一种应用顶空-气相色谱/质谱法测定食品中亚硝酸盐的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食品安全检测领域，具体涉及一种应用顶空-气相色谱/质谱法测定 食品中亚硝酸盐的方法。
【背景技术】
[0002] 天然新鲜食物当中，比如蔬菜含有很多硝酸盐，随着时间的延长，食物变质，硝酸 盐会慢慢的生成生亚硝酸盐；亚硝酸盐也是肉制品生产中最常用的发色剂，使肉制品呈现 新鲜的色泽。冷冻罐头及酱制品中也会存有。亚硝酸盐很容易与胺化合，生成为亚硝胺。亚 硝胺具有强烈的致癌作用，因此，进行食品中亚硝酸盐的检测已成为质量安全保证的重要 关注点。
[0003] 目前国标中亚硝酸盐的测定方法是盐酸萘乙二胺分光光度法，常用的有色谱法、 光谱法和电化学法等三大类。其中光谱法一般需要显色，操作较为复杂，检出限高，干扰大。 特别是当样品存在NCV时，容易对NO，在紫外区吸收测定产生强烈干扰。电化学法测定亚 硝酸盐时，如伏安法测定亚硝酸根，样品中的杂质会毒化固态电极，降低电极的灵敏度和准 确度。因此需要建立一种操作简便、分析速度快、准确度高、灵敏度高的亚硝酸盐测定方法。
【发明内容】
[0004] 为了克服上述技术缺陷，本发明提供了一种应用顶空-气相色谱/质谱法测定食 品中亚硝酸盐的方法。
[0005] 本发明的一种应用顶空-气相色谱/质谱法测定食品中亚硝酸盐的方法，包括如 下步骤：
[0006] (1)将待测食品样品经超声提取；
[0007] (2)将步骤（1)中提取后的溶液加入乙酸锌、亚铁氰化钾溶液和纯水，沉淀蛋白 质，过滤；
[0008] (3)将步骤（2)得到的滤液在酸性条件下与甜蜜素作用，置于顶空瓶中，用气相色 谱-质谱测定分析；
[0009] (4)以衍生产物环己烯的响应峰面积对应亚硝酸盐含量作校正曲线进行定量分 析。
[0010] 所述步骤（1)中的食品样品和步骤（2)中的乙酸锌、亚铁氰化钾溶液和纯水的质 量体积比为：lg食品样品：2. 5ml乙酸锌溶液：2. 5ml亚铁氰化钾溶液：15ml纯水。
[0011] 所述乙酸锌溶液的浓度为219g/L。
[0012] 所述亚铁氰化钾溶液的浓度为109g/L。
[0013] 所述步骤⑵中的过滤采用滤纸过滤。
[0014] 所述步骤（3)中的酸性条件为加硫酸溶液。
[0015] 所述步骤（3)中的滤液、硫酸溶液的体积比为5ml滤液：5ml硫酸溶液，所述硫酸 溶液的体积百分比浓度为1% ;所述甜蜜素的质量体积比浓度为0. 1%。
[0016] 所述步骤（3)中的测定分析的条件如下：
[0017] 所述顶空的测定条件为：
[0018] a)气液比：2/3 ;
[0019] b)平衡温度：75°C;
[0020] c)平衡时间：5min;
[0021] d)密封针温度：75°C;
[0022] e)转速：500r/min;
[0023] 所述色谱的测定条件为：
[0024] a)毛细管柱：HP-5MS(30mX0. 25mmX0. 25ym);
[0025] b)载气：以高纯He为载气（99. 999 %以上），流量1.OmL/min;
[0026] c)进样模式：分流进样，分流比5 :1 ;
[0027] d)进样量：250yL;
[0028] e)进样 口温度：180°C;
[0029] f)接口温度：275°C;
[0030] g)升温程序：45°C保持 40min，10°C/min升至 200°C，保持 5min。
[0031] 所述质谱的测定参数为：
[0032] a)溶剂延迟：lmin;
[0033] b)电子轰击离子化（EI)方式：70eV;
[0034] c)离子源温度（EI) :230°C;
[0035] d)四极杆温度：150°C;
[0036] e)电子倍增器、离子聚焦和入口透镜值均通过自动调谐计算；
[0037] f)扫描方式：全扫描。
[0038] 本发明检测食品中亚硝酸盐的方法，定量检测限为100yg/kg。亚硝酸钠标准在 0.lmg/L-5mg/L浓度下，响应值与质量浓度呈良好的线性关系。相关系数大于0.998。被测 物中亚硝酸盐的回收率应在85. 3~102%，相对标准偏差（RSD)〈5.0%。
[0039] 本发明的方法与传统光谱法相比，操作简便，检测限低，灵敏度与准确度高，重现 性好。利用三合一自动进样系统，真正实现高通量分析，检测工作效率得到极大提高。
【附图说明】
[0040] 图1为不同气液比与液体每增加1ml增加的峰面积的关系图；
[0041] 图2为平衡温度对峰面积的关系图；
[0042] 图3为平衡时间对峰面积的关系图；
[0043] 图4为亚硝酸盐标准品的总离子色谱图；
[0044] 图5为亚硝酸盐衍生产物标准品的质谱图；
[0045] 图6为亚硝酸盐浓度和响应值的相关系数图。
【具体实施方式】
[0046] 为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这 些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未提及的具体实验 方法，通常按照常规实验方法进行。
[0047] 仪器和耗材：
[0048] 气相色谱-质谱联用仪：四极杆质谱检测器，配EI源； Aglient7890A-5975C(Aglient公司，美国）；
[0049] 振荡器（MS2minishaker)，IKA;
[0050] 分析天平（精确到 0? 001g)，CHYOMJ-300 ;
[0051] 离心机，HITACHI，himacCT6D;
[0052] 精密PH试纸，上海三爱思试剂有限公司。
[0053] 试剂与溶液：
[0054] 所用试剂除注明外均为分析纯，水为去离子水。
[0055] 试剂包括：硫酸、亚铁氰化钾、乙酸锌、甜蜜素、标准物质及标准溶液、亚硝酸钠 (纯度彡99.0% )。
[0056] 标准溶液配制与储存如下：
[0057] 标准储备液：分别准确称取标准品0. 025g(精确到0.OOOlg)，置于25mL容量瓶， 并用水定容至刻度，混匀。配制成亚硝酸钠贮备溶液，浓度为l〇〇〇ug/mL。在4°C避光存放， 保存期一年。
[0058] 标准中间混合溶液：分别吸取亚硝酸钠贮备溶液10.OmL，用水定容至100mL得到 100yg/mL的标准溶液，在4°C避光存放，保存期六个月。
[0059] 标准工作液：用水逐级稀释标准中间溶液，现配现用。
[0060] 实施例1 :本发明的一种应用顶空-气相色谱/质谱法测定食品中亚硝酸盐的方 法的建立1、提取步骤
[0061] 称取lg食品样品放入离心管中加入2. 5ml乙酸锌溶液（浓度为219g/L)、2. 5ml 亚铁氰化钾溶液（浓度为l〇9g/L)，再加纯水15ml，充分振摇混匀，混匀后超声提取20min， 用滤纸过滤，收集滤液备用。
[0062] 取去蛋白滤液5ml、