制备静脉用制剂水溶液的组合物，该制剂含MM(即式I)和药物上可接受的赋形剂， 式I其中MM为与选自氯离子，硫酸根，磷酸根，和乙酸根的阴离子复合的药物上可接受的盐(无水结晶形式)。
本发明还涉及制备该组合物的方法，衍生出该组合物的溶液的pH被调节在3.2-3.6范围内，该盐就地形成，并冻干溶液，结果生成无水结晶形式的式I化合物。
本发明另一方面涉及上述式I化合物治疗疾病如自身免疫疾病，牛皮癣，炎症(尤其包括风湿性关节炎)，肿瘤，病毒疾病，自身免疫疾病包括糖尿病，同种移植排斥，特别是心脏移植排斥，胰腺移植排斥和肾脏移植排斥的用途。
本发明另一方面涉及用于制备静脉用制剂的药盒，其包含a)含有上述式I化合物的适于制备静脉用制剂水溶液的组合物，该化合物为与选自氯离子，硫酸根，磷酸根，和乙酸根的阴离子复合的盐，而且所说的盐是无水结晶形式的盐；以及药物上可接受的赋形剂；b)适量液体介质。
附图
的简要说明图IA显示MM HCl的单水合物结晶形式的X射线衍射图。
图IB显示MM HCl的无水结晶形式的X射线衍射图。
图IIA显示含非结晶形式的MM HCl的组合物的X射线衍射图。
图IIB显示含带多乙氧基醚80的无水结晶形式的MM HCl的组合物的X射线衍射图。
图IIC显示含不带多乙氧基醚80的无水结晶形式的MM HCl的组合物的X射线衍射图。
图IIIA显示非结晶形式的MM HCl的热差分析(以下用DSC表示)温谱图。
图IIIB显示冻干处理之后的无水结晶形式的MM HCl的DSC温谱图。
本发明的详细描述下面的定义用于进一步说明和限定此处用来描述本发明的各术语的含义和范围。
此处所用术语“药物上可接受的盐”指与阴离子如氯离子，硫酸根，柠檬酸根，乙酸根，马来酸根，和/或甲磺酸根(mesylate)离子复合的化合物。在本公开中，式I化合物可与各种阴离子复合形成相应的药物上可接受的盐，例如，盐酸和霉酚酸吗啉代乙酯可以形成药物上可接受的盐，(E)-6-(1，3-二氢-4-羟基-6-甲氧基-7-甲基-3-氧-5-异苯并呋喃基)-4-甲基-4-己烯酸2-(4-吗啉代)乙酯盐酸盐。
此处所用术语“结晶形式”或“晶体形式”意指某物质具有确定的形状且结构单元有序排列，即以固定的几何图形或晶格排列。
此处所用术语“结晶单水合物”或“单水合物结晶”意指某物质的结晶形式包含单个水分子。
此处所用术语“无水结晶物”或“无水结晶”意指某材料的晶体形式不含水分子。
此处所用术语“非结晶形式”意指某材料没有确定的形状且结构单元无序排列。
此处所用术语“药物上可接受的赋形剂”指用在药物制剂中是可接受的那些物质，而且加到制剂中可提高该制剂的稳定性和寿命(如填充剂，澄清剂和缓冲剂)。
此处所用术语“填充剂”指用来起填充作用的化合物如葡萄糖，甘露糖醇和/或蔗糖，并提供基体结构和稳定制剂，即用以减缓或防止治疗剂分解。
此处所用术语“澄清剂”指用来减少溶液浊度的表面活性剂类型的化合物，如多乙氧基醚80。
此处所用术语“缓冲剂”指当加入H或OH时可以抗拒pH变化的化合物。缓冲剂在其滴定曲线正中点的pH值处时，即其中质子受体的浓度等于质子供体的浓度，且pH等于pK’时的抗拒力最大。缓冲剂可以是单个化合物如柠檬酸，也可以是几种化合物的结合。
此处所用术语“q.s.”的意思是添加充足的数量以达到某种状态(例如，体积，如将溶液调至所需的体积)。
此处所用术语“q.s.至pH”的意思是添加足量的酸或碱将溶液调至所需的pH(例如，q.s.至pH3.4的意思是添加足量的酸或碱将溶液调至所需的pH3.4)。
此处所用术语“WFI”指符合美国药典(U.S.P.)所定规格的注射用水。
此处所用术语“速率”指在整个温度范围内温度的变化(即增加或减少)率。
术语“重组”指组合物与适当液体介质如水(WFI)，5％葡萄糖溶液或盐水组合形成静脉用溶液的过程。
此处所用术语“疗法”或“治疗”意思是对哺乳动物的疾病的任何处理，包括(i)预防疾病，即使疾病的临床症状不发生；(ii)抑制疾病，即阻止临床症状的发展；和/或(iii)减轻疾病，即使临床症状消退。
