一种人体血清中降钙素原定量测定方法、试剂及试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本申请涉及一种人体血清中降钙素原定量测定方法、试剂及试剂盒。
【背景技术】
[0002] 降钙素原是一种蛋白质，当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能 衰竭时它在血浆中的水平升高。自身免疫、过敏和病毒感染时降钙素原不会升高。局部有 限的细菌感染、轻微的感染和慢性炎症不会导致其升高。细菌内毒素在诱导过程中担任了 至关重要的作用。
[0003] 降钙素原反映了全身炎症反应的活跃程度。影响降钙素原水平的因素包括被感染 器官的大小和类型、细菌的种类、炎症的程度和免疫反应的状况。另外，降钙素原只是在少 数患者的大型外科术后1~4d可以测到。
[0004] 降钙素原水平的升高出现在严重休克、全身性炎症反应综合征（SIRS)和多器官 功能紊乱综合征（MODS)，即使没有细菌感染或细菌性病灶。但是，在这些病例中降钙素原水 平通常低于那些有细菌性病灶的患者。从肠道释放细胞因子或细菌移位可能引起诱导。
[0005] 降钙素原是诊断和监测细菌炎性疾病感染的一个参数。降钙素原的测定可以预示 为：作为一个急性的参数来鉴别诊断细菌性和非细菌性感染和炎症。监测有感染危险的患 者以及需要重症监护患者，用来探测细菌感染的全身影响或检测脓毒性并发症；评价严重 炎症性疾病临床进程及预后。
[0006] 目前，检测降钙素原的方法有很多，不仅可以定性，亦可以定量，常用的方法有：凝 胶层析及高效液相色谱分析、酶联免疫吸附测定、免疫发光法和胶体金层析法。这些方法具 有操作繁琐、耗时长、价格昂贵、过度浪费资源的缺点，不适于常规检验，尤其是大规模流行 病学检查或临床大批量标本诸多项目的同时检测。
【发明内容】
[0007] 本申请的目的是一种人体血清中降钙素原定量测定方法、试剂及试剂盒。
[0008] 本申请采用了以下技术方案：
[0009] 本申请的一方面公开了一种定量测定人体血清中降钙素原含量的试剂，该试剂 由分别放置的试剂I和试剂Π 组成，其中，所述试剂I含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、聚 乙二醇8000、氯化钠；所述试剂II含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、羊抗人降钙素原抗体、吐 温-20、小牛白蛋白、乳胶。
[0010] 进一步的，所述试剂I中磷酸二氢钠含量为50-150mmol/L，磷酸氢二钠含量为 50-150mmol/L，聚乙二醇 8000 的浓度为 1. 5-2. 8 %，氯化钠含量为 0. 1-0. 5mol/L。
[0011] 进一步的，所述试剂I中磷酸二氢钠含量为100mm〇l/L，磷酸氢二钠含量为 100mmol/L，聚乙二醇8000的浓度为2. 5 %，氯化钠含量为0. 22mol/L。
[0012] 进一步的，所述试剂II中磷酸二氢钠含量为50-150mmol/L，磷酸氢二钠含量为 50-150mmol/L，羊抗人降钙素原抗体含量为0. 1-0. 5g/L，吐温-20含量为0. 05-0. 5% (V/ V)，小牛白蛋白含量为0. l-o. 5%，乳胶含量为l-2g/L。
[0013] 进一步的，所述试剂II中磷酸二氢钠含量为100mmol/L，磷酸氢二钠含量为 100mmol/L，羊抗人降钙素原抗体含量为0. 2g/L，吐温-20含量为0. 1 %，小牛白蛋白含量为 0. 4% (V/V)，乳胶含量为 I. 4g/L。
[0014] 本申请的另一方面提供一种定量测定人体血清中降钙素原含量的试剂盒，其中装 有上述定量测定人体血清中降钙素原含量的试剂，该试剂由分别放置的试剂I及试剂II组 成。
[0015] 本申请的另一方面提供一种定量测定人体血清中降钙素原含量的方法，该方法包 括向血清样品中加入所述试剂I，37°C孵育1-5分钟，空白管调零，在一定的波长下测定样 品吸光度Al ;然后向样品中加入试剂II，继续孵育5分钟后在上述波长下测定吸光度A2， 由下式（1)计算Λ A样本；用同样的方法测定校准液的吸光度值Λ A标准；再通过下式（2) 计算得到血清样品的降钙素原含量：
[0016] AA = Α2-Α1 (1)
[0017] 血清中降钙素原含量（ng/mL) = (ΛΑ样本-ΛΑ空白V(AA标准-ΛΑ空 白）X标准液浓度（2)