此处所用术语“有疗效量”是指当给所需的哺乳动物给药时，MM的量足以进行有效的治疗。构成“有疗效量”的量将取决于化合物，患者条件或疾病种类及其严重程度，以及需要治疗的哺乳动物的种类，但本领域普通技术人员可用已有知识和本公开的内容来确定。
此处所用术语“％w/v”意思是单个成分的重量(g)相对于整个制剂的总体积的白分比。例如，500mg成分占8ml总体积的6.25％w/v，或500mg成分占5ml总体积的10％w/v。
此处所用术语“％v/v”意思是单个成分的体积相对于整个制剂的总体积的白分比。例如，1.17ml成分占8ml总体积的14.6％v/v，或1.17ml成分占5ml总体积的23.4％v/v。
命名霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯，即“MM”，也称霉酚酸吗啉代乙酯[即(E)-6-(1，3-二氢-4-羟基-6-甲氧基-7-甲基-3-氧-5-异苯并呋喃基)-4-甲基-4-己烯酸2-(4-吗啉代)乙酯]，其结构和编号规则如下 式I起始原料霉酚酸吗啉代乙酯及其某些简单酯衍生物是根据此前已经引入本文作为参考的、授权于1988年6月28目的、名称为“霉酚酸吗啉代乙酯和药物组合物”的美国专利4,753,935号，或根据在此引入作为参考的、申请日是1992年12月18日的、在审时的申请号是07/993,146，现在是美国专利5,247,083号的所述制备的。
多乙氧基醚80以商标名“Tween 80”出售，是从ICI Americas，Inc.，Wilmington，Delaware购得。
适当纯度的柠檬酸，氢氧化钠(NaOH)和盐酸(HCl)是从AldrichChemical Company购得。
注射用水(WFI)指符合美国药典为注射用溶液制定的纯度标准的水。
制剂制备概述用被称作“化合”的合并制剂各组分的方法，产生本体溶液。将该本体溶液冻干[即在减压和各种温度条件下除去水和/或溶剂(如甲醇，乙醇或异丙醇)的方法]，生成“组合物”。静脉用制剂是在使用时由该组合物和适当液体介质重新组合得到。然后，该静脉用制剂便可以使用了。无水结晶形式的MM HCl组合物的制备化合过程将约23-25.3％w/v的酸，优选约24.4％w/v 1N HCl(如果用浓HCl，所用％比例应适当减小)，和约0.05-0.5％w/v，优选约0.1％w/v的柠檬酸加到体积接近50％最终本体溶液体积的注射用水(WFI)[比如，最终本体溶液的体积为10升，所用水(WFI)即为5升]中。将约0.01-2％w/v，优选约0.5％w/v的澄清剂，如多乙氧基醚80，和约10％w/v MM溶解于上述溶液，再加入约0.10-10％v/v，优选约3.2％v/v乙醇。用1N HCl或2NNaOH将溶液的pH调至约3.4。加入足量注射用水(WFI)使本体溶液的体积达到最后所需的体积(例如，对2000个20cc小瓶，每瓶装5cc的一批来说，本体溶液的最终体积是10升)。再将溶液的pH调至约3.4。无菌条件下过滤溶液(比如用0.2μm滤膜)。
将本体溶液装入各小瓶，每瓶所装溶液的体积为小瓶容积的25％(比如，对20cc的小瓶，每瓶装本体溶液约5ml)，然后用冻干塞(即适于冻干的塞子)部分塞住小瓶以便冻干溶液。
无水结晶形式的冻干过程含本体溶液的、用冻干塞部分塞住的小瓶根据下列方法冻干(测量置于冻干箱内架子上的小瓶温度)a.小瓶放入之前，将温度平衡在约22-28℃，优选约25℃。放入小瓶期间保持该温度。放入小瓶后，温度继续保持约10-30分钟，优选约20分钟。
b.用约1-3小时，优选约2小时20分钟将温度降至约5--15℃，优选-10℃(即以-0.25℃/min速率降温)。
c.将温度保持在约5--15℃，优选-10℃约1小时30分钟至3小时30分钟，优选约2小时30分钟。
d.用1-3.5小时，优选约2小时将温度降至约-37--43℃，优选约-40℃(即以-0.25℃/min速率降温)。
e.将温度在约-37--43℃，优选约-40℃保持约3-7小时，优选约5小时。
f.将冻干箱内压力降至约70-130mTorr，优选约100mTorr。
g.冻干箱内达到所需的压力后，在约-20--60℃，优选-40℃保持温度约3-7小时，优选约5小时。
h.用约6-10小时，优选约8小时将温度升至-13--19℃，优选-16℃(即以约0.05℃/min速率升温)，并继续保持该温度约8-12小时，优选约10小时。
i.用约5-9小时，优选约7小时10分钟升温至约50-78℃，优选约70℃(即以约0.20℃/min速率升温)，并保持该温度直到步骤k完成。
j.保持温度至少7-13小时，使所有产品热电偶(即靠近小瓶的温度传感器)的温度在约57-63℃范围内。
k.用约2-4小时，优选约3小时将温度降至约22-28℃，优选约25℃(即以-0.25℃/min速率降温)，并保持此温度约1-3小时，优选约2小时。
l.用氮气(NF)和不少于15分钟时间将冻干箱内压力缓慢升至约3-12psi，优选约4-8psi，更优选约4psi。小瓶在偏压下被塞住。
m.将冻干箱内压力升至大气压。如果盖上瓶塞后不益从箱内取出小瓶，可将小瓶温度维持在约23-27℃，优选约25℃最多24小时。压封小瓶。
组合物封在小瓶中直到使用时重新组合。
静脉用制剂的制备静脉用制剂是通过上述组合物与适当的液体介质如注射用水(WFI)或5％葡萄糖溶液重组合制备的。所需浓度的静脉用制剂可以通过将适量组合物与适当体积的液体介质重组合得到。所需浓度的静脉用制剂为需要用本发明静脉内药物制剂的动物提供有疗效量的MM，并在动物体内保持活性成分的疗效水平。有疗效剂量的大小将取决于该静脉用制剂传输到动物(体内)的速率和静脉用制剂的浓度。例如，两瓶组合物[即每瓶500mgMM(相当于542mg MM HCl)]与两瓶5％葡萄糖溶液(每瓶14ml 5％葡萄糖溶液)重组合形成总共28ml溶液。将该重组溶液注入装有葡萄糖溶液的输液包中并q.s.至166ml，得到含有6mg/ml MM的适于静脉输液给药的溶液。输液包内的液体介质中MM的浓度最好为约3-10mg/ml，优选约5-6mg/ml。
制备后，在25℃贮存的24小时的期间内，溶液没有显示出显著的标记浓度(％LS)损失。值得注意的是，虽然正确的药物应用实践要求重组溶液在重组合后被立即使用，但如果延期给药，本重组溶液的稳定性不会受到有害的影响。
本发明组合物可用含该组合物小瓶的形式，或装有一个或多个小瓶，其中含有组合物和适量液体介质的药盒的形式提供给药房或医院的分发药品的人们。
优选实例最优选的是无水结晶形式的霉酚酸吗啉代乙酯盐酸盐，即无水结晶形式的(E)-6-(1，3-二氢-4-羟基-6-甲氧基-7-甲基-3-氧-5-异苯并呋喃基)-4-甲基-4-己烯酸2-(4-吗啉代)乙酯盐酸盐。
另一个最优选的是含有无水结晶形式的MM HCl和药物上可接受的赋性剂的组合物。
优选方法优选的化合(即制备本体溶液的)方法是温度保持在约21-33℃的化合方法。
特别优选的化合方法是温度保持在约25℃±2℃的方法。
优选的化合方法是本体溶液的pH调至3.4±0.5的方法。
特别优选的化合方法是本体溶液的pH调至3.4±0.2的方法。
制备含无水结晶形式的MM HCl的药物组合物的冻干过程优选温度以-0.25℃/min±0.1℃的速率从25℃降至5--15℃的方法。
最优选的是温度以-0.25℃/min±0.05℃的速率从25℃降至-10℃的方法。
制备含无水结晶形式的MM HCl的药物组合物的冻干过程优选温度以-0.25℃/min±0.1℃的速率从5(--15)℃降至-15--40℃的方法。
最优选的是温度以-0.25℃/min±0.05℃的速率从-10℃降至-40℃的方法。
制备含无水结晶形式的MM HCl的药物组合物的冻干过程优选温度以0.20℃/min±0.1℃的速率从-16℃升至70℃的方法。