[0018] 本方法的原理为：将样品中的降钙素原与试剂中羊抗人降钙素原抗体的致敏乳胶 颗粒反应，出现凝集反应，在510nm波长检测其吸光度的变化，其变化程度与样本中的降钙 素原含量成正比。
[0019] 本发明直接定量测定人血清样品中降钙素原含量的试剂盒，是将分别放置的上述 试剂I和试剂II以不同的规格装入试剂盒包装中。该试剂盒具有多种不同的规格，可以分 别适用于目前在临床实验室普遍使用的各种国内外品牌的自动生化分析仪器。
[0020] 本发明采用的试剂盒及检测方法只需几十微升血清，无需离心或电泳等分离处 理，操作简便，可满足全自动化分析的要求，适用于大规模样品的及时准确检测。
【具体实施方式】
[0021] 实施例一
[0022] 按照下述成分和比例配置下述本发明试剂I及试剂II :
[0023] 试剂 I:
【主权项】
1. 一种定量测定人体血清中降钙素原含量的试剂，该试剂由分别放置的试剂I和试剂 II组成，其中，所述试剂I含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、聚乙二醇8000、氯化钠；所述试剂 II含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、羊抗人降钙素原抗体、吐温-20、小牛白蛋白、乳胶。
2. 根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述试剂I中磷酸二氢钠含量为 50-150mmol/L，磷酸氢二钠含量为50-150mmol/L，聚乙二醇8000的浓度为1. 5-2. 8 %，氯化 钠含量为 〇? 1-0. 5mol/L。
3. 根据权利要求2所述的试剂，其特征在于，所述试剂I中磷酸二氢钠含量为 100mmol/L，磷酸氢二钠含量为100mmol/L，聚乙二醇8000的浓度为2. 5%，氯化钠含量为 0.22mol/L〇
4. 根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述试剂II中磷酸二氢钠含量为 50-150mmol/L，磷酸氢二钠含量为50-150mmol/L，羊抗人降钙素原抗体含量为0. 1-0. 5g/ L，吐温-20含量为0. 05-0. 5 %，小牛白蛋白含量为0. 1-0. 5 %，乳胶含量为l-2g/L。
5. 根据权利要求4所述的试剂，其特征在于，所述试剂II中磷酸二氢钠含量为 100mmol/L，磷酸氢二钠含量为100mmol/L，羊抗人降钙素原抗体含量为0. 2g/L，吐温-20含 量为0. 1%，小牛白蛋白含量为0.4%，乳胶含量为1.4g/L。
6. -种定量测定人体血清中降钙素原含量的试剂盒，其特征在于，其中装有权利要求 1至5中任一所述的定量测定人体血清中降钙素原含量的试剂，该试剂由分别放置的试剂I 及试剂II组成。
7. -种定量测定人体血清中降钙素原含量的方法，该方法包括向血清样品中加入所述 试剂I，37°C孵育1-5分钟，空白管调零，在一定的波长下测定样品吸光度Al;然后向样品中 加入试剂II，继续孵育5分钟后在上述波长下测定吸光度A2,由下式（1)计算AA样本；用 同样的方法测定校准液的吸光度值AA标准；再通过下式（2)计算得到血清样品的降钙素 原含量： AA=A2-A1 (1) 血清中降钙素原含量（ng/mL) = (AA样本-AA空白V(AA标准-AA空白）X标准液浓度 （2)。
【专利摘要】本申请涉及一种定量测定人体血清中降钙素原含量的试剂，该试剂由分别放置的试剂I和试剂II组成，其中，所述试剂I含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、聚乙二醇8000、氯化钠；所述试剂II含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、羊抗人降钙素原抗体、吐温-20、小牛白蛋白、乳胶。本发明采用的试剂盒及检测方法只需几十微升血清，无需离心或电泳等分离处理，操作简便，可满足全自动化分析的要求，适用于大规模样品的及时准确检测。
【IPC分类】G01N33-68, G01N21-31
【公开号】CN104730252
【申请号】CN201510070009
【发明人】梁朝阳
【申请人】浙江凯成生物科技有限公司
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2015年2月10日