最优选的是温度以0.20℃/min±0.05℃的速率从-16℃升至70℃的方法。
应用本发明可用于治疗自身免疫疾病，牛皮癣，炎症(特别是包括风湿性关节炎)，肿瘤和病毒疾病，自身免疫疾病包括糖尿病，同种移植排斥，尤其包括心脏移植排斥，胰腺移植排斥和肾脏移植排斥。
实施例下列实施例可使本领域技术人员更清楚地了解和实践本发明。它们仅仅是对本发明的说明和代表，而不应被认为是对本发明范围的限制。
实施例1无水结晶形式的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯盐酸盐的制备1A.与氯离子复合制备无水结晶MM如美国专利4,753,935所述制备霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯盐酸盐。将E-6-(1，3-二氢-4-羟基-6-甲氧基-7-甲基-3-氧-5-异苯并呋喃基)-4-甲基-4-己烯酸酯(38.0g)溶解于异丙醇(200ml)，并将该溶液加到氯化氢(10.0g)的异丙醇(150ml)溶液中。过滤收集盐酸盐并真空干燥(m.p.154-155℃)。
通过在60℃加热单水合物结晶盐酸盐形式的MM HCl30分钟，制得无水结晶形式的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯盐酸盐。该化合物的无水结晶形式由X射线结晶谱证实，示于图IB。
我们发现，无水结晶形式的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯盐酸盐在典型静脉用制剂溶液(如5％葡萄糖溶液或注射用水)中有近84mg/ml溶解性(观察3天)，相比之下，对单水合物结晶形式，只有近40mg/ml。
1B.与不同阴离子复合制备MM的无水结晶盐用实施例1A所述方法并使用带不同阴离子的下列化合物作起始原料，单水合物结晶形式的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯硫酸盐，单水合物结晶形式的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯磷酸盐，和单水合物结晶形式的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯乙酸盐，进行制备得到下列化合物，无水结晶形式的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯硫酸盐，无水结晶形式的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯磷酸盐，和无水结晶形式的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯乙酸盐。
实施例2无水结晶形式的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯HCl的成批制备2A.用1N HCl批量制备2000个20cc小瓶的制剂成分 含量/瓶霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯500.0mg1N HCl1220.0mg无水柠檬酸5.0mg多乙氧基醚80 25.0mg乙醇(95％)*0.16mlWFI*qs 5.0ml1N HCl/NaOH qs至pH3.4*冻干期间除去批量(制作规模2000个20cc小瓶)制备每瓶含542mg无水结晶形式MM HCl(即500mg MM)的组合物。
根据下列方法合并各成分。
1.将2440g 1N HCl和10g柠檬酸与足量注射用水(WFI)混合，得到7.5升溶液。
2.将50g Tween80溶解于步骤1所得溶液。
3.将1000g MM溶解于步骤2所得溶液。
4.将320ml乙醇加入步骤3所得溶液。
5.将步骤4所得溶液的pH调至3.4(±0.2)。
6.加入足量的水(WFI)使溶液体积达到10升。
7.无菌条件下用两个10″Millipore Durapore 0.2μm滤膜(CVGL)过滤溶液。
8.将步骤7所得滤液装入2000个20cc小瓶，即每个20cc瓶装5ml滤液，然后用冻干塞部分塞住。
9.将小瓶装入冻干器(Dura-Stop MP Freeze Dryer，FTS系统)，其中温度稳定在25℃。
10.冻干过程a.从放有小瓶的架子上测量温度，热电偶安装在各小瓶上以测量它们的温度。
b.冻干箱温度平衡在25℃。装好的小瓶放入冻干箱，温度继续保持在25℃20分钟。
c.用2小时20分钟将架子上的温度从25℃降至-10℃(降温速率-0.25℃/min)。
d.温度保持在-10℃2.5小时。
e.用2小时将温度降至-40℃(降温速率-0.25℃/min)。
f.温度保持在-40℃5.0小时。
g.冻干箱内压力降至100mTorr。
h.冻干箱内压力达到100mTorr(近30分钟)后，再保持温度在-40℃5小时。
i.用8小时将温度升至-16℃(升温速率0.05℃/min)，并继续保持在-16℃10小时。
j.用7小时10分钟升温至70℃(升温速率0.20℃/min)，并保持在65℃直到全部热电偶温度指示为60℃，之后再保持至少7小时(整个时间约11小时)。
k.用3小时将温度降至25℃(降温速率-0.25℃/min)，并保持25℃2小时。
l.用氮气(NF)和不少于15分钟时间将冻干箱内压力逐渐升至7.5psi。
m.小瓶在部分压力下被塞住。
n.用过滤空气将冻干箱内压力升至大气压。
11.然后将小瓶密封。
特性分析数据(用示于图IIB的X射线结晶谱数据)证实所得组合物含有无水结晶形式的MM HCl。
2B.用浓HCl批量制备2000个20cc小瓶的制剂成分 含量/瓶霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯500.00mg浓HCl 119.25mg无水柠檬酸5.0mg多乙氧基醚80 25.0mg乙醇(95％)*0.16mlWFI*qs5.0ml1N HCl/NaOHqs至pH3.4*冻干期间除去批量(制作规模2000个20cc小瓶)制备每瓶含542mg无水结晶形式MM HCl(即500mg MM)的组合物。
根据下列方法合并各成分1.将119.25g浓HCl与足量注射用水(WFI)合并，得到7.2升溶液。再将10g柠檬酸溶解于该HCl溶液。
2.将50g Tween80溶解于步骤1所得溶液。
3.将1000g MM溶解于步骤2所得溶液。
4.将320ml乙醇加入步骤3所得溶液。
5.将步骤4所得溶液的pH调至3.4(±0.2)。
6.加入足量的水(WFI)使溶液体积达到10升。
7.无菌条件下用两个10″Millipore Durapore 0.2μm滤膜(CVGL)过滤溶液。
8.将步骤7所得滤液装入2000个20cc小瓶，即每个20cc瓶装5ml滤液，然后用冻干塞部分塞住。
9.将小瓶装入冻干器(Dura-Stop MP Freeze Dryer，FTS系统)，其中温度稳定在25℃。
10.冻干过程a.从放有小瓶的架子上测量温度，热电偶安装在各小瓶上以测量它们的温度。
b.冻干箱温度平衡在25℃。装好的小瓶放入冻干箱，温度继续保持在25℃20分钟。
c.用2小时20分钟将架子上的温度从25℃降至-10℃(降温速率-0.25℃/min)。
d.温度保持在-10℃2.5小时。
e.用2小时将温度降至-40℃(降温速率-0.25℃/min)。
f.温度保持在-40℃5.0小时。
g.冻干箱内压力降至100mTorr。
h.冻干箱内压力达到100mTorr(近30分钟)后，再保持温度在-40℃5小时。
i.用8小时将温度升至-16℃(升温速率0.05℃/min)，并继续保持在-16℃10小时。
j.用7小时10分钟升温至70℃(升温速率0.20℃/min)，并保持在65℃直到全部热电偶温度指示为60℃，之后再保持至少10小时。
k.用3小时将温度降至25℃(降温速率-0.25℃/min)，并保持25℃2小时。
l.用氮气(NF)和不少于15分钟时间将冻干箱内压力逐渐升至7.5psi。
m.小瓶在部分压力下被塞住。
n.用过滤空气将冻干箱内压力升至大气压。
11.然后将小瓶密封。
特性分析数据(用示于图IIB的X射线结晶谱数据)证实所得组合物含有无水结晶形式的MM HCl。
2C.其它静脉用制剂的批量规模类似地，依照实施例2A或2B所述，成比例地增加各成分的量，可以成批如4000个20cc小瓶，6000个20cc小瓶，8000个20cc小瓶地制备该制剂。
2D.不同MM的无水结晶盐的静脉用制剂按照实施例2A或2B所述方法，用其它无水结晶形式的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯(例如，按实施例1B所述制备的硫酸盐，磷酸盐和乙酸盐)代替无水结晶形式的霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯盐酸盐，可以得到相应的静脉用制剂。
实施例3霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯盐酸盐的变型剂下列含有无水结晶形式MM HCl的制剂的批量制备可以按照实施例2所述方法进行。
a冻干期间除去b加入用以调节pH实施例4用X射线粉末衍射法测定霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯盐酸盐的组成MM HCl的结晶形式用X射线结晶法测定。在带精密聚焦管和衍射束单色仪的Nicolet X射线衍射仪上得到X射线结晶谱数据。所得单水合物结晶形式和无水结晶形式的MM HCl化合物的X射线粉末衍射图分别由图IA和IB表示。
所得含有非结晶形式MM HCl，无水结晶形式MM HCl(含多乙氧基醚80，实施例3，制剂A)和无水结晶形式MM HCl(不含多乙氧基醚80，实施例3，制剂B)的组合物的X射线粉末衍射图分别由图IIA、IIB和IIC表示。
示于图IIB和图IIC的X射线结晶谱数据表示两种组合物中的结晶形式的MM HCl的形成不受多乙氧基醚80存在的影响，即无水结晶MM HCl不受多乙氧基醚80影响。
示于图IIB、IIC和IB的X射线结晶谱数据表示在有和没有多乙氧基醚80的组合物中的MM HCl是无水结晶形式。
实施例5用热差分析测定非结晶和无水结晶形式霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯盐酸盐本实施例讲述用热差分析(DSC)区分MM HCl的各种晶体形式(如非结晶，单水合物和无水形式)。DSC差温图用Perkins Elmer DSC-7System记录。DSC测温曲线代表热流为温度的函数，因此，可测定化合物的熔点。
非结晶形式MM HCl的DSC测温曲线(图IIIA)表示升温起始点在-8.65℃，熔化吸热起始点在38.50℃，熔点为44.77℃。
另一方面，冻干过程之后的无水结晶形式MM HCl的DSC测温曲线(图IIIB)表示在145.41-155.0℃的熔化发生之前没有相变化。
MM HCl单水合物的熔点是154-155℃(如美国专利4,753,935所述，授权于1988年6月28日，见实施例3)。
因此，MM HCl的非结晶，单水合物结晶和无水形式可以由它们的DSC测温曲线很容易地区分。
至此，本发明已经用其具体实例说明。然而，本领域技术人员应该明白，不脱离本发明真正精神和范围的各种变化和等价替换是允许的。此外，为达到本发明的目的，精神和范围，可以进行许多改变包括材料，组合物，方法，处理步骤或步骤，以适应特殊情况。所有这些改变都属于在下面所附的权利要求的范围之内。
权利要求
1.下式的无水结晶化合物， 其中该化合物为与选自含有氯离子，硫酸根，磷酸根和乙酸根基团的阴离子复合的盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中阴离子是氯离子。
3.根据权利要求2所述的无水结晶化合物，其特征在于熔点为约145-155℃。
4.根据权利要求3所述的无水结晶化合物，其进一步特征在于示于图IIIB的热差分析测温曲线表示。
5.根据权利要求1所述的无水结晶化合物，其进一步特征在于示于图IB的粉末X射线衍射图。
6.无水结晶E-6-(1，3-二氢-4-羟基-6-甲氧基-7-甲基-3-氧-5-异苯并呋喃基)-4-甲基-4-己烯酸2-(4-吗啉代)乙酯盐酸盐。
7.一种适于制备静脉用制剂水溶液的组合物，含有下式化合物和药物上可接受的赋形剂， 其中该化合物为与选自含有氯离子，硫酸根，磷酸根和乙酸根基团的阴离子复合的盐，所说盐是无水结晶形式。
8.根据权利要求7所述的组合物，其中药物上可接受的赋形剂仅仅是多乙氧基醚80。
9.根据权利要求8所述的组合物，其特征在于示于图IIB的粉末X射线衍射图。
10.权利要求7的组合物，其中药物上可接受的赋形剂是多乙氧基醚80和柠檬酸。
11.一种制备适于配制静脉用制剂水溶液的组合物的方法，该制剂含有下式化合物和药物上可接受的赋形剂， 其中该化合物是与选自含有氯离子，硫酸根，磷酸根和乙酸根基团的阴离子复合的盐，所说盐是无水结晶形式；所说方法包括a)化合所说化合物和药物上可接受的赋形剂形成本体溶液，所说本体溶液的pH被调至约3.2-3.6；b)将所说本体溶液装入小瓶；以及c)冻干所说装好溶液的小瓶，形成所说组合物。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所说冻干步骤包括a)从约25℃降温至约-40℃；b)降压至约100mTorr；c)从约-40℃升温至约70℃；d)从约70℃降温至约25℃。
13.根据权利要求11所述的方法，其中所说冻干步骤包括a)以速率约-0.25℃/min从约25℃降温至约-10℃；b)保持温度在-10℃约2小时30分钟；c)以速率约-0.25℃/min从约-10℃降温至约-40℃；d)降压至约100mTorr；e)以速率约0.05℃/min从约-40℃升温至约-16℃；f)以速率约0.20℃/min±0.1℃从约-16℃升温至约70℃；g)从约70℃降温至约25℃。
14.下式化合物的用途， 其中该化合物为与选自含有氯离子，硫酸根，磷酸根和乙酸根基团的阴离子复合的盐，所说盐是无水结晶形式；用于治疗同种移植排斥，特别是心脏移植排斥，胰腺移植排斥和肾脏移植排斥，以及自身免疫疾病，牛皮癣，炎症，尤其包括风湿性关节炎，糖尿病，肿瘤，病毒疾病。
15.一种静脉用制剂，该制剂是通过合并液体介质与含有下式化合物和药物上可接受的赋形剂的组合物制备的， 其中该化合物是与选自含有氯离子，硫酸根，磷酸根和乙酸根基团的阴离子复合的盐，所说盐是无水结晶形式。
16. 一种制备静脉用制剂的方法，包括混合下列物质a)下式化合物 其中该化合物是与选自含有氯离子，硫酸根，磷酸根和乙酸根基团的阴离子复合的盐，所说盐是无水结晶形式；b)药物上可接受的赋形剂；以及c)液体介质。
17.一种用于制备静脉用制剂的药包，包括a)含有下式化合物和药物上可接受的赋形剂的组合物， 其中该化合物为与选自含有氯离子，硫酸根，磷酸根和乙酸根基团的阴离子复合的盐，所说盐是无水结晶形式；b)适量液体介质。
全文摘要
下式化合物的无水结晶物，组合物，静脉用制剂和它们的药盒，其中该化合物是与选自含有氯离子，硫酸根，磷酸根和乙酸根基团的阴离子复合的盐，特别是复合盐酸盐。
文档编号A61K31/5377GK1131420SQ94193413
公开日1996年9月18日 申请日期1994年9月12日 优先权日1993年9月15日
发明者罗杰·成恩·福, 德梅·利恩, 杰佛瑞·S·夫雷特曼, 米切尔·C·瑞左里奥 申请人:辛泰克斯(美国)公司